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“Año del Diálogo y la Reconciliación Nacional”

BIOQUÍMICA CLÍNICA
ADENOSINA DEAMINASA
(ADA)
ESPERMATOGRAMA
ADA
(ADENOSINA DEAMINASA)
Enzima esencial para el desarrollo
del Sistema Inmune.
ADENOSIN DEAMINASA (ADA)
Es una enzima del grupo de las Hidrolasas
involucrada en el catabolismo de las bases purínicas.

Cataliza la desaminación irreversible de


adenosina y 2-deoxiadenosina
(nucleósidos endógenos)
encontrado en cantidades pequeñas a través del cuerpo

A Inosina y Deoxinosina respectivamente


liberando amonio (NH3) en el proceso.
ADENOSIN DEAMINASA (ADA)
La Función Fisiológica Principal
Proliferación y Diferenciación Linfocítica
Marcador de inmunidad celular
Su actividad se encuentra aumentada
Enfermedades: Respuesta Inmune esta mediada por células

Se encuentra en Linfocitos T activados.


Presente en Líquidos Biológicos de procesos inflamatorios
(mediados por inmunidad celular)
Micosis – TBC

Alta sensibilidad y especificidad en TBC pleural, pericárdica,


meníngea, articular y peritoneal.
ADENOSIN DEAMINASA (ADA)
La ADA tiene dos isoenzimas
ADA 1
Ampliamente distribuido (pH óptimo: 7 – 7.5)
Actúa por igual sobre los sustratos
Regulando la Inmunidad Celular
ADA 2
Menos ubicuo, coexiste con la ADA 1
Únicamente en Monocitos y Macrófagos
(pH óptimo: 6.5 y tiene afinidad débil por la 2-deoxiadenosina)

Cuando Monocitos y Macrófagos son infectados por MO


(niveles de ADA 2 y 2-deoxiadenosina se incrementan)
ADENOSIN DEAMINASA (ADA)
La actividad de la ADA en los diferentes Fluidos
Una mezcla de ADA 1 y ADA 2

Estimar la cantidad precisa de cada isoenzima


es complicada y poco práctica.

ADA 2: esta relacionada a procesos de actividad


Linfocitos T y en especial en Tuberculosis
meníngea y pleural.
Enfermedades que cursan Inmunodeficiencia congénita combinada severa
con disminución de ADA Leucemia Linfoide Crónica B

Tuberculosis
Otras enfermedades infecciosas
Fiebre tifoidea
Brucelosis
Toxoplasmosis
Infección VIH
Enfermedades que cursan Hepatitis virales
con aumento de ADA Neoplasias malignas
Conectivopatías
Hepatopatías crónicas
Enfermedades hematológicas
Trastornos de la eritropoyesis
Leucemias y síndromes proliferativos crónicos
Sarcoidosis
Artropatías inflamatorias
DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD
ADENOSIN DEAMINASA (ADA)
Método de Referencia: Bruno Galant y Gitiseppe Giusti
Punto Final Colorimétrico

ADA
Adenosina + H2O + (PO4)2- Inosina + Amoniaco
Medio Tamponado
Iones Amoniaco Quinoneimina + 4 H2O
(560 nm)

ADA cataliza la reacción en un medio tamponado ácido


Produce la liberación de Inosina y amoniaco.
Iones de amonio (acido carbólico-medio alcalino)
Producen una coloración azul intenso (Quinoneimina)
DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD
ADENOSIN DEAMINASA (ADA)
Método de Referencia: Galanti y Giusti modificado
Punto Final Colorimétrico

ADA
Adenosina + H2O Inosina + NH3

Medio Tamponado
Iones Amoniaco Indofenol + H2O
(640 nm)

El NH3 reacciona con el Hipoclorito de sodio y fenol a 37°C


( con Nitroprusiato de sodio en medio alcalino como catalizador)
para formar indofenol de color azul intenso
que es medido a 640 nm.
Reactivos: Color 1 (Acido carbólico); Color 2 (Hipoclorito de sodio);
Estándar (solución de sulfato de amonio: 50U/L); conservar de 2 – 8 °C
Buffer 6.5 (Fosfato de sodio); Adenosina (C10H13N504/ NaN3);
conservar temperatura ambiente

