UNIVERSIDAD NACIONAL

PEDRO RUIZ GALLO

FACULTAD DE CIENCIAS
BIOLOGICAS

PROFESORA:
DRA. GRACIELA ALBINO CORNEJO

ALUMNO:
DLOPEZ DIAZ DIEGO M.
DIAGNOSTICO SEROLOGICO
El diagnóstico virológico comprende la detección e identificación del
agente etiológico de una infección viral, clínica o inaparente, y /o de la respuesta
inmune específica del huésped. El diagnóstico clínico orientará hacia la prueba
apropiada a realizar.
El diagnóstico puede considerarse como el más importante resultado de la práctica
médica.

Serología:
-Es el estudio que permite comprobar la presencia de anticuerpos en sangre.
-Es una prueba fundamental a la hora de realizar donaciones de sangre y transfusiones.

Indicadores estadísticos básicos para evaluar el desempeño de un procedimiento

diagnóstico:
-La evaluación del desempeño de una prueba diagnóstica comienza por la
cuantificación (estimación, más bien) de la magnitud de los errores que pueden
cometerse o, su inverso, la magnitud de los aciertos que se cometen al intentar
"adivinar" un diagnóstico a partir de los resultados que brinde dicho procedimiento.
-En 1947, Yerushalmy introduce los términos de sensibilidad y especificidad.
Existencia de la enfermedad:
Utilidad del diagnóstico serológico viral:

-Confirmar el diagnóstico clínico

-Seleccionar un tratamiento adecuado.
-Monitorear la evolución de la enfermedad.

-Infecciones locales leves tales como HSV

genital no pueden producir una respuesta
inmune humoral detectable.
-Pacientes inmunocomprometidos a
menudo dan una respuesta inmune
humoral reducida o ausente.
METODOS SEROLOGICOS DE DIAGNOSTICO VIRAL

Técnicas clásicas Técnicas nuevas

Pruebas de fijación del complemento (CFT) Inmunoensayo

Pruebas de inhibición de la hemaglutinación Western Blot (WB)
Técnicas de inmunofluorescencia (IF) Inmunoblot: LIA y RIBA
Pruebas de neutralización Inmunoperoxidasa
Pruebas de fijación del complemento:
El sistema del complemento es un
mecanismo de defensa cuya misión
principal es eliminar patógenos de la
circulación.

Especificidad y Sensibilidad alta

Inhibición de la hemaglutinación:

Una variante es la INHIBICIÓN DE LA HAMAGLUTINACIÓN (IHA), en la que los posibles Ac existentes en la muestra problema
son neutralizados previamente, por lo que la lectura de resultados se interpreta en sentido contrario a la hemaglutinación:

– REACCIÓN POSITIVA: presencia de botón.

– REACCIÓN NEGATIVA: aparición de velo.

Esta técnica se usa para diagnosticar microorganismos que por sí solos son capaces de aglutinar glóbulos rojos, como el virus de la rubéola. Sí en
el suero del enfermo hay Ac contra el virus de la rubéola, se produce un bloqueo de los virus y se inhibe la aglutinación. La ausencia de
aglutinación se interpreta como POSITIVO, porque hay Ac contra el virus de la rubéola.
 Inmunofluoresencia:
-La IF es una de las técnicas para el diagnóstico rápido durante el periodo agudo.
-Puede usarse en muchas muestras clínicas con la condición que contengan células infectadas.
-Observación de los antígenos virales presentes en el citoplasma, núcleo, o en la membrana celular, al microscopio de
luz ultravioleta.
-Anticuerpos específicos conjugados con un colorante fluorescente (isotiocianato de fluoresceína)
-Este colorante, al ser excitado por luz de corta longitud de onda (luz ultravioleta) emite luz de onda más larga (color
verde manzana)

Directa:
-La muestra clínica que presuntamente contiene
antígenos del microorganismo bajo estudio
-Es puesta en contacto con un anticuerpo
monoclonal dirigido contra dicho microorganismo
conjugado con fluoresceína.
Indirecta:
-Es una técnica de doble capa en donde se aplica el
anticuerpo sin marcar directamente sobre el sustrato
de tejido
-se visualiza por tratamiento con un suero anti -
inmunoglobulina conjugada con fluorocromo.
 -Reduce el número de etapas necesarias
-menos sensible

