Microbiología General

(Esos locos “bichitos”…)

2° Cuatrimestre 2018

Tema 2: Biología celular microbiana: Estructura y función celular

Anatomía de células procariotas. Pared celular de procariotas. Bacterias Gram (+)

y Gram (-). Síntesis de pared y división celular.
Estructuras externas a pared celular: glucocalix, flagelos, filamentos axiales,
fimbrias y pili. Estructuras internas a pared celular: membrana plasmática,
citoplasma, región nuclear, ribosomas, inclusiones, endosporas.
Motivación: Familiarizarnos con las estructuras y
componentes básicos de una célula procariota
(bacteria) y sus roles en la fisiología y adaptación
al medio externo.

• Organización de la célula procariota típica.

• Componentes celulares básicos.

• Demoliendo “mitos” la célula procariota tiene citoesqueleto?.

Características típicas de una célula (procariota o eucariota)

• Autoreplicación - (Crecimiento)
Capacidad de producir copias de sí mismo

• Autoalimentación (Nutrición) Sistema abierto

Dk#h
? • Interacción con el medio externo (Señalización Química)

• Evolución
El Juego de las diferencias (plantas y hongos)

0.1-

Epulopiscium fishelsoni

nanobacterias
Apatita
200-700 µm de largo
Es un candidatus 200-300nm
El Juego de las diferencias

• Tamaño

• Morfología

• Disposición del Material Genético (ADN)

• Organelas

• Citoesqueleto??
 El tamaño importa…

3000
(ballena azul) Epulopiscium fishelsoni 600 um

Lyngbya majuscula 80 um Cianobacteria

615 um por segundo

Thiovulum majus 18 um
GRAN
DIVERSIDAD
Escherichia coli 1-2 um
Enterobacteria

Ausencia de
Mycoplasma pneumoniae 0.2-0.5 um Peptidoglicano

(Abeja) Multiresistente

Parasito
 Tamaño celular Propiedades biológicas
La importancia de ser pequeño
- Aumento de la velocidad de ingreso
de los nutrientes y salida de desechos.
r = 0.5 mm Superficie (4.p.r2) = 9.86 mm2 -Aumento en la velocidad de
(E. coli) Volumen (4/3.p.r3) = 2.1 mm3 S / V = 4.7 crecimiento.
-Mayores tamaños de población.
-Impacto ecológico.
-A menor radio mayor superficie
disponible.
-Eficiencia en la difusión de nutrientes
hacia el interior.

-Mayor número total de mutaciones

r = 10 mm Superficie (4.p.r2) = 1256 mm2

(Hepatocito) S / V = 0.3
Volumen (4/3.p.r3) = 4186.66 mm3

La velocidad de su metabolismo es inversamente proporcional al cuadrado de

su tamaño.

Por su tamaño, las bacterias poseen una gran superficie especifica de

interacción con el medio
Gran diversidad morfológica…

MORFOLOGÍA BACTERIANA ARREGLOS BACTERIANOS

 Salmonella enterica

Streptococcus pneumoniae

Staphylococcus aureus

Vibrio cholerae

actinomycetes
Treponema pállidum
 Inclusiones

Fimbrias
 Membrana celular o plasmática
•Esteroles micoplasmas y bac. Metanotrofas. (Arqueas)

•Los lípidos se unen al glicerol mediante enlaces esteres. D-glicerol

Ac. grasos
Fosfato
•Interacciones ionicas con Ca y Mg y los grupos polares negativos de los fosfolípidos.

•Fluidez , movimiento, transporte, permeabilidad, proteías periplasmáticas, proteínas

para la obtención de energía. región hidrofílica

región hidrofóbica

8nm
Fase acuosa

ARQUEAS
• Los lípidos se unen al L-glicerol (esteroisómeros) mediante enlaces eter,
proporciona adaptación.

