3.

ESTRUCTURA, PROPIEDADES Y FUNCIÓN DE LOS

ÁCIDOS NUCLEÍCOS
TRANSFERENCIA DE MATERIAL GENÉTICO I: CONJUGACIÓN
Macromoléculas de la célula.

Carbohidratos

Lípidos

Proteínas

Ácidos Nucleicos
ÁCIDOS NUCLEÍCOS (ADN Y ARN): COMPOSICIÓN
ACIDOS DESOXIRRIBONUCLEICO (ADN): ESTRUCTURA
ACIDOS DESOXIRRIBONUCLEICO (ADN): ESTRUCTURA

Nucleótido Purinas

Pirimidinas

Bases
nitrogenadas

Ribosa
DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR
Células Eucariota y Procariota
DNA genómico
• Forma el nucleoide.
• Es circular.
• Tiene entre 4000 a 5500 genes.
• Tiene un origen de replicación.

DNA plasmidíco
• Es DNA extracromosómico
• Circular
• Varían de tamaño
• Su replicación es independiente
del DNA genómico
• Un origen de replicación único o
múltiple.
• Una bacteria puede tener varios
plásmidos diferentes.
• Le confieren características
específicas como: resistencia,
patogenecidad y prototrofía.
 MUTANTES BACTERIANAS
Genética bacteriana
Descripción de los distintos tipos de mutaciones en
bacterias. Mutantes
Descripción*
Genética bacteriana
Naturaleza*del*cambio* Detección*del*mutante*

Mutantes Nomenclatura usada para los

Descripción* Naturaleza*del*cambio* Detección*del*mutante* diferentes tipos de mutaciones.

Medio mínimo: Medio básico para el

crecimiento bacteriano sin nutrientes
adicionales.
Protótrofo: Un microorganismo silvestre que precisa de un medio
mínimo con los nutrientes necesarios (agua, iones y fuente de
carbono) para sintetiza automáticamente las macromoléculas
esenciales.

Auxótrofo: Microorganismo mutado que carece de la capacidad

para sintetizar un nutriente esencial, y por ello debe obtenerlo (o
a su precursor) del ambiente. Son incapaces de crecer en un
medio mínimo.

Resistencia o suceptibilidad a antibióticos

 Variabilidad genética Recombinanción
RECOMBINACIÓN GENÉTICA

Tra
informa
un cro

• Transferencia de información genética de una bacteria a otra bacteria.

• Se consideran mecanismos de transferencia horizontal de información
genética.
 CONJUGACIÓN BACTERIANA

Es el proceso de transferencia de información genética

desde una célula donadora a otra receptora, promovido
por determinados tipos de plásmidos, que requiere el
contacto entre ambas células.

Los beneficios de la transferencia del material genético

al receptor pueden incluir resistencia antibiótica,
tolerancia xenobiótica o la capacidad de usar nuevos
metabolitos.
 CONJUGACIÓN BACTERIANA
Para la conjugación se requiere del contacto directo entre ambas células, con
intervención de estructuras superficiales especializadas y de funciones específicas:

• Pili sexuales en Gram negativas (E. coli).

• Contacto íntimo en Gram positivas (B. Subtilis).
CONJUGACIÓN BACTERIANA: Plásmido F en E. coli
 Descubrimiento del fenómeno
Descubrimiento de conjugación
de la conjugación

Joshua Lederberg y Edward Tatum, 1946, E. coli

met
met- bio thr +leu
- -bio +thi++
- thr leu + thi +

met
metbio
+ + thr -leu -thi -
+ bio + thr - leu - thi -

Mezclaron dos cepas

doblemente auxótrofas.

Crecimiento con una frecuencia de 1/107

• No había recombinantes sometiendo las células a extractos libres de células.

• Al añadir Dnasa no se modificaban los resultados.
• Se observó que necesitaban contacto directo entre las células de las dos
cepas.
 Bernard Davis

Las células tienen que estar en

contacto para modificarse

William Hayes, 1953

No hubo modificación genética

Si se impide el contacto físico de las cepas con un filtro de menor

tamaño que la célula no hay recombinación.
 Factor de fertilidad F
Existen dos tipos de cepas en la producción de recombinantes:

Cepas fértiles (F+): aquellas que al mezclarlas con otras, daban lugar a recombinantes.
Cepas infértiles (F-) Factor F es una unidad genética
móvil y autónoma codifica genes
Factor F de contacto y transferencia. Se
han identificado alrededor de 60
genes que lo integran.

