Técnicas

Histopatológicas
Dra. Claudia Aracely Velis Cabezas
Patóloga
 Bibliografía
Laboratorio de Anatomía Patológica.
Raimundo García del Moral.
1ª. Edición
Editorial Interamericana Mc. Graw – Hill

Métodos de Laboratorio. Lynch.

Raphael, Meller, Spare, et. Al.
2a. edición
Editorial Interamericana Mc. Graw – Hill

Patología. Ciencias Básicas de Medicina

Andrade Rafael, et al.
1ª. Edición.
Corporación para Investigaciones Biológicas
 Contenidos
O Introducción
O Biopsia
O Tipos de biopsias
O Manejo adecuado de las biopsias
O Técnica histopatológica.
 Biopsias

O Biopsia:
Fragmento de tejido obtenido de un
ser vivo para su estudiado al
microscopio por un médico patólogo y
la obtención de un diagnóstico preciso.
 Biopsias
Tipos de biopsias:
O Endoscópicas
O Por punción
O Incisionales
O Excisionales
O Piezas quirúrgicas
 Tipos de biopsias
O Endoscópicas:
Obtenidas por medio de
instrumentos a través de
cavidades naturales: Ej.
gastroscópicas, broncoscópicas,
colonoscópicas,
rectosigmoidoscopicas,
cistoscópicas, colposcópicas, etc
 Tipos de biopsias

O Por punción:
Se utiliza en lesiones de tamaño
grande o pequeño (ej. Piel), en
lesiones de órganos o tejidos
profundos y generalmente obtenida
a través de la piel, por ejemplo:
Pleura, hígado, riñón, próstata,
mama, médula ósea, etc. Su
limitante radica en la
representatividad de la muestra.
 Tipos de biopsias

O Biopsia incisional
Se obtiene por medios quirúrgicos sólo una
porción de la lesión con fines diagnósticos.
Se recomienda en lesiones de gran tamaño, en
las que será necesario programar
posteriormente una intervención quirúrgica
de mayor extensión.
 Tipos de biopsias
O Biopsias excisionales
Es cuando dentro de la
muestra obtenida por medios
quirúrgicos se incluye la
totalidad de la lesión que
motivó el procedimiento.
Biopsia excisional
 Tipos de biopsias
O Piezas quirúrgicas:
Tejidos u órganos extirpados quirúrgicamente
en mayor o menor extensión con fines
terapéuticos. Mediante su estudio
anatomopatológico podremos emitir,
confirmar, precisar, o modificar un diagnóstico
así como determinar la extensión de las
lesiones y comprobar si estas han sido
extirpadas en su totalidad.
Piezas quirúrgicas
 Biopsias
Manejo inicial de las biopsias:
O Colocar en líquido fijador.
O Frasco adecuado.
O Identificación del frasco
O Solicitud de estudio
histopatológico
Manejo inicial de las biopsias

O Recepción de la muestra en el
Servicio de Patología.

O Descripción de la muestra y
selección del material a estudiar.
Muestra y boleta
Descripción macroscópica
 Técnica histopatológica
Técnica Histopatológica:
La técnica histopatológica
comprende la preparación de los
tejidos para su estudio
microscópico sometiendo a la
totalidad o a una parte del tejido a
estudiar a una serie de procesos:
 Técnica histopatológica
1- Fijación.
2- Deshidratación.
3- Aclaramiento.
4- Inclusión.
5- Corte.
6- Tinción.
7- Montaje.
Técnica histopatológica

O Fijación
Es el proceso mediante el cual los
tejidos o sus componentes
celulares permanecen estables en
su estado físico y parcialmente en
su estado químico, evitando así el
deterioro provocado por la
autolisis y la putrefacción.
 Fijación
O Objetivos de la fijación
O Evitar la descomposición.
O Evitar la distorsión de los
tejidos o la pérdida de ellos.
O Resistir el tratamiento
sucesivo con los reactivos
durante el procesamiento
 Fijación
O La fijación debe comenzar inmediatamente
se ha obtenido la muestra de tejido.
O La fijación es para ustedes el paso más
importante del proceso histopatológico por:
O Puede ser iniciado por el personal médico o
paramédico.
O Los cambios por autolisis y putrefacción no
son reversibles.
 Fijación