•El grupo glicerol es estequiometricamente contrario (enantiomeros), originados por enzimas

diferentes y antiguas

• Los lípidos arqueanos contienen cadenas isoprenoides ( ramificada) con anillos propano y ciclo
Hexano

•Pueden tener una monocapa lipidica resistente con las colas hidrofóibcas unidas.
• Eubacteria: unidad de membrana = bicapa P-lípidos (ac.
grasos)
+ proteínas (+ hopanoides)

Bacteriohopanepoliol

2+ 2+
Se estabiliza con iones Ca y Mg
•Aporta rigidez
hopanoide
•Resistencia a etanol
•Aislar del oxígeno

• Archaea: bicapa (o monocapa) de

éteres de glicerol e isoprenoides
 Unidad básica de la membrana: FOSFOLIPIDOS, anfipáticos (derivados del ácido fosfatídico)

Eubacterias: Fosfatidilglicerol (10%)

glicerol

Cardiolipina (20%)

Fosfatidiletanolamina (70%)

fosfato

Ac. grasos
Fluidez rigidez
Doble enlace
glicerol
etanolamina
• Variación de ac. grasos y de los compuestos fosforilados que se unen al esqueleto de glicerol
•Está involucrada en la producción de energía separando H+ de OH- en forma de energía potencial
(fuerza protón motriz).

•Puede ser traspasada por moléculas hidrofóbicas y por el agua.

• Modelo mosaico fluido (estructura dinámica)
“Lipids Rafts”

Proteínas distribuidas
por bloques
•Tienen menos fluides
•Tamaño variable
•Involucrada en procesos de señalización celular (glicosilfosfatidilinositol)

CL-cardiolipinas
PG-fosfatidilglicerol

Representación esquemática
de la membrana de Bacillus subtilis
También en Borrelia burgdoferi (espiroqueta, enfermedad de Lyme)

•Lipid rafts ricos en colesterol

•Similares características en la síntesis y
organización de los rafst de eucariotas.
•Se aislaron membranas resistentes a
detergentes.
•Intervienen en la estabilidad de la membrana.
TEM
biotina-polietilenglicol-dipalmitoil-fosfatidiletanolamina (biotin-PEG-DPPE)

Y en muchos otros modelos….Sthapylococcus aureus, E. coli, Salmonella…

(¿blanco terapéutico?)
Modelo VIH-estatinas
Los procesos fisiológicos más relevantes para procariotas ocurre en la membrana
plasmáticas:

• Transporte de nutrientes

• Respiración

• Fotosíntesis

• Detección de señales ambientales

• Motilidad
Pared celular

Tinción de Gram Hans Christian Joachim Gram

(1853 – 1938, Danés)

Cocos “Gram +” Bacilos “Gram -”

 Peptidoglicano (Mureína o PG) como elemento común
GRAM + GRAM -
mesosomas

Ac. teicoico
PEPTIDOGLICANO

D-aa???

Configuración D?

Enlaces peptídicos
Gramnegativas hacen enlace peptídico entre El amino del diaminopimélico y carboxilo de la D-alanina
terminal de otra cadena.

 Grampositivas el puente interpeptídico está formado por cinco glicinas.

 Gram + Gram –

pentaglicina

Enlace peptídico directo del grupo amino del diaminopimelico

Con el grupo carboxilo de la D-alanina terminal.

Transpeptidasas
Realiza enlaces cruzados en la formación de las cadenas que constituyen al peptidogicano en la pared celular.
DIVERSIDAD DEL PEPTIDOGLICANO

• Solo se encuentra en el dominio Bacteria

•El acido diamino pimelico DAP solo se encuentra en bacterias Gram (– ) y algunas Gram (+)

•La presencia de aminoácidos D-alanina y D-glutamico con configuración D es particular de la

pared, los aminoácidos tienen configuración L.

• La estructura del PG es estable solo puede variar en el tetrapeptido de lisina o DAP.

•El aminoácido D-glutámico solo puede variar por sustituciones en la posición 1-3.

• Algunos microorganismos como el Mycoplasma pneumoniae y termoplasma carecen de pared

celular se estabiliza con esteroles (colesterol) que toma del hospedador.

•Algunas Archaeas presentan paredes celulares con un PG compuesto por NAG y por N-acetil
talosaminuróico con uniones ß 1-3.

