Unidad II: Métodos Analíticos

para la Cuantificación

Plan 2016 - Nivel IV

Carrera de Químico Laboratoristas

Fernando Choquehuanca Humire
Ingeniero Químico Ambiental
Magíster en Medio Ambiente m/Ingeniería de Tratamiento de Residuos
Contacto: fchoquehuanca@gmail.com
 Contenidos de la Unidad
• Métodos Analíticos
▫ Cualitativos
▫ Cuantitativos
▫ Electroquímicos
• Métodos Instrumentales
▫ Op
▫ Decretos Supremos
▫ Reglamentos
▫ Normas Chilenas
 Química Analítica
• “La Química Analítica es una rama de la Ciencia que
trata acerca de la caracterización de las sustancias
químicas”.

• El conocimiento de la composición de la materia

presenta los aspectos de:
▫ Identificación de los grupos químicos presentes en ella
(moléculas, átomos, iones)
▫ Determinación de la proporción en la que dichos grupos
constituyen la muestra.

• Estos campos de acción dan lugar a la clásica división de

la Química Analítica en Cualitativa y Cuantitativa.
Según la naturaleza de los objetos analizados, puede tomar
distintas acepciones, como “Análisis Clínico”, “Análisis de
Alimentos”, “Análisis Ambiental”, “Análisis Farmacéutico”,
“Análisis de Suelos”, “Análisis de Minerales”, etc.
 Métodos Analíticos
Gravimetría
Cuantitativo
Químicos Volumetría
Cualitativo

Métodos
Ópticos

Instrumentales Electroquímicos

De Separación
 Métodos Analíticos
• Los métodos químicos se caracterizan por estar basados en las
reacciones químicas y aunque se clasifican habitualmente en
cualitativos y cuantitativos, la mayoría de los métodos
analíticos pueden suministrar información cualitativa y
cuantitativa, según los parámetros que se utilicen.

• Cualquier propiedad de la materia susceptible de ser medida

tiene, en principio, aplicación analítica. Surgen de este forma
los métodos instrumentales, para los cuales no es esencial el
concurso de una reacción química. Estos métodos
normalmente no son absolutos, ya que la relación entre la
propiedad medida y la concentración del componente de
interés suele ser relativamente compleja.
 Métodos Analíticos Cualitativos

Marchas
Sistemáticas
Inorgánicos
Identificaciones
Directas
Cualitativos
Métodos Análisis
Químicos Elemental
Cuantitativo Orgánicos
Análisis
Funcional
 Métodos Cualitativos
• El Análisis Cualitativo tiene por objeto el
reconocimiento o identificación de los elementos o
de los grupos químicos presentes en una muestra.

• Actualmente, en análisis cualitativo inorgánico

existen dos tendencias claramente definidas: la que
se basa en la utilización de marchas sistemáticas,
basadas en la separación en grupos, y la que utiliza
la identificación directa, sin separaciones.
 Métodos Cualitativos
• Mientras que en análisis inorgánico la finalidad fundamental
reside en la identificación de los iones (cationes y aniones), en
análisis cualitativo orgánico se persigue la identificación de
los elementos y grupos funcionales que integran la muestra.

• Debido a la complejidad de muchas muestras orgánicas, la

sistematización es más difícil y está menos conseguida que en
análisis inorgánico.

• Por otra parte, el extraordinario éxito alcanzado por algunos

métodos instrumentales (espectroscopia UV-visible o IR,
RMN, cromatografía y espectrometría de MS) en la
determinación estructural de compuestos orgánicos hace que
cada día se apliquen más extensamente estos métodos con
fines típicamente analíticos.
Métodos Analíticos Cuantitativos
A-B

Complejos
Volumétrico
Redox
Cualitativo
Métodos
Químicos Precipitación
Cuantitativo

Precipitación

Gravimétrico Extracción

Volatilización
 Métodos Cuantitativos
• El fundamento de los métodos clásicos de
Análisis Cuantitativo es la aplicación de las
leyes de la estequiometría.

