Un biochip microfluídico en espiral de ultra alto

rendimiento para el enriquecimiento de las

células tumorales circulantes
IF 562 – Biología
Universidad Nacional de Ingeniería

Alumnos
Leon Rios Marco
Acevedo Marmolejo Gustavo
Espinoza Castillo Frank
Profesora
 Introducción

Células Cancerígenas Circulantes:

Son celulas provenientes de tumores

primarios o secundarios que son
arrojadas al torrente sanguíneo, infectan
órganos distantes al organo donde está
alojado inicialmente el tumor
(Metástasis).
Biochip Microfluídico
Dispositivo hecho de silicona, vidrio o algún
polímero (obleas), en el cual están grabados
canales, conectados con el fin de
aprovechar las características del
comportamiento de los fluidos(Líquidos o
Gases) a escalas microscópicas para
diferentes aplicaciones
 Principio de Funcionamiento

Basado en el principio de separación

Hidrodinámica de canales de microfluidos en
espiral. En los microcanales en espiral con
sección transversal rectangular. Las fuerzas
centrífugas que actúan en la dirección radial da
como resultado la formación de dos vórtices
simétricos contrarotativos através de la sección
transversal del canal(Vórtices Dean).
Optimización de parámetros de operación spiral Biochip
Se realizaron imágenes de alta velocidad del aislamiento
de CTC a través del dispositivo espiral monitoreando su
posición. eE 99.9% de globulos blancos y eritrocitos
residuales se sometieron a una migración completa del
ciclo Dean y se retiraron a la salida de los desechos,
mientras que los CTC que se enfocaron cerca de la pared
interna durante la migración lateral se puede recoger de la
salida del CTC.
Efecto de la Lisis de RBC en la eficiencia de separación y la viabilidad celular
Se demostró que la depleción de RBC no comprometió significativamente la recuperación
y el aislamiento de las células cancerosas. La exposición al tampón de lisis tampoco afecto
a la morfología y al tamaño de las CTC
 Fabricación del biochip en espiral

 Los moldes de silicio SU-8 se fabricaron utilizando técnicas de litografía estándar

 La oblea de silicio con patrón se silanizó con tricloro (1H, 1H, 2H, 2H-perfluorooctil) silano Para hacer
que la superficie fuera hidrófoba
 El prepolímero de PDMS se preparó mezclando el PDMS a una proporción estándar de 1:10
 Desgasificación en una cámara de vacío.
 Para producir el biochip espiral de una sola capa, el prepolímero PDMS se vertió en el molde SU-8 y
se curó a 80 grados C durante 1-2 horas dentro de un horno convencional.
 Se cortó el PDMS del molde y se perforaron cuatro orificios de acceso fluídico (dos entradas y dos
salidas).
 Para obtener el dispositivo multiplexado, se unieron tres biochips espirales utilizando plasma de
oxígeno y alineaciones manuales.
 El dispositivo final se obtuvo uniendo todo el conjunto a un portaobjetos de vidrio microscópico
utilizando una máquina de plasma de aire.
Cultivo celular

 Se cultivaron las células MCF-7 y las células T24 en medio de Eagle

modificado con Dulbecco de alta glucosa (DMEM) suplementado con
suero bovino fetal al 10% (FBS).
 El cultivo se mantuvo a 37ºC en una atmósfera humidificada que contenía
5% CO2 hasta 80% de confluencia
 FACS
• Tipo especializado de citometria
de flujo
• Los citómetros de flujo modernos
son capaces de analizar varios
miles de partículas por segundo,
en tiempo real, y pueden separar
y aislar activamente partículas de
acuerdo a propiedades
específicas.
Preparación de muestras

 Para los experimentos de control y recuperación, las células cancerosas se diluyeron

en tampón que contiene solución salina tamponada con fosfato (PBS), ácido
etilendiaminotetraacético (EDTA) 2 mM suplementado con albúmina de suero
bovino al 0,5% (BSA) para prevenir adsorción específica en la tubería y paredes de
microcanales.
 La sangre obtenida de donantes sanos se lisó usando tampón de lisis de eritrocitos
(RBC). El proceso de lisis de RBC elimina los contaminantes sanguíneos y, por lo
tanto, reduce la concentración total de células.
Resultados

Eficiencia en la separación.
 Biochip en espiral integrado: Se registró 7.5ml de sangre procesada en 30
minutos
 Biochip en espiral multiplexado( 3 biochips en spiral apilados): Se registró
7.5ml de sangre que es procesada en 30 minutos
 Es un procedimiento no invasivo para la persona.