Directa

Indirecta
Neutralización:
-Las pruebas de neutralización van dirigidas a la detección
de anticuerpos Capaces de bloquear los epítopos críticos
del patógeno.
-No suelen ser útiles para diferenciar respuestas Entre
animales infectados y vacunados
-Las pruebas de neutralización y en particular las de
neutralización vírica, son uno de los estándares habituales
para medir los niveles de inmunidad protectora frente a un
patógeno.
-Incubación del patógeno con el suero del animal a analizar
y un segundo consistente en la inoculación del patógeno en
un cultivo celular o en un animal.
-Si el suero contenía anticuerpos neutralizantes, se bloquea
la capacidad infectiva del patógeno y; por lo tanto, no
produce la infección del animal o del cultivo.
Inmunoensayo:
Radioinmunoenzayo:

-El radioinmunoensayo (RIA) se basa en la

competencia que se establece para unirse
a anticuerpos específicos, entre la
sustancia a cuantificar y cantidades
conocidas de la misma sustancia marcada
con un isótopo.
-Al establecerse esta competición resulta
que a mayor cantidad de sustancia a
cuantificar, menor será la cantidad de
sustancia radiactiva que se une al
anticuerpo y viceversa.
-Los resultados se obtienen al medir la
radiactividad de la hormona marcada
unida al anticuerpo y la de la hormona
marcada libre mediante un contador de
centelleo.
Elisa:enzyme-linked immunosorbent assay
-En los ELISAs para detección de antígeno,
los procedimientos más usados consisten en
una fase sólida (celdilla de poliestireno, tubo
o perla) sobre cuya superficie se adsorbe un
anticuerpo específico antivirus ("anticuerpo
de captura").
-Luego se añade la muestra y, si ésta contiene
antígeno viral, se unirá al anticuerpo de
captura.
-La detección se realiza mediante otro
anticuerpo marcado con una enzima
(peroxidasa, fosfatasa alcalina, o biotina-
avidina).
-Luego del lavado cuidadoso para eliminar el
anticuerpo marcado no combinado con el
antígeno, se añade el sustrato de la enzima.
Western blot:
-Esta técnica se emplea habitualmente como
prueba confirmatoria o suplementaria para
documentar la presencia de anticuerpos para HIV
en el suero de pacientes con serología positiva
determinada por técnicas de tamizaje (ELISA u
otras).
-La técnica se inicia con la obtención de un título
elevado de virus en cultivo celular, luego se
disrumpen las partículas con detergentes y se
realiza el fraccionamiento electroforético de las
proteínas virales en geles de poliacrilamida.
-Las bandas así formadas se transfieren a filtros de
nitrocelulosa.
-Para realizar la reacción se incuban estos filtros
con el suero del paciente
-Luego, con un antisuero dirigido contra las Igs
humanas (conjugado con peroxidasa)
Inmunoblot: RIBA (recombinant immuno blotting assay) y LIA (linear
immune assay)
-Estas técnicas se emplean para confirmación del diagnóstico serológico de hepatitis C obtenido previamente por pruebas de
tamizaje como la de ELISA.
-Proteínas virales fijadas sobre tiras de nitrocelulosa
-Las tiras de nitrocelulosa conteniendo los antígenos virales se incuban con el suero del paciente (suero problema).
-Esta unión se revelará con un suero anti-Igs humanas marcado con una enzima (peroxidasa o fosfatasa alcalina para RIBA y
LIA, respectivamente). Luego se añade el sustrato para las respectivas enzimas y la reacción se observa visualmente como
bandas coloreadas.
Inmunoperoxidasa:
-Es una técnica inmunohistoquímica que permite
detectar antígenos virales.
-El anticuerpo específico está marcado con una
enzima (peroxidasa).
-Luego de hacerlo reaccionar con la muestra, se
añade el sustrato de la enzima y se observará el
de- sarrollo de gránulos
de color en las zonas que contienen el antígeno.
-La ventaja de esta técnica sobre la IF es que los
preparados son permanentes y se observan al
microscopio óptico