F+

F+

Los¿Es
cruces de F + x F- dan origen a recombinantes.
el plásmido F el responsable de fenotipo
LosWT
cruces de F - x F- no dan origen a recombinantes.
después de la Conjugación?
Unidad genética autónoma y móvil, que codifica a los genes de contacto y transferencia.
Casi la totalidad de células F- adquirían la capacidad de fertilidad al final de la
conjugación.
Sin embargo las recombinantes aparecían con mucha menor frecuencia
Frecuencia de transferencia de F es mayor a la frecuencia de recombinantes
 Cepas Hrf
• Cepas que provocaban fertilidad a una alta frecuencia (1000 veces más que una
cepa F+)
• A diferencia de las cepas F+, las Hrf no suelen convertir en fértiles las cepas F- tras
el cruce conjugativo con ellas.

El plásmido F tiene
secuencias de inserción
Factor F

F+

F+

El bajo nivel de transferencia del factor F se debe a la

Lederberg Unidad
y Hayesgenética autónoma
presencia de codifica
y móvil, que unas pocas células
a los genes de Hrf en lay población
contacto F+
transferencia.
 Inserción de plásmido F al genoma bacteriano

Recombinación homóloga
dependiente de Rec A

Frecuencia de integración 10-5

Sitio de Inserción
 Conjugación Hfr x F-

• El factor F va hasta el final.

episom • Para que se transfiera el
fragmento completo se
a requiere de 100 minutos

Lineal

Circular

Debido a la integración de factor F

en el cromosoma, el factor F no se
transfiere completo a la célula
receptora, por lo cuál estos cruces
no suelen conferir el carácter F+ a los
exconjugantes del receptor
 La transferencia conjugativa
Después de 2 h
algunos exconjugantes
tiene polaridad:
se convierten en Hfr La transferencia de DNA en
células Hrf es unidireccional
y linear.
F d c b a O

Los genes entran en un

orden determinado

Generalmente la
conjugación se
interrumpe antes de
que se transfiera todo
el Hrf
F’ Factor F´
rg, 1959
• Es un elemento citoplasmático que
contiene parte del cromosoma
bacteriano.

• Es autónomo.
mento citoplasmático
• Parte del cromosoma que arrastra
ontiene parte del
contiene el gen lac.
soma bacteriano

de cromosoma que
contiene al gen lac merocigoto
El factor F puede encontrarse en las bacterias (células) en tres
posibles estados formando transformantes de tipo:

F-: Carecen de factor F (receptoras).

F+: Factor F autónomo, libre en el citoplasma.

Hrf: Factor F integrado en el cromosoma bacteriano, no se

transmite.

F´: Factor F autónomo, con un trozo del cromosoma

hospedero integrado, se encuentra en el citoplasma.
En la práctica…

 Identificar al DNA portador de la información genética.

 Conocer los mecanismo por los que una bacteria puede adquirir
un plásmido.

 Reconocer a la conjugación bacteriana como un fenómeno de

transferencia horizontal de material genético.

 Entender el mecanismo por el cual se realiza la conjugación

baceriana.
Martes 4 de Octubre • Mezclar en un tubo con 1 mL de LB + 300 μL de células E. coli JM1452Str
(Receptora) + 120 μL de células E. coli W3110/F´KmTn3 (Donadora).
• Dejar Incubar a 37 oC por 1.5 horas sin agitación.
• Sembrar por estría las bacterias transconjugantes en una caja petri con LB 2% y
estreptomicina.
• Incubar a 37 oC durante 24 h.
Viernes 7 de Octubre Jueves 6 de Octubre

• Parchar 50 colonias aisladas del medio LB (estriado del martes) en cajas petri
con medio LB con Estreptomicina (1) y medio LB con Kanamicina (2).
• Incubar a 37oC, durante 24 h.

• Observar y analizar los resultados

• Reportar el porcentaje de colonias transconjugantes (las que presentaron
resistencia a ambos antibióticos).