•Los ácidos teicoincos polimeros de alcohol estan relacionados con la carga negativa que exponen
las bacterias. Tinciones
LISOZIMAS
•Involucrada en la ruptura del enlace ß 1-4 entre el ac. N- acetilmuramico (NAM) y N-acetilglucosamina.

•La lisozima es casi inactiva frente a microorganismos Gram-negativos por la dificultad de acceder al pepti-
doglicano que se encuentra protegido por la membrana externa.

Aplicaciones biotecnológicas

•Pseudomureina en Archeas.

Esferoplasto

Protoplasto
Pared celular de Gram +: PG + Acido teicoico + Acido lipoteicoico

• Aumento carga negativa de la Ácidos teicoicos: polímeros de

superficie glicerolfosfato o ribitolfosfato unidos por
(interacción con sustratos – reservorio grupos fosfato. Se unen al PG por
de cationes como Mg++ o Ca++) enlace covalente con hidroxilo 6 del
NAM.
¿Qué pasa en las gram -?
 El lipopolisacárido LPS

Núcleo o región R: Compuesto por cetodexosioctonato, heptosas.

Polisacarido O: Consta de unidades repetitivas de galactosa, glucosa, ramnosa y manosa y aúcares poco comunes como
abecuosa, colitosa, paratosa y tivelosa, en el caso de Salmonella son (Man-Rham-Gal-Abe)n; esta secuencia de azúcares es
lo que se denomina antigeno "O". Determinar serotipos

El Lípido A.- Dos unidades de N-acetilglucosamina unidas por enlace ß 1- 6, unido a los ácidos grasos (ácido caproico,
ácido láurico, ácido mirístico, ácido palmítico y ácido esteárico) mediante enlace éster.
Los LPS: componente principal de la membrana externa de Gram -

Man: Manosa
Rha: Rafinosa
Gal: Galactosa
(Variable) NAG: n-acetilglucosamina
Glc: glucosamina
hep: heptosa
KDO: cetodesoxioctonato

(Constante)

Endotoxina

Lipopolisacárido bacteriano típico

 CAPSULA

• Cubierta protectora resistiendo la fagocitosis, depósito de alimentos y como

lugar de eliminación de sustancias de desecho. Protege de la desecación .
•Evita el ataque de bacteriófagos y permite la adhesión de la bacteria a células
animales del hospedador.
GLUCOCALIX
 CAPA DE LIMO

Dextran: Sustituto del plasma

Sefadex: Se usa para columnas cromatrográficas

Vainas Bacterianas: Sphaerotilus natans
 Síntesis del peptidoglicano
•Anillo FtsZ (Filamento temperatura sensible)
•FtsZ se encuetran en procariotas, Arqueas,
Mitocondrias y cloroplastos.
•Presentan similitudes estructurales con las
tubulinas.

Autolisinas abren pequeños poros en la pared

Por donde pasan los precursores de la sintesis
del PG.

Streptococcus hemolyticus Gram +

Síntesis de precursores en el citoplasma

Ensamblaje parcial en membrana

Transporte a la cara externa de la membrana

 Ensamblaje final en el exterior, mediante reacciones que no precisan energía

 ¿Las bacterias tienen citoesqueleto?

FtsZ: a- localización del anillo Z en la zona central de B. subtilis

b- filamentos autoensamblados inducidos por GTP; c- comparación de estructuras
tridimensionales.

FtsZ: homóloga de tubulina, responsable de división

celular, formación de anillo Z, reclutamiento de otras
proteínas en complejos macromoleculares.
 MreB y Mbl: homólogos
bacteriano de actina,
determinantes de la forma
celular, autoensamblado en
estructuras filamentosas
helicoidales (a y b) en B.
subtilis. Isoformas: Mbl,
MreBH.

Bacterias esféricas: no
poseen homólogo MreB.

• Dar Forma a la célula.

• Segregación cromosomal – Partición de plásmidos.

• Localización complejos proteicos en el citoplasma.

 •Fase 1: Los monosacáridos (NAM y NAG) van a constituir la unidad
disacarídica repetitiva del esqueleto del peptidoglucano se sintetizan por
separado y se activan al unirse a uridín difosfato (UDP).