Blanco Estándar Blanco Muestra


Muestra
Muestra --- --- --- 10 ul
Adenosina --- --- 250 ul 250 ul
Buffer 6.5 250 ul 250 ul --- ---
Estándar --- 10 ul ---
Mezclar, tapar los tubos e incubar a 37 °C
---
Color 1 500 ul durante 60 ul
500 minutos; luego500agregar:
ul 500 ul
Muestra --- --- 10 ul ---
Color 2 500 ul 500 ul 500 ul 500 ul
CÁLCULO DE LOS RESULTADOS

(Absorbancia Muestra – Absorbancia Blanco muestra)


ADA (U/L) x Conc. Estándar
(Absorbancia Estándar – Absorbancia Blanco Reactivo)

Ejemplo:
Abs. Muestra: 1.208
Abs. Bl. Muestra: 1.056
Abs. Estándar: 0.259
Conc. Estándar: 50 U/L
Abs. Bl. Reactivo: 0.062
(1.208 – 1.056) x 50 = 38.5 U/L
(0.259 - 0.062)
VALORES DE REFERENCIA
Suero: 11 – 22 U/L
Líquido Cefalorraquídeo: 0 – 6 U/L
Líquido Pleural: 0 – 45 U/L
Líquido Pericárdico: 0 – 20 U/L
Líquido Ascítico: 0 – 40 U/L
Líquido Articular: 0 – 40 U/L
Relación Liquido Pleural / Suero: < 1.3
UTILIDAD CLÍNICA
Establecer la actividad de la Tuberculosis Pulmonar
(marcador evolutivo de la respuesta al tratamiento
convencional de TBC pulmonar)
Diagnóstico de la Meningitis Tuberculosa y en el
diagnóstico Diferencial entre pleuresías tuberculosas y neoplasias.
ESPERMATOGRAMA
Espermograma
Seminograma
GENERALIDADES
Estudio de la pareja infértil
Forma integrada y simultánea (siguiendo un protocolo)
Descartar los problemas más frecuentes
en el hombre como en la mujer.

ANDROLOGÍA
Estudia la infertilidad masculina
y los mecanismos que lo producen

INFERTILIDAD
Incapacidad de tener hijos después de haber mantenido 12
meses de relaciones sexuales
sin uso de métodos contraceptivos
GENERALIDADES
INFERTILIDAD INFERTILIDAD MASCULINA
MASCULINA PRIMARIA SECUNDARIA

Cuando el varón nunca ha Cuando el varón ha tenido


logrado fecundar un hijo anteriormente, y en la
a una mujer actualidad muestra alguna
(alteración en la calidad de alteración en la calidad del
liquido seminal) líquido seminal

Infertilidad no explicada: Infertilidad idiopática:


Cuando los parámetros de Cuando se detecta una alteración
evaluación del líquido en el espermatozoide y/o en la
seminal no demuestra calidad del líquido seminal y las
alteraciones no pueden ser
ninguna anormalidad
demostradas
ESPERMOGRAMA
Prueba esencial para el análisis de la Infertilidad masculina
Estudio de las enfermedades genitales masculinas
El “análisis del semen” o Espermograma
Evaluación de los espermatozoides,
Líquido seminal y presencia de otras células (leucocitos, bacterias)