• La forma de proceder es tomar una cantidad

perfectamente determinada de muestra (en
peso o en volumen) y someterla a reacciones
químicas que tengan lugar de forma
prácticamente completa y en las que
intervenga el componente a determinar,
deduciéndose la cantidad buscada del peso
del producto de la reacción (métodos
gravimétricos) o del volumen de reactivo
consumido (métodos volumétricos).
 Métodos Cuantitativos
• En general, puede decirse, que la mayor parte
del análisis es cuantitativo, ya que
frecuentemente se conoce la composición
cualitativa de la muestra por su origen.

• En caso contrario, la identificación cualitativa ha

de preceder a la determinación cuantitativa, ya
que los resultados de la primera sirven de guía
para la selección del método y el procedimiento
a emplear en la segunda.

• De todas formas, los ensayos cualitativos son

cuantitativos en alguna medida y proporcionan
información semicuantitativa, ya sea por la
cantidad de precipitado, por la intensidad de un
color, la densidad de ennegrecimiento de una
línea espectral sobre una placa fotográfica, etc.
 Ejemplos en la Práctica
• Ensayos Cualitativos
▫ Análisis Inorgánicos
 Identificación de As, Pb, Hg
 Ensayos de Toxicidad
▫ Análisis Orgánicos
 Determinación de HC
 Determinación de azúcares reductoras
 Determinación de tipos de COVs

• Ensayos Cuantitativos
▫ Gravimetría
 Análisis de Sólidos Suspendidos, Disueltos, etc.
 Determinación de Aceites y Grasas
 Determinación de Material Particulado
▫ Volumetría
 Determinación de la DQO y OD por Titulación Redox
 Determinación del OD por Titulación Redox
 Determinación de la Dureza por Titulación Complexométrica
 Determinación de la Alcalinidad por Titulación A-B
 Determinación de Cloruros por Titulación de Precipitación
Métodos Analíticos Instrumentales
Absorción

Espectroscópicos Emisión

Fluorescencia

Óptico Dispersión

Método Electroquímico Refracción

No
De Separación Reflexión
Espectroscópicos

Difracción

Polarización
 Métodos Instrumentales
• El desarrollo que los métodos instrumentales han
experimentado en las últimas décadas ha constituido uno de
los mayores avances del análisis químico, pues, con su
colaboración se mejoran condiciones en cuanto a sensibilidad,
selectividad, rapidez, automatización (autosampler), etc.
 Métodos Ópticos
• Los métodos ópticos de análisis, son aquellos que
miden la interacción de la radiación
electromagnética con la materia; ya sea la que es
absorbida por la materia o que emana de ella
(emitida)

• De forma básica se pueden clasificar en:

▫ Espectroscópicos: Miden la intensidad de la energía
radiante
▫ No Espectroscópicos: Miden el cambio de una
propiedad física de la radiación (dirección)
 Radiación Electromagnética
La energía electromagnética viaja a través de
una perturbación vibracional de
comportamiento ondulatorio, el cual está
compuesto por dos campos perpendiculares
entre sí

No olvidar que es el campo eléctrico

quien debe interactuar con la materia
 Radiación Electromagnética (EM)
• Es una forma de energía que está a nuestro alrededor y
toma muchas formas, como las ondas de radio,
microondas, rayos X y rayos gamma.

• La luz solar es también una forma de energía EM, pero la

luz visible es sólo una pequeña porción del espectro EM,
que contiene una amplia gama de longitudes de onda
electromagnéticas.
Espectro Electromagnético
 ¿Qué ocurre entre la energía EM y la Materia?
• La energía incidente puede sufrir diversos fenómenos:
▫ La luz se dispersa en el material
▫ La luz es absorbida por la materia
▫ La luz puede ser transmitida y refractada, o bien, reflejada
▫ Puede existir emisión de energía, sin haz de luz incidente, sino
que proviene del interior de la materia, como producto de un
proceso interno.
 En Resumen..
• Estos diferentes tipos de radiación, como
presentan diferentes niveles de energía, va a
afectar a la materia, a diferentes niveles de
penetrabilidad.

▫ Rayos Gamma ⇒ Excitación de los protones y

electrones de la materia (transiciones nucleares).

▫ Rayo X ⇒ Excitación de los electrones más

internos de la materia.

▫ UV-Vis ⇒ Excitación de los electrones de valencia

de las moléculas.

▫ IR ⇒ No excita electrones, pero si genera

vibraciones moleculares.