•Luego se va produciendo la adición secuencial y ordenada de los

distintos aminoácidos al NAM (en reacciones que requieren energía e
iones Mn++):
1. L-ala
2. D-glu
3. m-DAP (u otro diaminoácido; p. ej. L-lys en Staphylococcus aureus)
4. D-ala-D-ala

• Se produce un pentapétido. El último paso de adición de aminoácidos

es la unión del dipéptido D-alanil-D-alanina, que se ha sintetizado en dos
fases.

•Una racemasa convierte la L-ala a D-ala; creación de enlace peptídico

entre dos D-ala.

Autolisisnas cortan el peptidoglicano preexistente Glicolasas catalizan la formación del enlace B 1-4

•Fase 2: El UDP-NAM-pentapéptido se transfiere a un transportador de membrana (undecaprenil-fosfato o Lip-P),

o bactoprenol, permite el transporte y ensamblaje de sustancias que, como los azúcares, son hidrofílicas, y no podrían
pasar por sí mismas la barrera hidrofóbica de la membrana, catalizado por una translocasa específica.

•Se obtiene: Lip-P-P-NAM(pentapéptido)-NAG.

•Se introducen los puentes peptídicos, la traslocasa como la transferasa está localizadas en el lado citoplásmico de la
membrana, de modo que el precursor Lip-P-P-NAM(pentapéptido)-NAG, en este momento está “colgando” hacia el
citoplasma, anclado a la lámina interna de la membrana a través de bactoprenol.
 Síntesis del peptidoglicano
•Fase 3: Polimerización de varias unidades disacarídicas: El bactoprenol “se da la vuelta” en la membrana (flip-flop desde la
capa interna hasta la externa).
•Entonces tiene lugar la polimerización de varias unidades disacarídicas: ello se logra en una reacción de transglucosidación.
La unión de cada unidad disacarídica (con su pentapéptido) unida a su respectivo Lip-P-P, con el extremo libre (reductor) de una
cadena preexistente que a su vez está unida a otra molécula de Lip-P-P.
•Se libera uno de los Lip-P-P en forma pirofosforilada. Sobre este Lip-P-P actúa una fosfatasa, que elimina el fosfato terminal,
regenerándose el undecaprenil-fosfato, que queda dispuesto para otro ciclo.

Fase 4: Cadena lineal de PG sin entrecruzar, unido aún al transportador lipídico de membrana. Este polímero naciente (con sus
pentapéptidos) reacciona, por transpeptidación, con un PG aceptor preexistente.

•La energía para esta reacción la suministra la

hidrólisis concomitante del enlace peptídico entre
las dos D-ala terminales.

•No todos los tetrapéptidos participan en

entrecruzamientos. Las D-ala terminales no
implicados en entrecruzamientos son eliminadas
por una enzima llamada D-D-carboxipeptidasa.
 BAAR: Mycobacterium tuberculosis
(bacterias acido-alcohol resistentes)
Muy impermeables

Lípidos (ácido micólico)

Ceras (arabinogalactanos)

Tinción de Ziehl-Neelsen
N-glucolilmurámico
(Koch lab)
Tradicionalmente se los conoce como Gram (+)
Arqueas….la cosa es diferente (y variable)

• Si tienen pared: pseudopeptidoglucano

(N-acetilglucosamina + N-acetiltalosaminurónico)

• Sino…Polisacáridos o capa S (más común)

•Bacillus anthracis capa s poliglutamato
Capa S (la armadura bacteriana)

•Arreglo cristalino macromolecular de subunidades proteicas, común en archaeas y

bacterias
•Compuesta de una única proteína o glicoproteína, recubre la superficie celular
•Las subunidades se autoensamblan en solución o sobre superficies, formando un
arreglo regular
•Representa del 10 al 15% de las proteínas celulares totales
• Protección ante cambios ambientales / predación
•Disrupción con agentes caotrópicos como urea y guanidina

Autoensamble
Extracción con agente
caotrópico

Diálisis
Arreglo regular en superficie
Otras estructuras de la superficie de bacterias…

• Glucocalix (capsula o capa mucosa)

Glicoproteínas
Polisacáridos
Polialcholes
aminoazucares

• Protección frente antimicrobianos

• Resistencia física
• desecación???
• Adhesión a superficies
• Formación de Biofilm
Biofilms bacterianos

Aumenta el
Crecimiento
Adhesión Colonización
Señalización
polisacaridos

Pseudomonas aeruginosa-homoserina lactona

• ¿¿Autentica forma de vida en la naturaleza??

