Materiales biológicas

 conejo
 antígeno de salmonella sp
Instrumentos y equipos
 matraz de 250-500ml
 pipeta de 1-10ml
 2 placas petri
 Tubos de centrifugación
 Pipetas
 Centrifuga
 Refrigeradora
 Reactivos
 Agar noble al 1%
 Solución salina fisiológica
 Alcohol
 Agua destilada
Otros
 Mechero
 Gradilla
 Aguja
 Jeringa
 Algodón
 Frascos de vidrio
 Sacabocado
 tijera
A.- Obtención del antígeno para la inoculación
 Se obtuvo una cepa de Salmonella sp
 Se rejuveneció la cepa en caldo nutritivo e incubo a 37°C por 8 horas
 Luego el tubo con Salmonella sp se conservó en una refrigeradora
(aproximadamente 4°C) hasta el momento de la inoculación en el conejo

B.- Proceso de inoculación de antígeno

 Se preparó el antígeno en diferentes cantidades (1mL, 1.5mL, 2mL) para
posteriormente inocularlas periódicamente
 Se inoculo el antígeno obtenido por vía oral contaminando sus alimentos
y por vía intraperitoneal: se depilo al conejo en la parte de la ingle
izquierda y luego se procedió a la desinfección (alcohol al 70%)
 Se colocó al conejo con las patas anteriores detrás de la cabeza y las
patas posteriores ligeramente separado, posteriormente hacer la
inoculación intraperitoneal.
 Se le evaluó al conejo si presentaba signos o síntomas cada 5 días
después de la inoculación.
C.- Preparación del agar noble.
 Preparación del Agar: la solución de Agar se
preparó sobre la base de 1 gramos de Agar noble
en 100 ml de PBS ( Buffer Fosfato Salino).Una vez
preparado se lleva al autoclave para su
esterilización.

D.- Plaquear en placas petri.

 Preparación del gel en la placa de Petri: Sobre la
placa se pone 5 ml del agar preparado utilizando
una pipeta, se distribuye homogéneamente el
volumen en la placa, Se deja solidificar el agar a
temperatura ambiente.
E.-Obtención del anticuerpo.
Extracción de sangre mediante la punción cardiaca
 Fijar el conejo sobre el dorso
 Depilar la zona del corazón
 Desinfectar con alcohol al 70%
 Buscar el tercer espacio intercostal
 Buscar el latido más fuerte del corazón
(ventrículo)
 Penetrar la aguja en un ángulo de 90°
 Poner la aguja sin tocar el embolo hasta que la
sangre suba, luego aspirar 10ml.
 Poner en un tubo de prueba la sangre aspirada
 Centrifugar a 3000rpm x 10 minutos
 Obtención del plasma (anticuerpo)
F.-Corrida de la prueba de inmunodifusión
 Fijación del antígeno y anticuerpo en el agar:
 Tomar la Salmonella sp (antígeno), tomados de acuerdo al
procedimiento anterior.
 Se perforo el agar solidificado con un sacabocados, en
donde se coloco el anticuerpo y el antígeno en pequeños
pozos laterales. Se debe mantener una distancia de
aproximadamente 2.0 cm entre pozo y pozo.
 Enseguida se puso los anticuerpos (suero diluido), o.5 uL
en dos de los orificios correspondientes.
 De la misma manera tomar el líquido de salmonella sp
(antígeno), 0.5 uL y ubicarlo en los dos pocillos restantes.
 Se Incubo en cámara húmeda a 37 grados
 Luego , se baño el medio semisólido con acido tánico al
1%
 Seguir incubando en la cámara húmeda por 48 horas
 Lectura : observar la formación de precipitado
 AGAR
NOBLE 100ml PBS
1 mg

Se preparó sobre la base de 1 gramos de

Agar noble 100 ml de PBS ( Buffer Fosfato
Salino).Una vez preparado se lleva al
autoclave para su esterilización.

colocar sobre la
placa 5 ml de
agar utilizando
una pipeta
Se debe mantener
una distancia de
aprox. 2.0 cm entre
pozo y pozo.

Incube en una cámara

húmeda, a temperatura
ambiente por 48 h