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1
HISTÓRICO
Importância da detecção de contaminação pirogênica:
Laboratórios
de
referência
Indústria Instituições
Farmacêutic de cuidados
a de saúde
Detecção
de
pirogênio
s
mas...
4
Teste de ativação de Monócitos (MAT)
Estilo de vida
Fator genético
5
Sangue de espécie de animal Limitações superadas
grande e raça designada
6
OBJETIVOS
7
METODOLOGIA
Endotoxina de Escherichia coli 0127:B8;
Endotoxina padrão OMS de Escherichia coli 0113:H10:K;
Estimulantes
Peptídeoglicano de Bacillus subtilis;
Ácido lipoteicoico de Staphylococcus aureus.
Estimulados por
225 μL de sangue
24h com solução
em heparina de
de pirogênio ou
lítio
veículo
10
RESULTADOS
11
LPS de E. coli LPS de E. coli 0113:H10
0127:B8
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Peptideogicano de B. Ácido lipoteicoico de S.
subtilis aureus
Figura 3: Concentração de prostaglandina E2 após a estimulação com Figura 4: Concentração de prostaglandina E2 após a
PGN em sangue fresco bovino (armazenado < 2h). Box-plot com estimulação com LTA em sangue fresco bovino (armazenado <
média e mínina até máxima margem em n = 5, teste de permutação, 2h). Box-plot com média e mínina até máxima margem em n =
**p < 0,001 comparado com sangue não estimulado. Resultado é 5, teste de permutação, **p < 0,001 comparado com sangue
representativo de três experimentos independentes. não estimulado. Resultado é representativo de três
experimentos independentes.
13
LPS de E. coli 0113:H10
PyroDetect System
também conseguiu detectar
todos os outros pirogênios
em todas as concentrações
utilizadas;
A reação colorimétrica do
ELISA foi tão intensa que não
permitiu quantificação.
Detecção de LPS
Detecção de 10 – 50
µg/mL.
PNG agonista TLR2
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CONCLUSÃO
Reduction
Objetivo 3R Refinemen Redução do uso
t Detecção de de RPT e LAL
Limites de Robustez
detecção ReplacemePirogênios usando
Introdução do nt sangue total de
MAT MAT não é amplamente
bovino
utilizado
Detecção de
Funcionalidad Melhorias outros
e do método pirogênios
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