MEDIOS DE CULTIVO

1
GENERALIDADES

El crecimiento de

microorganismos en

sustancias alimenticias

artificiales es una de las

técnicas más importantes

usadas en el laboratorio.

2
GENERALIDADES

• Permite reconocer las

características

culturales de las

bacterias.

• A partir de estas se

puede obtener cultivos

puros
3
GENERALIDADES

4
 MEDIO DE CULTIVO
• Conjunto de nutrientes,
factores de crecimiento y otros
componentes.

• Se crean condiciones
adecuadas de desarrollo y
reproducción de manera
artificial.

• No existe un medio universal

común.
5
• Para su óptimo crecimiento es necesario dar condiciones ambientales

adecuadas para su desarrollo en medios artificiales.

• Estas son: temperatura, pH, humedad, presión de oxígeno, grado de acidez o

alcalinidad del medio…

6
• Las características más importantes de los microorganismos a ser

consideradas al momento de preparar un medio de cultivo son:

 Tipo trófico: autótrofos, heterótrofos, quimiotrofos, fotótrofos.

 Tipo respiratorio: aerobios, anaerobios, anaerobios facultativos,

microaerófilos.

 Temperatura: psicrófilos, mesófilos y termófilos.

 pH: acidófilos, neutrófilos, basófilos.

7
REQUERIMIENTOS DE LOS MEDIOS DE
CULTIVO

Requerimientos energéticos y no energéticos

Salvo excepciones, las bacterias son cultivables en medios artificiales de
laboratorio de tal forma que el medio de cultivo le proporciona los
elementos necesarios para su crecimiento y multiplicación. De acuerdo
con esto, siempre se requerirá una fuente de energía y una fuente no
energética como son las sales, factores de crecimiento, etc., que sin
proporcionar energía son necesarias para su desarrollo.
Los requerimientos energéticos son los nutrientes de ese medio de
cultivo, que va a ser utilizado por la bacteria para su crecimiento. Van a
ser fuentes de energía en un medio de cultivo, al menos, una fuente de
carbono y una fuente de nitrógeno, y fuentes no energéticas pueden
ser una fuente de fósforo, determinados iones como el hierro, el
potasio, el sodio, el zinc, el magnesio, etc.

8
 REQUERIMIENTOS ENERGETICOS

Entre los requerimientos energéticos de los medios de cultivo

tenemos:
• 1. Fuente de Carbono
• 2. Fuente de Nitrógeno

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 • FUENTES DE CARBONO

 Pueden ser CO2 o compuestos carbonados orgánicos.

 Se utilizan en la construcción de innumerables moléculas necesarias para la

célula.

 Los hidratos de carbono se consideran fuente de carbono y energía.

 Existen muchos tipos de fuentes de carbono, ya que esto está ligado al

metabolismo energético de la especie microbial; por ejemplo:

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 REQUERIMIENTOS ENERGETICOS
Fuentes de carbono

Algunas bacterias son capaces de utilizar sustancias muy sencillas como ácido
acético, alcohol, citrato sódico, etc.

En otras ocasiones, la mayor parte de los casos, la fuente de carbono

corresponde a azúcares en forma de mono o disacáridos, como glucosa,
lactosa, maltosa, etc.,

Incluso hay microorganismos que pueden utilizar azúcares más complejos

para obtener energía, como es el caso del almidón.

Existen también bacterias capaces de utilizar el gas carbónico CO2 hecho que
es característico de las bacterias fotosintetizantes y quimiolitótrofas.
11
 REQUERIMIENTOS ENERGETICOS
Fuentes de carbono

Otros microorganismos pueden crecer a expensas del

metano, benceno e, incluso, hidrocarburos como fuente
de energía: Ejemplo: Cladosporium.

Por último, existen especies de Pseudomonas, que

pueden utilizar como fuente de energía un gran número
de componentes hidrocarbonados diferentes.

En general, conocer el tipo de azúcar utilizado por cada

bacteria es muy útil para su identificación bioquímica y
consiguiente clasificación taxonómica.

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 • FUENTE DE NITRÓGENO

 Es metabolizado para proveer proteínas, ácidos nucleicos y polímeros de

pared.

 Algunos microorganismos pueden incorporar nitrógeno en forma de

aminoácidos, bases purínicas o pirimidínicas.

