ЗАВИСИМОСТЬ ВРЕМЕН ЯДЕРНОЙ

СПИНОВОЙ РЕЛАКСАЦИИ
АДЕНОЗИНМОНОФОСФАТА ОТ
МАГНИТНОГО ПОЛЯ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ
pH ВОДНЫХ РАСТВОРОВ

студент 4 курса ФФ НГУ Тураханов Аман

научные руководители: А. Н. Правдивцев

д. ф.-м. н. А. В. Юрковская
 Магнитная релаксометрия с
переключением внешнего поля

• Изучение зависимости времени T1 –

релаксации от напряженности магнитного
поля – основа магнитной релаксометрии.
• Метод позволяет определять параметры
молекулярной подвижности в белках,
молекулах ДНК и других важных
биомолекулах.

2
 Введение
• Чтобы исследовать молекулярную
подвижность ДНК, необходимо
исключить из рассмотрения
внутримолекулярные
взаимодействия

нуклеотид аденозин-5’-монофосфат

3
 Введение
• Гамильтониан для системы спинов во внешнем магнитном
поле:
෡=𝐻
𝐻 ෡0 (𝐵) + 𝐻
෡1 𝑡

СПЕКТР,
ФЛУКТУАЦИИ,
КОГЕРЕНТНЫЕ
РЕЛАКСАЦИЯ
ЯВЛЕНИЯ

• Скорость релаксационных переходов пропорциональна

спектральной плотности шума на частоте перехода и
квадрату матричного элемента оператора случайного
магнитного взаимодействия
1 2
𝑅𝜇𝜈 = 2 (𝐻1 )𝜇𝜈 𝐽(ω𝜇𝜈 )
ℎ
4
 Введение
3 причины влияния магнитного поля на скорость релаксации:
1 2
𝑅𝜇𝜈 = 2 (𝐻1 )𝜇𝜈 𝐽(ω𝜇𝜈 )
ℎ
2𝜏𝑐
• Зависимость спектральной плотности 𝐽 𝜔 = , где
1+(𝜔𝜏𝑐 )2
ω=𝛾𝐵

෡1 𝜔 = 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑡 для протонов

• 𝐻

• Зависимость собственных состояний ȁµ‫ۄ‬, ȁ𝜈 ‫ۄ‬

෡0 (𝐵) от величины магнитного поля
гамильтониана 𝐻

5
 Введение
Гамильтониан для N скалярно связанных ядерных спинов 1/2
в жидкости:
෡0 = 2𝜋 − σ𝑁
𝐻 መ 𝑁 ෠ ෠
𝑖=1 𝑣𝑖 𝐼𝑖𝑧 + σ𝑖<𝑗 𝐽𝑖𝑗 𝑰𝑖 ∙ 𝑰𝑗

Для двухспиновой системы:

• Условие слабой связи : 𝐽𝑖𝑗 ≪ 𝑣𝑖 − 𝑣𝑗

෡0 : ȁ𝛼𝛼‫ۄ‬, ȁ𝛼𝛽‫ۄ‬, ȁ𝛽𝛼‫ۄ‬, ȁ𝛽𝛽‫ ۄ‬зеемановы
собственные состояния 𝐻
состояния спины релаксируют независимо

• Условие сильной связи: 𝐽𝑖𝑗 ≥ 𝑣𝑖 − 𝑣𝑗

собственные состояния 𝐻 ෡0 : ȁ𝑆‫ = ۄ‬ȁ𝛼𝛽‫ ۄ‬− ȁ𝛽𝛼‫ ۄ‬/ 2 – синглетное,
ห𝑇+ ‫ = ۄ‬ȁ𝛼𝛼 ‫ۄ‬, ห𝑇0 ‫ = ۄ‬ȁ𝛼𝛽‫ ۄ‬+ ȁ𝛽𝛼‫ ۄ‬/ 2, ห𝑇− ‫ = ۄ‬ȁ𝛽𝛽‫ – ۄ‬триплетные
состояния спины релаксируют с одинаковым T1
6
 Постановка задачи
Молекула АМФ DO
O
(аденозин-5’-монофосфат) DO P
OD
O

OD
~150 Гц
O
H8 H2
N N H2
H8
N
~1 Гц ~1 Гц N

ND 2

B=16.4 Тл
pH 9.5

Константа взаимодействия J(H8-H2) меньше ширины линии!

7
 Постановка задачи

• Молекула аденозин-5’-монофосфат (АМФ)

DO
P O
DO
OD
O
2τc
1. J ω = OD
1+(ωτc )2
O
෡1 𝜔 = const для протонов
2. 𝐻 N N H2
H8
3. Зависимость ȁµ‫ۄ‬, ȁν‫ ۄ‬от ω=𝛾𝐵? N
N

ND 2

8
 Экспериментальная установка. ЯМР высокого
разрешения с быстрым переключением магнитного
поля • Диапазон
полей 0.1 мТл -
7 Тл

• Время
переключения
300 мс

• Высокое
разрешение!