▫ Microondas ⇒ Sólo genera rotación molecular.

▫ Ondas de Radio ⇒ Sólo afectará a los Spin Nuclear

 Tipos de Métodos Ópticos
• Métodos de Absorción
▫ Cuando una fuente de energía radiante, como un haz
de luz blanca, se pasa a través de una solución, el haz
emergente será de menor intensidad que el haz que
entra.

▫ Si la solución no tiene partículas en suspensión que

dispersen la luz, la reducción en intensidad se debe
principalmente a la absorción por la solución. La
medida en que se absorbe la luz blanca es por lo
general mayor para algunos colores que para otros,
con el efecto de que el haz emergente tiene color.
La transmitancia (T) se define como
la cantidad de energía que atraviesa
un cuerpo en determinada cantidad
de tiempo.
𝐼
𝑇=
𝐼𝑜

Absorbancia (A) es la medida de la

cantidad de luz absorbida por una
solución. Se mide con un colorímetro
o con un espectrómetro.

𝐴=𝜀∙𝑙∙𝑐

1
𝐴 = − log 𝑇 = log
𝑇

log 𝑇
𝑐=−
𝜀∙𝑙
Espectrofotómetro UV-Visible y
Colorímetro

Espectrofotometro Marca Colorímetro Smart3

Thermo Spectronic Colorímetro de lectura directa para un
Modelo Genesys 10 análisis del agua en campo y en el
laboratorio, cuenta con un Software fácil
de usar que permite al analista elegir un
factor de prueba sobre los 80 parámetros
pre-programados utilizando los sistemas
de reactivos LaMotte.
 Espectroscopia de Absorción Atómica
(EAA)
• La espectrofotometría de absorción atómica ha adquirido amplia aplicación
en la ingeniería ambiental en la última década debido a su versatilidad para
la medición de trazas de la mayoría de los elementos en el agua.

• Los elementos como el As, Cu, Fe, Mg, Ni y Zn se pueden medir con
precisión hasta una pequeña fracción de 0,001 mg/l. También cuantifica
metales alcalinos, alcalinotérreos, de transición y de otros elementos en
disolución acuosa.

• La ventaja de la espectofotometría de absorción atómica es que es bastante

específica para muchos elementos. La absorción depende de la presencia de
átomos libres no excitados en la llama, que están presentes en más
abundancia que los átomos excitados. Por tanto, algunos elementos como el
zinc y el magnesio, que no son fácilmente excitados por la llama y, en
consecuencia, los resultados con el fotómetro de llama son deficientes, se
pueden medir fácilmente por el método de absorción atómica.
 Esquema Básico de un EAA
Lámpara de Cátodo
Huevo (HCL)

Acetileno
Oxidante Angulo del Mechero
N2O
Reductora 0°, 45°, 90°
Estequeométrica
Medida: 5 o 10 cm
Formas de Trabajar con EAA
Formas de Trabajar con EAA
Por Generación de Hidruros
 Tipos de Métodos Ópticos
• Métodos de Emisión

▫ Mientras que los métodos precedentes han sido hasta hace poco
los más usados en el análisis del agua, hay muchos otros métodos
de emisión que están comenzando a utilizarse más, que emplean
métodos de excitación más potentes que la llama.

▫ Estos métodos pueden hacer extensivo el análisis a todos los

elementos metálicos o no metálicos.

▫ Los instrumentos de emisión están especialmente adaptados para

el análisis de muestras sólidas y acuosas, por tanto, se emplean
con frecuencia para el análisis de metales en lodos y en otros
desechos complejos.
 Espectroscopia de Emisión Atómica
(EEA)
• Mientras que los métodos precedentes han sido hasta hace poco los más
usados en el análisis del agua, hay muchos otros métodos de emisión que
están comenzando a utilizarse más, que emplean métodos de excitación
más potentes que la llama.

• Estos métodos pueden hacer extensivo el análisis a todos los elementos

metálicos o no metálicos. Los instrumentos de emisión están especialmente
adaptados para el análisis de muestras sólidas y acuosas, por tanto, se
emplean con frecuencia para el análisis de metales en lodos y en otros
desechos complejos.
 Espectroscopia de Emisión por Llama
• Este método se utiliza en el análisis
del agua para determinar la
concentración de los metales
alcalinos o alcalinotérreos como el
Na, el K y el Ca.