O Mecanismo de acción de
los fijadores:
La mayoría de ellos actúa a
través de la desnaturalización
o precipitación de las
proteínas.
 Fijación

O Principios generales para una

fijación adecuada:
1- Recipiente adecuado. No colocar
muestras diferentes en un mismo
frasco.
2- Volumen de fijador adecuado (10-20
veces el volumen de la muestra).
 Fijación
O Principios generales para una
fijación adecuada (cont.)
4- El fijador debe cubrir todas las
caras de la pieza.
5- Señalar los límites quirúrgicos de
la muestra si es necesario.
6- Disección de la pieza si es
necesario.
 Fijación
O Formaldehído. (Formalina o
formol)
El formaldehído comercial es una
solución saturada de gas
formaldehído en agua al 40%.
(Formalina pura)
O Normalmente se utiliza al 10%
O Velocidad de penetración en los tejidos:
1mm por hora.
 Formaldehido

Ventajas del formol

- Bajo costo económico.
- Es fácil de preparar.
- Relativamente estable. Tiene buena
penetración en los tejidos.
- No endurece demasiado los tejidos ni
los vuelve quebradizos.
 Formaldehido
O Desventajas:

O Puede producir
dermatitis en el
personal que lo emplea.
O Es irritante para las
fosas nasales.
 Fijación

Otros fijadores
utilizados:
O Alcohol etílico.
O Ácido acético.
Técnicas histopatológicas

DESHIDRATACIÓN
Es el proceso por el cual el agua tanto intra
como extracelular que contienen los tejidos
es eliminada para posteriormente ser
reemplazada por parafina.
O El mejor agente a este respecto es el alcohol
etílico (etanol).
 Deshidratación

O Un esquema de deshidratación:
Alcohol al 80% enjuague
Alcohol al 90% 1 hora
Alcohol al 100% 1 hora
Técnicas histopatológicas
ACLARAMIENTO
O Proceso por el cual se consigue la sustitución
del agente deshidratante por una sustancia
miscible con el medio de inclusión que va a
utilizarse.
O El aclaramiento permite que el alcohol de los
tejidos sea reemplazado por parafina.
 Aclaramiento
O El agente aclarante más utilizado es el xilol o
xileno, un derivado del petróleo.
O Ventajas:

O Buen agente aclarante.

O Barato.
O Desventajas:

O Vuelve a los tejidos excesivamente

duros y quebradizos.
 Aclaramiento

O Un esquema de aclaramiento:

Xilol Enjuage
Xilol 1 hora.
Xilol 1 hora.
Procesador automático de tejidos
 Técnicas histopatológicas

IMPREGNACIÓN O EMPARAFINAMIENTO

O Luego que el tejido se encuentra

debidamente aclarado se procede a su
impregnación en parafina. Para ello, se
sumerge la muestra en parafina líquida
(punto de fusión: 55°C aprox.) para
que ésta ocupe el lugar del xilol.
 Impregnación
O El objetivo de la impregnación es “rellenar
o infiltrar” completamente la muestra
histopatológica con el medio que se va
ha utilizar para la inclusión del tejido.

O Parafina a 60° C 3 horas

Estufa
Técnicas histopatológicas
O INCLUSIÓN
Es la impregnación de los
tejido con un medio que llene
todas las cavidades naturales,
espacios e intersticios tisulares
y aun los espacios
intracelulares.
 Inclusión
El objetivo de la inclusión es
proporcionar la consistencia
firme necesaria para hacer cortes
bastante delgados sin provocar
distorsión y sin alterar las
relaciones espaciales del tejido y
los elementos celulares.
 Inclusión
O Los medios de inclusión más
frecuentemente utilizados son
parafina o una mezcla de parafina
y polímeros plásticos (Paraplast®)
O El resultado de la inclusión es un
bloque de parafina que contiene
la muestra de tejido.
 Inclusión
O Técnica:
O La parafina líquida a 2°C
sobre su punto de fusión.
O Apertura de los
receptáculos
O Se prepara un molde. Luego
se llena con parafina líquida.
 Inclusión

O Introducción del corte con pinzas.