Профиль поля в
зависимости от
положения ЯМР-
датчика
Установка собрана в 2012 году сотрудниками МТЦ СО РАН 9
Экспериментальный протокол измерения
полевой зависимости Т1-релаксации

Экспериментальный протокол измерения полевой зависимости Т1-релаксации:

(1) стадия приготовления
(2) изменение внешнего поля от 𝐵𝑅 до 𝐵𝑖𝑛𝑡 за время 𝜏1
(3) релаксация неравновесной поляризации в поле 𝐵𝑖𝑛𝑡 в течение времени 𝜏
(4) изменение внешнего поля от 𝐵𝑖𝑛𝑡 до 𝐵0 за время 𝜏2
(5) регистрация сигнала в поле 𝐵0 после действия 90-градусного импульса
10
 Полевые зависимости T1 протонов
+
RD τс(H2)=339 ± 18 пс
pH 1.5
N N H2
Одинаковое T1 в слабом поле: H8
ND
+

Сильная связь протонов! N

𝐽𝑖𝑗 ≥ 𝑣𝑖 − 𝑣𝑗 ND2

τс(H8)=283 ± 12 пс
R

N N H2
H8 τс(H2)=434 ± 26 пс
N
N

ND 2 В области сильных полей рост

времени T1
2τc
обусловлен J ω =
1+(ωτc )2
τс(H8)=418 ± 23 пс

pH 9.5 11
Зависимость хим. сдвигов протонов H2 и H8
от pH раствора. Определение pKa
+
RD

N N H2
H8
N
N
Δδ=0.18 ppm
ND2 Δδ=0.43 ppm
pKa1=4.2 pKa2=6.8
R

+ N N H2
RD
H8
N
N N H2 N
H8 + ND 2
ND
N

ND2

𝐽𝑖𝑗 ≈ 𝑣𝑖 − 𝑣𝑗 ~𝐵 𝛿𝑖 − 𝛿𝑗 - переход от режима сильной связи к слабой

12
 Измерение константы спин-спинового
взаимодействия J. Когерентный перенос
поляризации.

Частота осцилляций когерентности: Ω = 𝐽2 + 𝛿𝜈 2

13
Когерентный перенос поляризации в поле B=0.1 мТл
+
RD

N N H2
Одинаковая частота и
H8 +
противоположная фаза N
ND

ND 2

когерентный перенос
поляризации
R pH 1.5
N N H2
H8
N
N

ND 2
Частота осцилляций
когерентности в поле
B=0.1мТл при обоих
значениях pH
pH 9.5
Ω≈J=0.24±0.01 Гц

14
 Результаты и выводы

• Скалярное взаимодействие протонов H2

и H8 в слабых полях приводит к
релаксации протонов с одинаковым R

временем T1 N N H2
H8
• Выявлена зависимость изменения N
N

режима связи от протонированной формы ND 2

молекулы
• Из частоты осцилляций когерентности
получено значение константы спин-
спинового взаимодействия между
протонами Н2 и Н8, меньшее ширины
линии ЯМР в сильном поле
15
Спасибо за внимание!

16
 Полевая зависимость T1-релаксации 31P
молекулы АМФ

-
O
O
O
-
P pH 9.5
OD
O

OD
O

N N

N
N

ND 2
В поле B=100 мТл имеется максимум
При B<100 мТл время T1 растет
В области B>100 мТл время T1 квадратично падает с ростом B 17
 Полевые зависимости T1 протонов
+
pH 1.5 RD τс(H2)=339 ± 18 пс
С=33 мМ N N H2
Одинаковое T1 в слабом поле: H8
ND
+

Сильная связь протонов! N

𝐽𝑖𝑗 ≥ 𝑣𝑖 − 𝑣𝑗 ND2

τс(H8)=283 ± 12 пс
R

N N H2
H8 τс(H2)=434 ± 26 пс
N
N

ND 2 В области сильных полей рост

времени T1
2τc
обусловлен J ω =
1+(ωτc )2
τс(H8)=418 ± 23 пс

pH 9.5 С=100 мМ 18
 Времена корреляции
Гипотеза: возможно
образование
димерных структур
пуриновыми
основаниями
R
молекул АМФ
N N H2
H8
N
N

ND 2 τс(H2)=434 ± 26 пс

τс(H8)=418 ± 23 пс

pH 9.5
С=100 мМ
19
 Времена корреляции
pH 1.5
+
С=33 мМ RD
τс(H2)=339 ± 18 пс
τс(H8)=283 ± 12 пс N N H2
τс(H1’)=297 ± 14 пс H8 +
ND
N

ND 2
-
O
P O
DO H5'aOD
O
H5'b H3'
H4' OD
O H2' Предположение:
H1' модуляция диполь-
N N H2 дипольных в/д H8 с
H8 протонами рибозы
+
ND приводит к
N эффективному
времени корреляции
ND2
20
 Первичные экспериментальные данные

Спектры H8 H2
• 1 накопление
• время между
экспериментами
50 секунд
• регистрация в
поле 7Тл
• 40 точек для
каждой полевой
зависимости

N N H2
H8
N
N
T1(H8)=1.52 с
ND 2

T1(H2)=1.52 с

B=0.1 мТл 21
 Концентрация парамагнитной примеси

С добавлением
Без хелатного
хелатного агента
агента EDTA и
EDTA и после
до дегазации
дегазации

pH 9.5

Скорость релаксации: 𝑅1′ = 𝑅𝑝𝑎𝑟𝑎𝑚 + 𝑅𝑜𝑥𝑦𝑔 + 𝑅1

Вклад примесей и кислорода в пропорционален концентрации*:

𝑝𝑎𝑟 𝑜𝑥𝑦𝑔
𝑅𝑝𝑎𝑟𝑎𝑚 = 𝑘1 𝑃𝑎𝑟𝑎𝑚 и 𝑅𝑜𝑥𝑦𝑔 = 𝑘1 [𝑂2 ]

* M. C. D. Tayler, and M. H. Levitt, 'Paramagnetic Relaxation of Nuclear Singlet States', Physical Chemistry
Chemical Physics, 13 (2011), 9128-30.
22
 Концентрация парамагнитной примеси

● - раствор АМФ
○ - с добавлением
Кинетика релаксации
EDTA
протона H8 в поле
∆ - после проведения
B=9.4 Тл
дегазации
R

N N H2
H8
N
N

ND2

Кинетика релаксации
протона H2 в поле
B=9.4 Тл Оценка:
концентрация
парамагнитных примесей
~10 − 40 мкМ

23