• El espectro emitido por cada metal

es diferente, y su intensidad
depende de la concentración de los
átomos en la llama.

• La longitud de onda de la línea

espectral atómica da la identidad
del elemento, mientras que la
intensidad de la luz emitida es
proporcional a la cantidad de
átomos del elemento.
EEA vs EAA
 Espectroscopia de Emisión
Atómica de Plasma Acoplado
Inductivamente (ICP-OES)
• El ICP-OES utiliza plasma
acoplado inductivamente para
producir electrones excitados e
iones que emiten radiación
electromagnética en longitudes
de onda característica de un
elemento particular.

• Presenta excelentes límites de

detección y rango dinámico
lineal, capacidad multielemento,
interferencia química baja y una
señal estable y reproducible.
 Plasma
• Mezcla gaseosa (Ar) conductora de la electricidad, que contiene un
gran número de electrones y cationes, con carga neta cero.

• Las especies conductoras son los iones del Ar, los electrones y los
cationes de la muestra (en menor proporción).

• Los iones Ar absorben la energía de una fuente externa y mantienen

la ionización y temperatura del orden de hasta 10.000 K en el
núcleo del plasma.

• Tipos de Plasmas:
▫ Plasma de Acomplamiento Inductivo (ICP)
▫ Plasma de Corriente Continua (DCP)
▫ Plasma Inducido por Microondas (MIP)

https://www.youtube.com/watch?v=0NNcrB7aUK4
EAA (AAS) vs ICP-OES
 Espectroscopia de Fluorescencia
• La espectrometría de fluorescencia (también llamada fluorometría o
espectrofluorimetría) es un tipo de espectroscopia electromagnética que
analiza la fluorescencia de una muestra.

• Se trata de utilizar un haz de luz, por lo general luz ultravioleta, que excita
los electrones de las moléculas de ciertos compuestos y provoca que emitan
luz de una menor energía, generalmente luz visible (aunque no
necesariamente).

• Los dispositivos que miden la fluorescencia se llaman fluorómetros o

fluorímetros.

• Es posible:
▫ Determinar Aminoácidos Aromáticos Mayor Aplicación
▫ Concentración Proteínas verde fluorescente (GFP) en la Biología
▫ Determinar estructuras secundarias de proteínas Molecular
▫ Fluorofósforos
 Principio de la
Fluorescencia

Mecanismo de la
Fluorescencia
 Espectroscopia de Rayos X
• Los rayos X son radiaciones electromagnéticas de longitud de
onda corta; se usan con fines analíticos, del mismo modo que
otras radiaciones de longitud de onda más larga, con la luz
visible.

• La absorción de los rayos X sigue las mismas leyes de

absorción que las otras radiaciones, excepto que el fenómeno
es a nivel atómico, en vez de molecular.

• La absorción de los rayos X es usada para la medición de la

presencia de elementos pesados en sustancias compuestas
principalmente de materiales de bajo peso atómico. Un
ejemplo es la determinación de la cantidad de uranio en
solución.
Mecanismo de Rayos X
Espectroscopia de FRX
La técnica de Fluorescencia de
Rayos X (FRX o XRF) se basa en
el estudio de las emisiones de
fluorescencia generadas después
de la excitación de una muestra
mediante una fuente de rayos X.

La radiación incide sobre la

muestra excitando los átomos
presentes en la misma, que
emiten a su vez radiación
característica denominada
fluorescencia de rayos X.
 Espectroscopia de Masas
• Técnica analítica que determina la masa molecular de
una muestra mediante la relación masa (m) y carga (z).

• Puede facilitar la identificación de un gran número de

compuestos orgánicos específicos presentes en el agua y
en el agua residual.
• Ésta poderosa herramienta que cada vez se usa con mayor
frecuencia; está ayudando a resolver muchos problemas
analíticos difíciles y ha servido bastante para mejorar nuestro
conocimiento sobre la naturaleza y el destino final de los
materiales orgánicos en el ambiente, y para el desarrollo de
medidas técnicas de control
 Espectroscopia de Infrarroja (IR)
• Casi todos los compuestos químicos orgánicos presentan marcada
absorción selectiva en la región infrarroja. Sin embargo, el espectro
infrarrojo es mucho más complejo comparado con el ultravioleta o
el visible. La radiación infrarroja es de baja energía y su absorción
por una molécula causa toda clase de cambios sutiles en su energía
rotacional o vibracional.