O Solidificación.
O Baño de hielo o agua fría.
O Eliminación del exceso de parafina
(desvastado).
Técnicas histopatológicas
O CORTE

O Una vez que se obtiene el

bloque de tejido se procede a
realizar los cortes del mismo,
para lo cual se utiliza un
micrótomo.
 Corte
Micrótomo:
Instrumento para cortar
rebanadas muy delgadas de tejido
para estudio microscópico.
Hay diferentes tipos de
micrótomos, sin embargo, el más
usado en nuestro medio es el
micrótomo rotatorio.
Micrótomo rotatorio
 Corte

O Se verifica el grosor adecuado

del corte (4 a 6 micras).
O Se numeran los portaobjetos
con un lápiz de punta de
diamante.
O Se inician los cortes.
 Corte

O Se toman los cortes, se colocan

sobre la lamina portaobjeto y la
serie de cortes se hace flotar
luego sobre la superficie del agua
del baño de flotación. La
temperatura del agua es de
45°C.
Corte
Corte
Corte
 Corte

O Cuando los cortes se han

aplanado se introduce la laminilla
numerada perpendicularmente a
la superficie del agua. Se acerca la
laminilla al corte y se levanta
con el movimiento uniforme .
O Se deja escurrir por 2 a 5
minutos.
 Tinción
TINCIÓN
OBJETIVO:
La tinción del corte permite
estudiar y conocer las
características físicas de los
tejidos y las relaciones entre las
células que los constituyen.
 Tinción
TINCIÓN CON HEMATOXILINA –
EOSINA (H&E)
O La tinción “standard” en histopatología es la
hematoxilina – eosina. Esto es debido a la
extraordinaria riqueza de matices rosados y
rojos que provoca la tinción con eosina a lo
que se suma la excelente definición nuclear
originada por la hematoxilina.
 Tinción

O Con H&E el núcleo se colorea de azul

oscuro a negro (basófilo) por la
hematoxilina y el citoplasma adquiere un
color rosado (eosinófilo) por la eosina.
H&E
 H&E

Resultados:
O Núcleos: de pardo negruzco a azul negro.
O Eritrocitos, músculo, gránulos
eosinófilos: rojo brillante.
O Citoplasma, proteínas del líquido de
edema: rosa pálido.
H&E
Técnicas histológicas
MONTAJE
O Impregnación del corte de tejido
con un medio transparente de
índice de refracción cercano al
vidrio y al índice de refracción
medio del tejido.
O Protección del frotis contra
agentes físicos, químicos,
blaqueamiento, oxidación, etc.
 Montaje

Medios de montaje más

utilizados:

Merckoglass®
Bálsamo del Canadá.
 Otras tinciones
histoquímicas
O Otras tinciones utilizadas en histopatología:
O Giemsa: Bacterias, cromatina.
O Ácido Peryódico de Schiff (PAS):
Mucopolisacaridos, memb. basales, etc.
O Mucicarmín: Moco
O Van Gieson: Colágena

O Reticulina: Fibras reticulares

O Tricrómica de Masson: Colágena
Otras tinciones histoquímicas

O Rojo Congo: Amiloide

O Perls: Hierro
O Sudán: Lípidos
O Ziehl-Neelsen: Bacilos
alcohol ácido
resistentes
O Gram: Bacterias
O Gomori Groccott: Hongos
Zielh Neelsen
Perls
Sudán
PAS
PAS
GIEMSA
Rojo congo
Tricrómico de Masson
Reticulina
GRACIAS