Genes bt

Bt genes
• Las esporas de la bacteria del suelo Bacillus thuringiensis (Bt)
contienen una proteína cristalina (Cry). En el intestino de los insectos,
el cristal se descompone y libera una toxina que se une y crea poros
en el revestimiento intestinal.

• Se utiliza un gen Cry truncado en cultivos Bt.

Promotores de transgenes
• Se están desarrollando promotores más específicos: tejido, tiempo y condición
específica.

• Lo más comúnmente utilizado es el promotor CaMV 35S del virus del mosaico de
la coliflor. Es un promotor constitutivo (activado todo el tiempo en todos los
tejidos), y da altos niveles de expresión en las plantas.
Secuencia de terminación

• Más comúnmente utilizado es la secuencia de terminación de la transcripción de

nopalina sintasa (nos) de Agrobacterium tumefaciens.
• Traductor de Google para empresas:Google Translator ToolkitTraductor de sitios
webGlobal Market Finder
• Agregar marcadores seleccionables

• Debido a que la transferencia génica es un proceso ineficiente (tasa

de éxito del 1 al 5%), se necesita un sistema para identificar las células
con los nuevos genes.

• Típicamente, los genes de resistencia a antibióticos o herbicidas se

usan como marcadores
 Bt gene construct

Antibiotic or
herbicide
resistance gene Bt gene

Promoter Termination
sequence
• Introducir la construcción génica en células vegetales
(transformación)

• "Gene gun" (sinónimos: biología, bombardeo de microproyectiles)

• Infección por Agrobacterium

Tejidos vegetales utilizados para la transformación

• La elección del tejido depende de la especie, pero algunas comunes

son embriones inmaduros, discos de hojas y meristemas apicales.
• El tejido debe ser capaz de generar callo (tejido indiferenciado), del
cual se puede producir la planta completa.
• Los brotes de Arabidopsis se pueden pulverizar simplemente con una
solución del transgén y del vector.
 “Gene gun” method

DNA

pellets

Transformed plant cell

inserted gene

plant
chromosome
Source: Monsanto
bacterial
chromosome T-DNA border region
Ti plasmid
T-DNA

vir genes

En respuesta a señales químicas, los genes vir se

activan y dirigen una serie de eventos para transferir el
ADN-T a la célula vegetal.
Agrobacterium method

disarmed T-DNA (contains transgene)

Agrobacterium tumefaciens

bacterial gene transfer (Ti) plasmid

chromosome
Transformed plant
inserted gene cell with gene

plant
chromosome
Source: Monsanto
Infección por Agrobacterium

Diferentes genes vir

• Copiar el ADN-T.
• Adjunte un producto a la cadena de ADN-T copiada para actuar como
líder.
• Añadir proteínas a lo largo de la longitud de la T-ADN, posiblemente
como un mecanismo de protección.
• Abrir un canal en la membrana celular bacteriana, a través del cual
pasa el ADN-T.
Infección por Agrobacterium

• El T-DNA entra en la célula de la planta a través de una herida,

entonces de alguna manera se mueve al núcleo y se integra en el
cromosoma de la planta.

• Una especulación es que el T-DNA espera hasta que el ADN de la

planta se está replicando o transcribiéndose, luego se inserta en el
ADN de la planta expuesta.
 Transgénico "evento"
Evento = transformación exitosa
Los eventos difieren en los componentes genéticos
específicos, y en el lugar de inserción del ADN
extraño en el cromosoma del huésped.

El maíz tiene 10 cromosomas, cualquiera de

los cuales podría incorporar el transgén.
 Para identificar células / tejidos en los que se
incorporan nuevos genes en el ADN de la
planta, crecen en medios que contienen
antibióticos o herbicidas

Transformante
exitoso
Plantas enteras con
genes insertados se
regeneran a través de
cultivo de tejidos.

Source: USDA
Futuro de la tecnología transgénica

• Las nuevas técnicas mejorarán la eficiencia y pueden resolver algunas

preocupaciones de salud o ambientales.
• Inserción en puntos específicos del genoma
• Nuevos genes marcadores para reemplazar marcadores de resistencia a
antibióticos
• Mejor control de la expresión génica (sólo cuando y donde sea necesario)
• Transformación de cloroplastos en lugar de núcleos
• (Transplastomica)
• Traductor de Google para empresas:Google Translator ToolkitTraductor de
sitios webGlobal Market Finder
Evaluar plantas transformadas

• Otros efectos sobre el crecimiento de las plantas

• Presencia y actividad del gen introducido

• Efectos ambientales

• Seguridad alimentaria o alimentaria

Presencia y actividad del gen introducido

• Southern blot - ¿es el ADN introducido presente en el genoma de la

planta?

• Northern blot - ¿se produce mRNA?

• Western blot - ¿es la proteína producida?

• ¿Se observa el rasgo fenotípico esperado?

Backcross transformó la planta en una variedad
mejorada

• Para la mayoría de las especies de plantas, sólo unas pocas líneas o

variedades darán altas tasas de transformación. A menudo son líneas
con pobres características agronómicas o de calidad.

• Por lo tanto, una variedad mejorada debe retrocruzarse durante

varias generaciones a la planta transformada.