• La comprensión de estos cambios requiere un gran conocimiento de

mecánica cuántica, ya que sabiendo esto es posible identificar
agrupaciones atómicas particulares que estén presentes en una
molécula desconocida.

• Este método se utiliza, por ejemplo, para medir la concentración de

carbono orgánico total cuando hay solo pequeñas cantidades de
carbono en el agua.
Espectroscopia de Infrarroja (IR)
Frecuencias de Tensión en el IR
Espectros de IR
Métodos Analíticos Instrumentales

Potenciométricos

Óptico

Conductimetría

Método Electroquímico

Culombimétricas

De Separación

Voltamperométricos
 Potenciometría
• La potenciometría no es más
que la medición de la
diferencia de potencial de una
celda electroquímica.

• El potenciómetro se conforma
por un electrodo de referencia,
un electrodo indicador y un
dispositivo para medir esa
diferencia de potencial. 𝐸𝑐𝑒𝑙𝑑𝑎 = 𝐸𝑖𝑛𝑑 − 𝐸𝑟𝑒𝑓 + 𝐸𝑗
 pH-metro
• El pH-metro es un sensor utilizado en el
método electroquímico para medir el pH de
una disolución.

• La determinación de pH consiste en medir

el potencial que se desarrolla a través de una
fina membrana de vidrio que separa dos
soluciones con diferente concentración de
protones. En consecuencia se conoce muy
bien la sensibilidad y la selectividad de las
membranas de vidrio delante el pH.

• Una celda para la medida de pH consiste en

un par de electrodos, uno de calomel (Hg,
Hg2Cl2) y otro de vidrio, sumergidos en la
disolución de la que queremos medir el pH.
 Conductimetría
• La conductimetría es un método electroanalítico basado en la
conducción eléctrica de los iones en solución, que se utiliza para
medir la molaridad de una disolución, determinada por su carga
iónica, de gran movilidad entre dos puntos de diferente potencial.

• Todos los iones contribuyen al proceso de conducción, pero la

fracción de corriente transportada por cada especie está
determinada por su concentración relativa y su movilidad inherente
en el medio.
Métodos Analíticos Instrumental
Ópticos
En Papel
Cromatografía
Métodos Electroquímicos Plana
En Capa Fina

De Separación
Gaseosa

Cromatografía
Líquida
en Columna

Fluidos
Supercríticos
 Cromatografía
• La Cromatografía es una técnica de separación en la que los
componentes de una muestra se separan en dos fases: una fase
estacionaria de gran área superficial, y una fase móvil.

• El objetivo de la fase estacionaria es retrasar el paso de los

componentes de la muestra.

• Cuando los componentes pasan a través del sistema a diferentes

velocidades, estos se separan en determinados tiempos.

• Cada componente tiene un tiempo de paso característico a través del

sistema, llamado tiempo de retención.

• La separación cromatográfica se logra cuando el tiempo de

retención del analito difiere del resto de componentes de la muestra.
 Cromatografía Líquida
• Es una de las técnicas analíticas ampliamente
utilizadas, la cual permite separar físicamente los
distintos componentes de una solución por la
adsorción selectiva de los constituyentes de una
mezcla.

• En toda cromatografía existe un contacto entre dos

fases, una fija que suele llamarse fase estacionaria,
y una móvil (fase móvil) que fluye constantemente
durante el análisis, y que en este caso es un líquido o
mezcla de varios de ellos.
 Cromatografía Líquida
• La fase estacionaria por su parte puede ser alúmina, sílice o resinas
de intercambio iónico que se encuentran disponibles en el mercado.

• Los intercambiadores iónicos son matrices sólidas que contienen

sitios activos (también llamados grupos ionogénicos) de carga
electrostática (positiva o negativa). De esta forma, la muestra se fija
al soporte sólido por afinidad electrostática. Dependiendo de la
relación carga/tamaño algunos constituyentes de la mezcla se
retendrán con mayor fuerza sobre el soporte sólido que otros, es
decir serán adsorbidos, lo que provocará su separación.