APORTA INFORMACIÓN:
Proceso de Espermatogénesis
Función de los espermatozoides
Función de las glándulas sexuales accesorias
ESPERMOGRAMA
INDICACIONES DEL
CARACTERÍSTICAS ESPERMATOGRAMA
GENERALES DEL SEMEN
Apariencia – Volumen –
Infertilidad
Infecciones
N° Espermatozoides Genitales – Morfología –
– Motilidad
Varicocele
Vitalidad y presencia
Pérdidas de Leucocitos.
fetales recurrentes
Vasectomía
Recuento y motilidad:Criptorquidia
Determinar si hay suficientes
Tratamientos
Espermatozoides médicos
que puedan alcanzar al ovocito.
(quimioterapia, sulfasalazina, etc)
Morfología:Lesiones
Capacidad de fertilización
en escroto
Orquitis con paperas
Pruebas Complementarias
Exposición ocupacional a(Funcionales)
tóxicos
Correlaciona Vasovasostomía
los resultados con posibles
(reversión de la vasectomía)
alteraciones de los órganos genitales
TOMA DE MUESTRA
Recomendaciones de la Organización Mundial de la Salud (OMS)
La muestra debe ser coleccionada
después de 3 a 7 días de abstinencia sexual.
Dos muestras deben ser colectadas para una evaluación inicial.
Con un intervalo de no menos de siete días ni más de tres meses.
Si los resultados de esos exámenes son marcadamente diferentes,
se deben examinar muestras adicionales.
Idealmente la muestra debe ser coleccionada en un baño privado
cerca al Laboratorio con la alternativa de hacerlo en el domicilio.
La muestra debe ser colectada previa higiene personal por
procedimiento de masturbación y eyaculada en un frasco.
Muestras incompletas no deben ser analizadas.
Las muestras deben estar protegidas de temperaturas extremas.
Las muestras deben estar debidamente rotuladas con el nombre del
paciente, fecha y hora de colección.
PARÁMETROS MACROSCÓPICOS
DEL ESPERMOGRAMA
Evaluación de la apariencia
Color (blanco – gris claro- amarilloso), hematospermia
La licuefacción
Coagulación inmediata (para licuarse 5 – 40 minutos): PSA.
Determinación del volumen
Mayor o igual a 2 ml.
La viscosidad o consistencia
Formación de filamentos no mayor de 2 cm.
pH
Valor normal entre 7.2 – 7.8
PARÁMETROS MICROSCÓPICOS
DEL ESPERMOGRAMA
ESTANDARIZACION DE LA METODOLOGÍA
Evaluación de la motilidad
La vitalidad
Recuento y morfología de los espermatozoides
Examen citobacteriológico
Espermatozoides Dilución Factores de conversión
Anticuerpos
por campo de
antiespermatozoides
(semen + diluyente)
(aglutinación)
Numero de cuadrados contados
400X
ANALISIS MICROSCOPICO INICAL 25 SIN10 DILUIR
5

<Estimar
15 el N°1:5
de (1
espermatozoides
+ 4) y decidir
20 la 8 dilución
4
15 10 ul semen (100X):
– 40 1:10 (1 +filamento
9) de moco10y aglutinación
4 2
1040ul– semen
200 (400X): 1:20observar
(1 + 19) espermatozoides,
5 decidir
2 1 dilución
Temperatura de evaluación: 20 y 24 °C
> 200
Parámetros 1:50 (1 + 49)se deben procesar
microscópicos 2 por 0.8 duplicado.
0.4
PARÁMETROS MICROSCÓPICOS
DEL ESPERMOGRAMA
MOTILIDAD
FACTORES QUE AFECTAN LA MOTILIDAD
“a”:
DE LOS ESPERMATOZOIDES
Varicoceleprogresiva rápida, a una
Espermatozoides con motilidad
Desórdenes
velocidad > 25Endocrinos
um /s a 37°C
Infecciones Genitales
“b”:
Anticuerpos antiespermatozoides
Espermatozoides con Bacteriosperma
motilidad progresiva lenta, a una
velocidadDefectos
entre 5enyla25
colaum /s a 37°C
Anormalidades en las secreciones de la próstata o vesículas
“c”:
seminales
Espermatozoides condelmotilidad
Hábito cigarrillo no progresiva
Consumo excesivo del licor
“d”:
Drogas
EspermatozoidesEstrés inmóviles
PARÁMETROS MICROSCÓPICOS
DEL ESPERMOGRAMA
VITALIDAD
Útil: saber si los espermatozoides inmóviles
están vivos o muertos.
% espermatozoides VIVOS
Coloración con eosina
(10 – 15 ul del semen + 50 ul eosina al 0.5%)
Contar 200 espermatozoides
(coloreados y no coloreados) a 400x.
Los vivos impiden la penetración del colorante,
Los muertos adquieren la coloración.
El resultado se expresa en porcentaje
PARÁMETROS MICROSCÓPICOS
DEL ESPERMOGRAMA
RECUENTO
Utilizar la cámara de Neubauer.
Cuadrante Central (Recuento de Glóbulos rojos)
Se diluye el semen, 10 ul de dilución en ambos lados de la cámara
y se procede a contar (200x - 400x)

10 spz. en cuadrante central: contar los 25 cuadrados


10 – 40 spz: contar 10 cuadrados
> 40 spz: contar sólo 5 cuadrados

Los Resultados se promedian


El valor se divide por el Factor de Conversión
Resultado final: millones de espermatozoides /mL de eyaculado
PARÁMETROS MICROSCÓPICOS
DEL ESPERMOGRAMA
MORFOLOGIA
Examen detallado de 200 espermatozoides
Placa coloreada con PAP o Gram (por duplicado).
Utilizar aumento de 1000x
Según la OMS: es normal encontrar
30% de los espermatozoides normales en los individuos fértiles
20% de morfología normal

