Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
СПИНОВОЙ РЕЛАКСАЦИИ
АДЕНОЗИНМОНОФОСФАТА ОТ
МАГНИТНОГО ПОЛЯ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ
pH ВОДНЫХ РАСТВОРОВ
2
Введение
• Чтобы исследовать молекулярную
подвижность ДНК, необходимо
исключить из рассмотрения
внутримолекулярные
взаимодействия
нуклеотид аденозин-5’-монофосфат
3
Введение
• Гамильтониан для системы спинов во внешнем магнитном
поле:
=𝐻
𝐻 0 (𝐵) + 𝐻
1 𝑡
СПЕКТР,
ФЛУКТУАЦИИ,
КОГЕРЕНТНЫЕ
РЕЛАКСАЦИЯ
ЯВЛЕНИЯ
5
Введение
Гамильтониан для N скалярно связанных ядерных спинов 1/2
в жидкости:
0 = 2𝜋 − σ𝑁
𝐻 መ 𝑁
𝑖=1 𝑣𝑖 𝐼𝑖𝑧 + σ𝑖<𝑗 𝐽𝑖𝑗 𝑰𝑖 ∙ 𝑰𝑗
OD
~150 Гц
O
H8 H2
N N H2
H8
N
~1 Гц ~1 Гц N
ND 2
B=16.4 Тл
pH 9.5
ND 2
8
Экспериментальная установка. ЯМР высокого
разрешения с быстрым переключением магнитного
поля • Диапазон
полей 0.1 мТл -
7 Тл
• Время
переключения
300 мс
• Высокое
разрешение!
Профиль поля в
зависимости от
положения ЯМР-
датчика
Установка собрана в 2012 году сотрудниками МТЦ СО РАН 9
Экспериментальный протокол измерения
полевой зависимости Т1-релаксации
𝐽𝑖𝑗 ≥ 𝑣𝑖 − 𝑣𝑗 ND2
τс(H8)=283 ± 12 пс
R
N N H2
H8 τс(H2)=434 ± 26 пс
N
N
pH 9.5 11
Зависимость хим. сдвигов протонов H2 и H8
от pH раствора. Определение pKa
+
RD
N N H2
H8
N
N
Δδ=0.18 ppm
ND2 Δδ=0.43 ppm
pKa1=4.2 pKa2=6.8
R
+ N N H2
RD
H8
N
N N H2 N
H8 + ND 2
ND
N
ND2
N N H2
Одинаковая частота и
H8 +
противоположная фаза N
ND
ND 2
когерентный перенос
поляризации
R pH 1.5
N N H2
H8
N
N
ND 2
Частота осцилляций
когерентности в поле
B=0.1мТл при обоих
значениях pH
pH 9.5
Ω≈J=0.24±0.01 Гц
14
Результаты и выводы
временем T1 N N H2
H8
• Выявлена зависимость изменения N
N
молекулы
• Из частоты осцилляций когерентности
получено значение константы спин-
спинового взаимодействия между
протонами Н2 и Н8, меньшее ширины
линии ЯМР в сильном поле
15
Спасибо за внимание!
16
Полевая зависимость T1-релаксации 31P
молекулы АМФ
-
O
O
O
-
P pH 9.5
OD
O
OD
O
N N
N
N
ND 2
В поле B=100 мТл имеется максимум
При B<100 мТл время T1 растет
В области B>100 мТл время T1 квадратично падает с ростом B 17
Полевые зависимости T1 протонов
+
pH 1.5 RD τс(H2)=339 ± 18 пс
С=33 мМ N N H2
Одинаковое T1 в слабом поле: H8
ND
+
𝐽𝑖𝑗 ≥ 𝑣𝑖 − 𝑣𝑗 ND2
τс(H8)=283 ± 12 пс
R
N N H2
H8 τс(H2)=434 ± 26 пс
N
N
pH 9.5 С=100 мМ 18
Времена корреляции
Гипотеза: возможно
образование
димерных структур
пуриновыми
основаниями
R
молекул АМФ
N N H2
H8
N
N
ND 2 τс(H2)=434 ± 26 пс
τс(H8)=418 ± 23 пс
pH 9.5
С=100 мМ
19
Времена корреляции
pH 1.5
+
С=33 мМ RD
τс(H2)=339 ± 18 пс
τс(H8)=283 ± 12 пс N N H2
τс(H1’)=297 ± 14 пс H8 +
ND
N
ND 2
-
O
P O
DO H5'aOD
O
H5'b H3'
H4' OD
O H2' Предположение:
H1' модуляция диполь-
N N H2 дипольных в/д H8 с
H8 протонами рибозы
+
ND приводит к
N эффективному
времени корреляции
ND2
20
Первичные экспериментальные данные
Спектры H8 H2
• 1 накопление
• время между
экспериментами
50 секунд
• регистрация в
поле 7Тл
• 40 точек для
каждой полевой
зависимости
N N H2
H8
N
N
T1(H8)=1.52 с
ND 2
T1(H2)=1.52 с
B=0.1 мТл 21
Концентрация парамагнитной примеси
С добавлением
Без хелатного
хелатного агента
агента EDTA и
EDTA и после
до дегазации
дегазации
pH 9.5
* M. C. D. Tayler, and M. H. Levitt, 'Paramagnetic Relaxation of Nuclear Singlet States', Physical Chemistry
Chemical Physics, 13 (2011), 9128-30.
22
Концентрация парамагнитной примеси
● - раствор АМФ
○ - с добавлением
Кинетика релаксации
EDTA
протона H8 в поле
∆ - после проведения
B=9.4 Тл
дегазации
R
N N H2
H8
N
N
ND2
Кинетика релаксации
протона H2 в поле
B=9.4 Тл Оценка:
концентрация
парамагнитных примесей
~10 − 40 мкМ
23