• Las sustancias que permanecen más tiempo libres en la fase móvil

avanzan más rápidamente con el fluir de la misma, y las que quedan
más unidas a la fase estacionaria o retenidas avanzan menos y por lo
tanto tardarán más en salir o fluir. Éste es el principio fundamental
de la cromatografía.
 HPLC (Cromatografía Líquida de Alta Eficacia o
High Performance Liquid Chromatography)

https://www.youtube.com/watch?v=qXmSb6Xwr5k
 Cromatografía Gaseosa
• En cromatografía de gases la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza
de una columna cromatográfica. La elución se produce por el flujo de una
fase móvil que es un gas inerte (He, H2, N2) , y a diferencia de la mayoría de
los tipos de cromatografía, la fase móvil no interacciona con las moléculas
del analito; su única función es la de transportar el analito a través de la
columna.

• Método de Inyección
• Velocidad de Flujo
• Temperatura

RENDIMIENTO
Tipos de Sensores en GC
 GC-FID (Detector de Ionización de la
Llama)
• La cromatografía de gases con
detector de ionización de llama
o GC-FID es una técnica
analítica muy común cuyo uso
está muy extendido en los
mercados petroquímicos,
farmacéuticos y de gas natural.

• Un detector de ionización de
llama suele utilizar una llama de
aire o hidrógeno por la cual se
pasa la muestra para oxidar las
moléculas orgánicas y que
produce partículas con carga
eléctrica (iones).

• Los iones se recogen y se Ver vídeo

produce una señal eléctrica, que https://www.youtube.com/watch?v=9nYpjtRx0Zs
se mide a continuación.
GC – PID (Detector de Fotoionización)
• La cromatografía de gases con
detector de fotoionización o GC-PID es
una técnica empleada en el análisis de
una amplia gama de hidrocarburos
aromáticos y otros compuestos
orgánicos.

• Una de las aplicaciones habituales es

el análisis de la contaminación del
agua por la presencia de
hidrocarburos.

• El detector de fotoionización utiliza

luz UV para ionizar los componentes
de la columna. Los electrodos captan
los iones y la corriente generada mide
la concentración.
 FID vs PID
• La sensibilidad de PID es dependiendo del potencial
de ionización del compuesto de que se trate; la
respuesta del detector frente a los compuestos
orgánicos sigue el orden general:

Aromáticos > Alquenos > Alcanos > Alcoholes > Ésteres >
Aldehídos > Cetonas

• En general, el PID es entre 5 y 10 veces más sensible

que el FID frente a los alcanos y es 35 veces mucho
más sensible en los compuestos aromáticos.
 GC vs HPLC
• Respecto a la cromatografía líquida, la cromatografía de gases tiene la ventaja de disponer
de detectores mucho más universales (por ejemplo, el de ionización de llama). Además,
para numerosas aplicaciones, los métodos son más simples, más rápidos y más sensibles
que los correspondientes a la cromatografía líquida de alta resolución.

• La instrumentación requerida para cromatografía de gases también es mucho más sencilla

y económica que la empleada en HPLC. Sin embargo, en cromatografía de gases, la
influencia de la temperatura sobre la distribución del equilibrio es considerable, a
diferencia de la cromatografía líquida. Por ello, la cromatografía de gases presenta
limitaciones en tres casos:

▫ Compuestos poco volátiles, generalmente los de peso molecular superior a 300 u.m.a.
▫ Compuestos sensibles a una elevación de la temperatura incluso moderada (determinados
compuestos de interés biológico)
▫ Compuestos que se encuentran en forma iónica (puesto que son e n general poco volátiles)

• Por esta razón, la cromatografía de gases se emplea cuando los componentes de la mezcla
problema son volátiles o semivolátiles y térmicamente estables a temperaturas de hasta
350-400ºC. En cambio, cuando los compuestos a analizar son poco volátiles y/o
termolábiles, la técnica separativa adecuada suele ser la cromatografía líquida de alta
resolución (HPLC).

• A menudo la cromatografía de gases se emplea para confirmar de la presencia o ausencia

de un compuesto en una muestra determinada.