ENCB IPN

MÉTODOS DE SEPARACIÓN E
INSTRUMENTACIÓN ANALÍTICA

PRÁCTICA 3: EXTRACCIÓN EN FASE SÓLIDA.

SEPARACIÓN DE COLORANTES SINTÉTICOS.

EQ. 3 ROJAS MENDOZA CESAR PROF: Dr. GERARDO ZEPEDA VALLEJO

SANDOVAL OLVERA CLAUDIA QFI. CESAR AUGUSTO PULIDO FLORES
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 OBJETIVOS
 Separar una mezcla de colorantes sintéticos
usados en alimentos, tartrazina y rojo número
3, por extracción en fase sólida, aplicando los
conceptos de cromatografía en fase reversa.
Comprobar la eficiencia de la separación por
medio de la cromatografía en capa fina sobre
gel de sílice.

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Extracción en
fase sólida
La extracción en fase
sólida SPE es una técnica
preparativa que el analista
utiliza para “limpiar” la
muestra previa a la
cuantificación y/o para
futura concentración del
analito que está presente
en la muestra.

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Extracción en fase sólida
La Extracción en Fase Sólida sigue siendo el
procedimiento para preparación de muestras
que ha crecido más rápido. Es la técnica más
usual en el tratamiento y concentración de
muestras antes de su análisis por HPLC,
HPLC/MS, GC o GCMS.

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Procedimiento general de EFS
1. Etapa de Acondicionamiento
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La activación del adsorbente y de los grupos
funcionales se consigue al pasar un volumen de
disolvente o mezcla de disolventes apropiado a
través de la columna.
Se recomienda usar de 2 a 4 volúmenes de
lecho.
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PROCEDIMIENTO GENERAL EFS
2.- ETAPA DE LA CARGA DE LA MUESTRA :
Aplicar la muestra en la parte superior del lecho de
adsorbente. Los contaminantes de matriz pueden pasar por
la columna sin ser retenidos, y otros componentes de la
matriz pueden retenerse en la superficie del adsorbente

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PROCEDIMIENTO GENERAL DE EFS

El lavado permite la eliminación de

cualquier resto de compuestos que
puedan interferir manteniendo los
3. Etapa de
analitos en el lecho de adsorbente. Se
Lavado
pueden usar disolventes o mezcla de
disolventes de diferente tipo para
mejorar la eficacia del lavado.

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PROCEDIMIENTO GENERAL EFS

Las trazas de disolvente se eliminan

haciendo circular aire a través de la
4. Etapa de
columna durante 2 a 10 minutos. Esta
Secado
etapa mejora el rendimiento de
extracción.

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 Se pasa por la columna un disolvente
5. Etapa de adecuado para eliminar la interacción
Elución analito-disolvente y eluir el 100% de
los compuestos de interés.

(Los adsorbentes con partículas pequeñas de

30 a 50mm requieren un menor (mayor?)
volumen de elución que los adsorbentes con
partículas mayores entre 90 y 140mm).

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Cromatografía en fase reversa

REVIERTEN LA POLARIDAD
HOWARD
DE LAS FASES

1950

MARLIN SEPARAR ÁCIDO GRASOS

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 CROMATOGRAFÍA DE FASE
REVERSA

 Se utiliza un empaque hidrofóbico, usualmente un

grupo funcional octadecilo u octilo y una fase móvil polar.
La fase estacionaria
La fase estacionaria para cromatografía de fase reversa
consiste en una matriz porosa e insoluble a la que se le
han unido químicamente compuestos hidrofóbicos

Fig 1. Grupos silanol libres y derivatizados

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 Silica gel
RESISTE ALTAS PRESIONES

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 MATRICES DE
POLIESTIRENO
muy estables incluso en pH´s que van desde 1
hasta 12, lo cual permite lavar y regenerar la
columna con hidróxido de sodio que es el agente
más efectivo para la remoción de proteínas
fuertemente unidas a la superficie de la fase
estacionaria

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 La fase móvil
La retención hidrofóbica del soluto en la fase
estacionaria puede disminuirse añadiendo un
disolvente orgánico a la fase móvil acuosa. Al
disminuir la polaridad de la fase móvil, la
distribución de los solutos se cambia hacia la
fase móvil.
Por lo tanto, para este tipo de cromatografías
se emplean mezclas de disolventes polares,
tales como agua, acetonitrilo, acetato de
etilo, acetona y alcoholes alifáticos.

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 interacciones

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 Ventajas de SPE
Ventajas en la utilización de la extracción en
fase sólida:

 Tamaño de muestra puede ser grande o

pequeño

 El volumen de elución es pequeño

 Pocas limitaciones en la utilización de

disolventes

Poco consumo de disolventes y pocas

posibilidades de contaminación.

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