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TALLER PRÁCTICO: DETERMINACIÓN DE LA

ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE BIOMOLÉCULAS

PROGRAMA DE MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL


TÉRMINOS

• Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) :Es la


concentración más baja en la cual el agente
microbiano impide el crecimiento a simple vista de
un microorganismo.

• Concentración Mínima Bactericida (CBM): La


concentración más baja en la cual el agente
antimicrobiano elimina más del 99% de los
microorganismos presentes en una dilución.
Microorganismos Equipos e Insumos
• Cepa Escherichia Coli ATCC 43888
• Micropipetas
Compuestos • Micropipetas multicanal
• Péptido análogo ib-M 4 • Incubadora 35 · C
• Nanopartículas de ÷acido de Hieroo • Cabina de Flujo Laminar
• Solución Stock Espreptomicina Espectrofotómetro, Lector de Elisa
• Balanza
Medios y Reactivos • Vortex
• Caldo Müller- Hilton (MH) • Cajas Petri
• Agar Müller- Hilton (MH) • Guantes
• Solución Salina (Sln salina) • Cofia
• Escala de Mc Farland 0,5 • etc
FASES

Antibiótico - Péptidos - Inóculo


PROCEDIMIENTO

• Preparación de la solución stock (Aforado a


Estreptomicina 5 ml con caldo MH) Posteriormente diluida
a concentraciones específicas

• Preparación de solución Stock a concentraciones


Péptidos
específicas

Inóculo • Cepa de E.coli de 18 a 24 horas a


37°C

Placa • Placa con 96 pozos


PROCEDIMIENTO
Control • En placa
Diluciones

Lectura de
CMI • Espectrofotometría

Análisis • Agar Sangre, de pozos sin turbidez mediante Siembra


CBM masiva por 24 horas a 37°C y hacer conteo

Análisis de Resultados
Tabla 1: Concentraciones Inóculo

Tubo Dilución a Cepa Caldo MH Final μL Concentración


Realizar bacteriana μL Final
μL
MacFarland - 1*108 UFC/ml
(100.000.000)
Falcón 1:100 100 (1+108) 9.900 10.000 1*106 UFC/ml
(1000.000)

Pozo ml 1:2 100 (1+106) 100 de cada 200 5*105 UFC/ml


pozo (500.000)

Pozo μL Como se parte de UFC/ml, es decir 1 ml= 1000 μL/100 μL 5*104


(Pozo) = 10 (Décima parte). Se saca el factor 10 parte y al UFC/pozo
dividir 500.000/10 = 50.000 (5*104 ) (50.000)
CN CP
12

CN: Control Negativo ; CP: Control Positivo; Pep: Péptidos ,


Estp: Estreptomicina; Nan: Nanomoléculas
Pep Estp
12

CN: Control Negativo ; CP: Control Positivo; Pep: Péptidos ,


Estp: Estreptomicina; Nan: Nanomoléculas
Estp
12

CN: Control Negativo ; CP: Control Positivo; Pep: Péptidos ,


Estp: Estreptomicina; Nan: Nanomoléculas
Tabla 2: Concentraciones Inóculo