 En ciertos medios de cultivo, el aporte de nitrógeno es realizado por las

peptonas

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 REQUERIMIENTOS ENERGETICOS
Fuente de nitrógeno

Bastante menos energética que la fuente de carbono pero necesaria para el

metabolismo microbiano, produciendo también energía.

Son fuente de nitrógeno las proteínas, péptidos o aminoácidos. Pueden

presentarse como proteínas completas, que sería el caso de la gelatina cuya presencia
sirve para determinar la actividad proteolítica o gelatinasa del microorganismo
problema, o incluso proteínas aún más complejas, como es el caso de los extractos de
carne, sales de amonio, etc.

14
 2. Fuente de nitrogeno
Existen muchos tipos de peptonas y son
excelentes fuentes de nitrógeno.

Entre las más frecuentes y conocidas se

encuentran los extractos de levadura que son
extractos hidrosolubles preparados a partir de un
lisado de levadura que se utiliza en muchos medios
de cultivo.

El bio-Thione, es una denominación comercial

correspondiente a una peptona pépsica de carne
empleada para la preparación, por ejemplo, del
medio líquido Sabouraud.

Tiene una alto contenido de azufre y de ahí que

en los medios de cultivo que la contengan se pueda
utilizar para investigar la producción de sulfuro de
hidrógeno (SH2) por parte de la bacteria problema.
15
 2. Fuente de nitrogeno
La caseina: es una peptona sometida al proceso
de digestión ácida muy utilizada en muchos medios
de cultivo, sobre todo, en forma de peptona tripsica
de caseina; por ejemplo: para estudiar la formación
de indol por parte de la bacteria debido al alto
contenido de triptófano que posee este tipo de
peptona.

También es utilizada para estudiar la reducción

de los nitratos e incluso para el cultivo de algunos
protozoos.

La peptona papaínica de soja, es una fuente de

nitrógeno especialmente para hongos y ciertos
gérmenes exigentes como en el caso de las
Neisserias.

Otra fuente de nitrógeno sería la utilización de

nitratos, nitrógeno orgánico, amoniaco, sales de
amonio, aminoácidos, etc.

16
 REQUERIMIENTOS NO ENERGETICOS

Entre los requerimientos no energéticos de los medios de

cultivo tenemos:
• 1. Fuente de azufre
• 2. Fuente de fósforo
• 3. Iones metálicos
• 4. Factores de crecimiento
• 5. Factores de arranque
• 6. Factores inhibidores

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 • 1. FÓSFORO • 2. AZUFRE

 Se agrega fosfatos de sodio  Se adiciona como SO4,

o potasio. cisteína o metionina.

 El fósforo se incorpora a  En la célula se incorpora

ácidos nucleicos, a aminoácidos y

fosfolípidos, polímeros de diferentes coenzimas.

membrana, ATP, y sustancias

de reserva.

18
 3. K+ , Mg2+ , Ca2+ 4. Na
 Son cationes que estabilizan  Contribuye a equilibrar la
macromoléculas aniónicas. presión osmótica del medio
extracelular.

 K+ actúa como coenzima y

estabilizador de RNA.  Se suele suministrar como
NaCl.

 Mg2+ se integra a la clorofila en

organismos fotosintéticos.

 Ca2+ abunda en esporas como

dipicolinato de calcio.
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5. Factores de Crecimiento

No todas las bacterias son capaces de crecer sobre medios donde se

encuentran cubiertas las necesidades elementales.

Existen bacterias que aún así no crecen en tales medios o, si lo hacen, es

muy lentamente. A este tipo de bacterias les hace falta además una serie de
componentes definidos que muchas bacterias no son capaces de fabricar por
sí solas para su crecimiento.

A este tipo de componentes se denomina factores de crecimiento y van a

corresponder a algún tipo de aminoácido de bacterias muy exigentes o
incluso vitaminas, bases púricas o pirimidinicas, etc.

Agar sangre enriquecido con metionina, ácido glutámico y ácido nicotínico

para el crecimiento de Xanthomonas.

20
 FACTORES DE CRECIMIENTO

• Son compuestos orgánicos requeridos en muy bajas concentraciones.

• No pueden ser sintetizados por la propia célula.

• Deben ser agregados al medio de cultivo

• Pueden ser aportados en forma de:

 Extracto de carne

 Extracto de levadura

 Extracto de malta

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 AGAR CHOCOLATE
Haemophyllus
El Agar Chocolate permite el
desarrollo de colonias húmedas,
lisas y grises del Haemophylus
influenzae.