EVALUACION DE LAS ANORMALIDADES


Defectos de la cabeza
Segmento intermedio
Cola
Presencia de gotas citoplasmáticas
PARÁMETROS MICROSCÓPICOS
DEL ESPERMOGRAMA
AGLUTINACION
Sugestiva de presencia de anticuerpos antiespermatozoides
Evaluar al momento de determinar la motilidad
Se reporta semicuantitativamente en escala de cruces
PRUEBAS ESPECIALIZADAS DEL SEMEN
Cultivo del semen
ANTICUERPOS ANTIESPERMATOZOIDES
Acido cítrico
Pueden inducir la aglutinación,
Zinc inmovilización
o lisis de losFructosa
espermatozoides
Son del tipo IgAFosfatasa
e IgGácida
(rara vez IgM)
Pruebas de hinchazón hipo-osmótica
Técnica: Inmunoesferas y la reacción
Penetración en ovocito de hámstermixta de
Antiglobulina
Pruebas de unión a la (MAR)
zona pelúcida
Pruebas de reacción acrosomal
BIOQUIMICA SEMINAL
ORIGEN COMPUESTO
 VESICULA SEMINAL FRUCTUOSA, ACIDO ASCÓRBICO

 PRÓSTATA ZINC, FOSFATASA ACIDA Y ACIDO CITRICO

 EPIDÍDIMO ALFAGLUCOSIDASA - GLICERILFOSFORILCOLINA

ALFAGLUCOSIDASA
Marcador de la Función del Epidídimo
FRUCTUOSA CORREGIDA y PROLACTINA
Marcadores de la Vesícula Seminal
FOSFATASA ACIDA y ZINC
Marcadores de la Función Prostática
MÉTODOS USADOS EN
BIOQUIMICA SEMINAL
ALFAGLUCOSIDASA: Método Descrito por Cooper y Col.
Valor referencial: Mayor de 80 mU / eyaculado
ZINC: Método Descrito por Lampugnani y Col.
Valor Referencial: 80 - 250 ug /ml
FOSFATASA ACIDA: Método Colorimétrico
Valor referencial : 400 - 700 U/L
FRUCTUOSA : Método Colorimétrico
Valor Referencial: 1.2 - 4.0 mg /ml
FRUCTUOSA CORREGIDA : Método Dr. González
Valor Referencial: 2.5 - 2.8 mg/ml/mill. Espermt /ml
NOMENCLATURA DE ALGUNAS
VARIABLES DEL LÍQUIDO SEMINAL
TERMINO DESCRIPCION

NORMOZOOSPERMIA Eyaculado normal


OLIGOZOOSPERMIA < de 20 millones de spz por mL
POLIZOOSPERMIA Más de 250 millones de spz por mL
ASTENOZOOSPERMIA < 50% de spz con motilidad progresiva (“a” y “b”)
ó < de 25% de spz con motilidad de categoría “a”
TERATOZOOSPERMIA Menos de 30% de spz con morfología normal
OLIGOASTENOTERATOZOOSPERMIA Alteración de las tres variables
AZOOSPERMIA Ausencia de espermatozoides en el eyaculado
ASPERMIA Ausencia de eyaculado
HIPERESPERMIA Más de 6 mL de eyaculado
HIPOSPERMIA Menos de 2 mL de eyaculado
NECROZOOSPERMIA Más del 40% de espermatozoides muertos
VALORES NORMALES
DEL ESPERMOGRAMA (según la OMS)
PARÁMETRO VALORES NORMALES
VOLUMEN > 2 mL
pH 7.2 a 7.8
TIEMPO DE LICUEFACCIÓN < de 30 minutos
CONCENTRACIÓN DE SPZ 20 A 250 X 106 / mL
RECUENTO TOTAL DE SPZ 40 X 106 / mL
MOTILIDAD > 50% (categoría “a” y “b” )
> 25 % (categoría “a”)
MORFOLOGÍA > 30% de formas normales
LEUCOCITOS < 1 X 106 / mL
FRUCTUOSA 1.2 - 4.0 mg / mL
FRUCTUOSA CORREGIDA 2.5 - 8.0 mg/ml/mill spz/mL
FOSFATASA ACIDA 400 - 700 u / L
ZINC 80 - 250 ng / mL
ALFAGLUCOSIDASA > 80 mU / eyac.
PROLACTINA SEMINAL 6 - 23 ng /mL
INMUNOPERLAS < 10 % de spz, adheridas a las perlas.