Identificação de

Enterobactérias.

Dra. Tânia Mara Ibelli Vaz

Pesquisador Científico
Instituto Adolfo Lutz - São Paulo
Família Enterobacteriaceae
Patogenia
Isolamento e identificação de enterobactérias
Aspecto das colônias
Identificação Bioquímica ( cultura pura)
Reação de VM e VP
Escherichia coli
Salmonella
Shigella
Klebsiella
Enterobacter
Serratia
Citrobacter
Proteus - Providencia - Morganella
Fluxograma BGN OXIDASE
Considerações finais

índice
 Família Enterobacteriaceae

Introdução

Definição

• Bacilos Gram negativos

• AAF / Fermentadores da glicose
• Oxidase negativa e catalase +
• Móveis / imóveis
• Cresce em meios comuns

Habitat
Plantas, solo, água, intestino do homem e animais
 Família Enterobacteriaceae

Introdução

Nomenclatura e Classificação

• Métodos Fenotípicos
• Moleculares  novas espécies
reclassificação

Classificação
• Gêneros ( 42)
• Espécies ( centenas )
• biotipos e sorotipos
 Complexos
 Identificação de Enterobactérias

Classificação - patogenia

- Enteropatógenos
- Infecções nosocomiais - espécies importantes
- Outras espécies - raras em material clínico
isoladas em : meio ambiente
plantas
animais
 Família Enterobacteriaceae
Patogenia

Enterobactérias - principal componente da flora intestinal normal

do homem.

• Infecções -intestinal, feridas e trato urinário

• Abcessos, pneumonia, meningites

• Infecções nosocomiais
 Família Enterobacteriaceae
Patogenia

Infecções intestinais

Características
• normalmente na comunidade
• DTA – doença transmitida por alimento
• surtos / casos isolados
• hospitalar

Patógenos entéricos clássicos

Salmonella spp
Shigella spp
E.coli - categorias diarreiogênicas
Yersinia enterocolitica
 Família Enterobacteriaceae
Patogenia
Infecções extra-intestinais
Comunidade
Hospitalar
• Qualquer espécie
• Fatores de risco:
Paciente
Veículos de transmissão
Alimentos contaminados
Espécies mais comuns
Escherichia coli
Klebsiella pneumoniae
Klebsiella oxytoca
Proteus mirabilis
Enterobacter spp
Salmonella ( sorotipos)
Serratia marcescens
Citrobacter spp
Providencia spp
 Família Enterobacteriaceae
ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE ENTEROBACTÉRIAS

Crescem bem nos meios comuns e meios seletivos para BGN

( 18 a 24h  1 mm de diâmetro).

1- Exame macroscópico da cultura:

• Aspecto morfológico das colônias ( AS, MC,SS, TSA )
• Tempo de crescimento e tamanho da colônia
• Observar pureza da cultura

2-Exame microscópico da cultura:

• Gram: tamanho, morfologia, reação tintorial, etc
Aspecto das colônias

Agar MacConkey
 Aspecto das colônias

Salmonella. E.coli E.cloacae

Salmonella.
E. coli
E. cloacae

Aspecto das colônias

 Família Enterobacteriaceae
Identificação Bioquímica ( cultura pura)

Meios presuntivos
• IAL (Pessoa e Silva)
• EPM-MILI
• TSI

IAL
 Família Enterobacteriaceae
Identificação Bioquímica
Série completa - 47 testes

Provas complementares:

Fermentação de açúcares
LDC- ODC - ADH
CiSi

Pesquisa de enzimas
DNase
gelatinase,lipase, NAR, ONPGase

Gram Oxidase VM e VP
 Família Enterobacteriaceae
Reação de VM e VP

Enterobactérias VP+ Enterobactérias VP -

• Enterobacter Maioria das espécies dos outros Gêneros

• Klebsiella • Salmonella
• Serratia • Shigella
• E.coli
• Proteus
• Morganella
• Providencia
• Citrobacter
• Kluyvera
 Escherichia coli

Diagnóstico Diferencial
lac+
CISI -
K.oxytoca ( LDC+/ motil.-CiSi+)