• Supraestructura “organizada”

• “Consorcios bacterianos” (poblaciones mixtas)

 ¿Cómo se encuentra el ADN en las bacterias?

• En general, única copia y circular.

• 1-10 Mbp; secuencia y

%G-C variable.

• dinámico (mutaciones y
transferencias de material genético)

• altamente empaquetado

• asociado a otras macromoléculas

Nucleoide = ADN + proteínas tipo histonas (H-NS, HU, IHF) +

topoisomerasas + RNApol + replicones (ADNpol y prots. asociadas) +
sistemas de reparación
Inclusiones citoplasmáticas: las reservas…

• gránulos de glucógeno (polímeros de glucosa)

• PHA (poli-hidroxialcanoatos, polihidroxibutirico)

Almacenaje de energía y carbono

• polifosfatos – gránulos de azufre

Oxidar compuestos reducidos del azufre

• magnetosomas?? (magnetita- Fe2O3)

microelectrónica; los magnetosomas son nanoimanes que puede ser empleados en cualquier
dispositivo de nanotecnología. También son empleados como partículas nanomagnéticas en
terapia contra el cáncer, como un mecanismo de hacer llegar el fármaco
hasta las células tumorales.

• Vesícula de gas
Contienen gases a altas presiones y esto les permite a las bacterias
•Gvp A, Gvp C
 acetoacetil-CoA 3-hidroxibutiril-CoA

Unifica dos moléculas

Polimeriza los
monómeros

• PHA: plásticos biodegradables???

• propiedades similares al polipropileno

• Estables al UV y temperatura.
 Apéndices y motilidad

monotrico lofotricos peritricos amfitricos

• Gran variabilidad en cuanto al número de flagelos y su disposición
¿Quién ganaría los 100 m de Rio 2015? ¿Bolt o E. coli?

Bacterias…
0,00017 Km/hr 50-60 veces su longitud / segundo

Usain Bolt…

44 Km/hr 12.2 m/seg

¿Cuánto mide? 1,95 m

6 veces su longitud/segundo
 Apéndices y motilidad

Flagelos Pili y fimbrias

(implicados en motilidad = “taxis”) (receptores víricos,
conjugación, adhesión)

Motilidad tipo “nado” o swimming

 Principales tipos de motilidad bacteriana sobre superficies

Tipo Velocidad del borde Movimiento atribuido a Las células se

de colonia (mm/min) mueven juntas
Swimming 50 flagelos no

Swarming 20-75 flagelos sí

Gliding 3-15 Actividad celular sí

Twitching 4-5 Pili, activ. Celular, no
fimbrias

Swimming Swarming
swarming Swiming

Twitching

gliding
«turbina de protones»
 Antígeno flagelar H

• Filamento helicoidal, compuesto por flagelina, rígido.

•Base ancha (gancho) une el filamento.
•El motor del flagelo está anclado a la membrana y a la pared por un sistema de anillos.
•Proteínas Mot encargadas de la rotación del filamento.
•Proteínas Fli invierten la rotación del flagelo.
•Avanza moviendo el flagelo en sentido contrário a las manecillas del reloj
•FliG, FliM, FliN son componentes del interruptor flagelar para la rotación y determinan la
dirección.
Ensamblaje del flagelo bacteriano
-Tres clases de promotores Case I, Clase II y Clase III que se transcriben secuencialmente.
-Clase I, FlhD y FlhC activa los promotores de Clase II con un factor sigma.
-Los promotores de Clase II involucran 35 genes organizados en 8 operones involucrados en el
ensamblaje del cuerpo basal y del codo.
-FlhB involucrada en que el vástago y el codo se ensamblen primero.
-FlgK y FlgL conectan el codo y el filamento
-FliK regula la longitud del codo
-FliA es un factor sigma y FlgM es un factor antisigma
-Los promotores de Clase III controlan la síntesis final, expresión de monomeros de flagelina
y de los generadores de fuerza potrón motriz
-cap” es una proteína tapón que evita la perdida de monomeros de flagelina
Movimiento direccionado: las “taxias”