Este medio contiene hematina

(factor X) y está enriquecido con
otros cofactores, como el NAD
(factor V), que permite el
desarrollo de este
microorganismo.

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 AGAR SANGRE

Bordetella
Agar Sangre enriquecido con
Glicerol - papa (Bordet Gengou)
para crecimiento de Bordetella
pertusis.

Se observa colonias en “gotas de

mercurio” brillantes es fácil de
apreciar.

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 Técnica de siembra por dilución

• Se dispondrá de una batería de tubo» con medio de cultivo específico o agua estéril según los casos.
• Se adicionará una cantidad de muestra sólida o líquida en los tubos sabiendo la cantidad de muestra o inoculo que
se añade en el tubo inicial.
• Se agitará hasta homogeneización.
• Con pipeta estéril se tomará una cantidad específica o exacta y se adicionará al segundo tubo, que se
homogeneiza. Repetimos la operación anterior con el tercer tubo y así sucesivamente hasta obtener la dilución
deseada. 24
 Técnica de siembra por dilución

Con la dilución esperada, por ejemplo! 103 y 104, inocular en placas de cultivo una cantidad
de inoculo exacto y extender con asa de Digrasky previamente estéril.
Incubar a temperatura precisa durante unas 24 horas y posteriormente recontar.
Existen muchas variaciones de este método. Una de ellas es hacerlo en medio de cultivo con
agar, donde se mezcla en los tubos la muestra y se diluyen hasta obtener la dilución 25
deseada; posteriormente son vertidos en placa y se deja solidificar.
 Siembra del inoculo en tubo

• 1.Siembra por estría en tubos con medio sólido inclinado.

Se toma con asa de siembra previamente esterilizada por flameado una
cantidad de muestra adecuada. Se añade al tubo desde el fondo de la
superficie de este, realizando movimientos ascendentes en zig-zag hasta
completar toda la superficie del medio. Este método es utilizado para
conservar cepas durante largos periodos, así como para la realización de
ciertas pruebas bioquímicas, como, por ejemplo, la prueba de la ureasa.

26
 Siembra del inoculo en tubo

• 2.Siembra por picadura.

• Se suelen tomar con hilo de siembra
aunque en algunas ocasiones también
puede hacerse con asa de siembra.
Consiste en introducir el asa en el
medio de cultivo que se encuentra en
el tubo hasta el fondo de éste y en
posición central. Esta técnica se utiliza
para la siembra de medios de cultivo
semisólidos como por ejemplo, el
medio de oxidación fermentación de
Hugh-Leiffson.

27
 .Siembra por picadura

• Se suelen tomar con hilo de

siembra aunque en algunas
ocasiones también puede hacerse
con asa de siembra. Consiste en
introducir el asa en el medio de
cultivo que se encuentra en el
tubo hasta el fondo de éste y en
posición central. Esta técnica se
utiliza para la siembra de medios
de cultivo semisólidos como por
ejemplo, el medio de oxidación
fermentación de Hugh-Leiffson.

28
 Siembra del inoculo en tubo

3. Siembra por picadura y estría.

• Consiste en la utilización de las dos técnicas
anteriormente descritas. Este método se lleva a
cabo cuando el medio es sólido y está inclinado.
Primero se realiza la siembra por picadura y
posteriormente la siembra por estría; son ejemplos
de este tipo de siembra la prueba en medio KIA y la
prueba en medio citrato, entre otras.

29
 CULTIVO DE CEPAS
• Aunque todo lo referente a cultivos se ha estudiado en el
tema correspondiente a cultivos, señalaremos aquí que tras la
preparación de un inóculo y posterior inoculación en el
adecuado medio de cultivo se requerirán una serie de
condiciones para que la siembra pueda desarrollarse y realizar
posteriormente los oportunos estudios cualitativos y
cuantitativos del microorganismo problema. Así pues, de
acuerdo con lo dicho, todo cultivo de cepas para poder crecer
como tal, requerirá de una serie de condiciones adecuadas,
que serán las siguientes:

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METODO DE SIEMBRA EN PLACA POR
ESTRIA CULTIVOS PUROS

• Se esteriliza el asa y luego se extrae

con ella un inóculo del tubo.
• Se hace estrias en la placa extendiendo
los microorganismos.
• El asa se vuelve a esterilizar entre
distintas operaciones.

31
• GRACIAS

32