Citrato de Simmons Prova

Citrobacter amalonaticus e C. diversus
( LDC-/motil.+CiSi+)
Glicose+/Gás+/-
Marcadores Epidemiológicos sacarose+/-
urease-
Infec. Intestinais *H2S-
Sorotipagem
Fatores de virulência
TDA-
Infec. Extra-intestinais indol+
Sorotipagem LDC+/-
Met. moleculares Motilidade+/- Aeromonas
 Salmonella

Diagnóstico diferencial Glicose+/gás v CiSi+

sac - Lac -
H2S +
Citrobacter spp ( H2S + ) urease-
Proteus TDA -
Prova de
indol -
Fermentação
LDC +
glicerol Mov. +

Marcadores Sorotipagem
Fagotipagem
Moleculares
 Shigella

Diagnóstico diferencial
Glic.+ /gás -
sac - CiSi -
urease - Lac -
E.coli ( LDC - / Mov.-) TDA -
H2S
indol v
Lactose LDC -
Ci Christ. Citrato Mov. -
Acetato Trab. Sódio

Marcadores Sorotipagem
Met.moleculares
 Klebsiella

Diagnóstico diferencial

Lac+
Enterobacter ( LDC+ / Mov.-) CiSi +

ADH
ODC
Fermentação

Marcadores Sorotipagem
Met. moleculares
 Enterobacter

Diagnóstico diferencial
Lac+
Enterobacter CiSi+
Klebsiella
Serratia

LDC,ODC,ADH
Motilidade
DNase
Fermentação

E.cloacae

Marcadores Sorotipagem
Met. moleculares
 Serratia

Espécies de Serratia
Glic.+ / gás-
CiSi +
sac. -
Lac -
urease -
LDC,ODC,
H2S -
malonato,
TDA -
fermentação , pigmento
indol -
LDC +
Mov. +

DNase +
Gelatinase +
Lipase +
Marcadores: Sorotipagem
Met.moleculares
 Citrobacter

Glic.+ / gás-
Espécies de Citrobacter
sac =V CiSi +
urease - Lac +
H2S = V
ODC, indol, H2S malonato TDA -
fermentação
indol = V
LDC -
Mov. +
 Proteus - Providencia - Morganella

Diagnóstico diferencial

Proteus Glic.+/ gás -

Providencia sac. -
Espécies H2S + urease +
BGN NF TDA +
H2S = V
indol = V
Swarming LDC -
TDA, H2S, ODC, Mov. +
gelatinase,
CiSi +
fermentação
Lac +
 Fluxograma

BGN Oxidase

Lac + Ágar Mac Conkey Lac -

IAL IAL

E.coli Shigella
Enterobacter Salmonella
Klebsiella Serratia
Kluyvera Enterobacter Salmonella Proteus
Citrobacter Klebsiella Serratia Providencia
VP + Morganella
Kluyvera Proteus/Prov.(V)
Citrobacter +
+

Cit. Simmons
Cit. Simmons

- -
Shigella
E.coli
Morganella
 IDENTIFICAÇÃO DE ENTEROBACTÉRIAS

Enterobactérias em microbiologia clínica  Poucas espécies

Espécies incomuns , novas espécies, espécies atípicas  podem ocorrer

(isoladas de material clínico, ambiente, plantas e animais)

PROBABILIDADES

• Tratar-se de uma espécie rara

• Cepa contaminada
• Uma ou mais testes não adequados na identificação ( turvação)
• Manipulação errada ( concentração do inóculo)
• Composição e quantidade do meio ( substrato presente)
• Controle de Q
IDENTIFICAÇÃO DE ENTEROBACTÉRIAS

O que fazer?

Checar tudo:

• Pureza da cultura

• Repetir todos os testes no mesmo sistema ou utilizando os

meios anteriormente utilizados

•Repetir todos os testes em outro sistema de identificação ou

utilizar partidas diferentes do meio.

•Encaminhar para laboratórios de referência

 Considerações finais

Importância da caracterização das espécies

• Evitar falsos surtos

• Não identificação do surto
• Atenção para cepas atípicas
• Atenção para espécies raras
• Atenção para pureza das culturas