• quimiotaxis

• fototaxis

• Termotaxis

• geotaxis
PILI Y FIMBRIAS

Las bacterias Gram negativas y algunas Gram positivas tienen estructuras alargadas
mas cortas que los flagelos que no están involucradas en la locomoción, llamadas fimbrias.
Están involucradas con la fijación a superficies bacterianas.
El pili es más alargado y resulta una proyección de la membrana plasmática para conectarse
a otras bacterias trasferir material genético.
Ambos están involucrados en la expresión de adhesinas
 Los Nanocables:
el pili de Geobacter spp.

• amplia diversidad metabólica de

compuestos de carbono
(Biorremediación)
• Solubilización de metales de transición
(hierro, manganeso, uranio)

Nature Nanotechnology | Letter Print

Tunable metallic-like conductivity inmicrobial nanowire networks

Nikhil S. Malvankar, Madeline Vargas, Kelly P. Nevin, Ashley E. Franks, Ching Leang, Byoung-Chan Kim, Kengo Inoue, Tünde
Mester, Sean F. Covalla, Jessica P. Johnson, Vincent M. Rotello, Mark T. Tuominen , Derek R. Lovley Affiliations Contributions
Corresponding authors
Nature Nanotechnology 6, 573–579 (2011) doi:10.1038/nnano.2011.119
Received 18 April 2011 Accepted 23 June 2011 Published online 07 August 2011
 Si convertimos las
partículas de hierro
en un electrodo

Pilas microbianas

Oxidación de fuentes de carbono

 Procesos complejos en bacterias: Diferenciación celular
Heterocistos en cianobacterias Cuerpos fructíferos en mixobacterias

Vesículas, hifas y
Esporulación en Bacillus sp. esporangios en Frankia sp. División celular asimétrica y
diferenciación en Caulobacter
Formación de endoesporas en Bacillus subtilis

cuticula
Exosporio es una cubierta de proteínas

Envoltura de la espora varias capas de proteínas

Cortesa: Capa de peptidoglicano (mureína +

enlaces transversales)

Núcleo o protoplasto Núcleo

o protoplasto: Contiene la pared celular,
Ácido dipicolínico Membrana, citoplasma y nucleoide. Deshidratado
10-30%.
 CARBOXISOMAS

• Contienen la ribulosa 1,5 bifosfato carboxilasa (RubiscO).

•Anhidrasa carbonica
•Pirenoides como alternativa a los carboxisomas

Clorosomas

Son vesículas oblongas situadas por debajo de la membrana citoplásmica.

Contienen los pigmentos antena de las bacterias fotosintéticas verdes (carotenoides y quinonas.

Se disponen por debajo de la membrana citoplásmatica, sin continuidad con ella, aunque
pueden estar conectadas a través de un pedúnculo proteico
Alto estado energético
 Dos e-y dos H+, procedentes del NADH
Los H+ porvienen de: NADH y de la disociación del H20
en H + y OH-
Oxidación de NADH

Un transportador de H+ (FMN flavoproteinas)
reduce un transportador que acepta e- como la
proteína Fe/S y salen H+.
El NADH se oxida y la quinona se reduce,

porque la proteína con hierro del Complejo I
reduce a la coenzima Q se toman dos protones de
la disociación del agua en el citoplasma

El complejo succinato deshidrogenasa,

evita el Complejo I y proporciona
electrones directamente a las quinonas.

Se reciclan electrones H+
complejo citocromo bc1, es
transferir electrones de las quinonas al
citocromo c (lanzadera)
ATP asa