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NATHALY MOLINA RODRIGUEZ

CHELSY MARIN MATEO


OSCAR TILIHUIT OLAYA
EQUIPO 5
¿Se puede determinar en proteínas, su punto isoeléctrico
mediante variación de pH?
ENZIMA FUNDAMENTO 1 PROCEDIMIENTO RESULTADOS
son moléculas de proteínas que tienen la capacidad de facilitar y acelerar las reacciones químicas que tienen lugar en los tejidos vivos, disminuyendo el ENZIMA CATALASA Actividad MANZANA
enzimática
nivel de la "energía de activación" propia de la reacción. Son protagonistas fundamentales en los procesos del metabolismo celular. El peróxido de hidrógeno se forma por la dismutación del radical superóxido y también en la No de tubo 1 hervido 2 3
Resultado xxx o xx xxxxx
La parte de la enzima donde se une el sustrato se llama el sitio activo (ya que ahí es donde sucede la "acción" catalítica. reacción de algunas oxidasas, es tóxico para la mayoría de los organismos vivos. Muchos
organismos son capaces de destruir el 𝐻2 𝑂2 mediante la acción de enzimas antes de que
CARACTERÍSTICAS
pueda realizar mucho daño. El 𝐻2 𝑂2 se convierte en oxígeno y agua según la siguiente
1- Son proteínas. reacción:
2.- Son los catalizadores más eficientes que se conocen. La mayor parte de las reacciones celulares ocurren a una velocidad alrededor de un millón de 2 𝐻2 𝑂2 → 2 𝐻2 𝑂2 + 𝑂2 Cortamos en trozos delgados del mismo
veces más alta de lo que serían en ausencia de enzimas. Aunque esta reacción ocurre espontáneamente, las enzimas incrementan la velocidad de tamaño cada uno de los tejidos (solo se
3. La mayoría de las enzimas se distinguen por su especificidad, lo que significa que cada conversión de un reactivo (llamado sustrato) en un producto reacción de forma considerable. manipula con las pinza no se debe de
tocar los tejidos)
es catalizada por una enzima determinada. La catalasa es una enzima que pertenece a la oxidorreductasas, se encuentra presente en
4.- Quizá una de las más notables características es que las acciones de muchas enzimas están reguladas de modo que pueden cambiar de un estado de los peroxisomas de las células de todos los tejidos animales, unida a â-Nicotinamida adenina
baja actividad a uno de alta actividad, dependiendo de las condiciones celulares en las que se encuentren. dinucleótido 2´fosfato reducido (NADPH), que la protege de la inactivación y aumenta su
eficiencia, y en vegetales (peroxidasa).
CLASIFICACIÓN MATERIAL REACTIVOS La enzima catalasa descompone a la molécula de peróxido de hidrógeno en un proceso de dos
Por clase FICHAS DE SEGURIDAD pasos. Colocamos una porción en cada tubo y
*Papa *Tubos de ensaye 𝐻2 𝑂2 La primera etapa implica que la enzima choque con la molécula de peróxido de hidrógeno. Un cubrirla con agua destilada (colocar un
átomo de oxígeno del peróxido de hidrógeno se une a un átomo de hierro en la catalasa. Un tubo con cada uno de los tejidos en agua
*Hígado de pollo *Baño maría NaCN 5% hirviendo por 5 minutos y colocarlo en
segundo peróxido de hidrógeno es entonces capaz de unirse a la enzima catalasa, que luego papel absorbente )
*Manzana * Cuchillo 𝑃𝑏(𝑁𝑂3 )2 rompe la molécula y la convierte en agua y gas oxígeno. HIGADO
No de tubo 1 hervido 2 3
*Pinzas * Pipetas Enz (Por-FeIII) + 𝐻2 𝑂2 → Compuesto I (Por+•-FeIV-O) + 𝐻2 𝑂2
Resultado XXXXX o XXXX XXX

*Papel absorbente * gradilla Compuesto I (Por+•-FeIV-O) + 𝐻2 𝑂2 → Enz (Por-FeIII) + 𝐻2 𝑂2 + O2


Compuesto I (Por+•-FeIV-O) + 𝐶𝐻3 𝐶𝐻2 𝑂𝐻→ Enz (Por-FeIII) + 𝐶𝐻3 𝐶𝐻2 𝑂𝐻 +𝐻2 𝑂
*Pipetas FUNDAMENTO 2 Agregamos a los de más tubos como lo indica la tabla
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
contenido Tubo1 Tubo2 Tubo3 Tubo4
De acuerdo con la naturaleza de su grupo activo la catalasa es inhibida en formairreversible por
las sustancias que forman complejos como el, por ejemplo el cianurosulfuroso, acida fluoruro, tejido Sin H H Sin H Sin H
NaCN ------ ------- 5gotas -------
monóxido de carbono, monóxido de nitrógeno ehidroxidamina.
Cianuro 𝑃𝑏(𝑁𝑂3 )2 ------- ------- -------- 5gotas

Es una sustancia química de uso industrial, minero como agente acomplejante de iones 𝐻2 𝑂2 2ml 2ml 2ml 2ml
metálicos, en la galvanoplastía de electrodeposición de zinc, oro, cobre y especialmente plata, y Mezclamos bien y observar cada tubo e indicar la intensidad de
PAPA
de uso en la producción de plásticos de base acrílica. burbujeo
No de tubo 1 hervido 2 3
La acción dela catalasa es por vía de la reacción directa del ión Fe(III) con el oxígeno, para Resultado XXXXX o X XXX
liberar el peróxido y formar agua.
La elevada constante de formación de complejos de hierro trivalente y divalente con aniones
cianuro es debida al fuerte enlace sinérgico originado por la suma de dos efectos:
- Donación de e- por parte del ligando en enlace s. DISCUSIÓN 1
- Retrodonación de e- por parte del metal en enlace p. El tubo que contenía solo el tejido crudo y al introducirle H2O2 este presento una un intenso
Ya que el cianuro se une por en laces covalentes al grupo funcional de la enzima, su inhibición burbujeo por lo que podemos decir que la enzima catalasa se encontraba activa, reaccionando
es irreversible. con el peróxido de hidrógeno y liberando oxígeno (burbujeo); en comparación con los tubos que
Plomo contenían los tejidos hervidos notamos que la temperatura influyo en la función de la enzima
El plomo ejerce sus efectos a través de su unión con grupos sulfhidrilos de proteínas y en las catalasa, puesto que al ponerla en el baño María por los 5 min, y después al adicionarle el H2O2
enzimas produce una inhibición de enzimas asociadas a membranas, por medio de la
la intensidad de la reacción fue casi nula ya que no hubo ninguna reacción, podemos decir
competición y desplazamiento del calcio, y alteración en el metabolismo de la vitamina D; la
CLASIFICACIÓN TRADICIONAL DE LAS ENZIMAS calmodulina es una proteína importante para la regulación intracelular del calcio, y su entonces que la enzima catalasa ya no se encontraba activa.
funcionamiento es alterado por el plomo. Discusión 2
 DESHIDROGENASAS.- Catalizan la pérdida de hidrógeno (H+ y e-) de un sustrato teniendo como aceptor una La unión del plomo a la catalasa se da en los grupos sulfhidrilo libres de las cisteínas que En los tubos con NaCN se presenta una poca cantidad de burbujeo ya que como dicho
contiene la enzima, de forma covalente, por lo que su inhibición sobre la enzima es anteriormente el CN es un inhibidor irreversible y este hace que la enzima se destruya y no
molécula diferente al oxígeno. irreversible.
realice su proceso.
 OXIDASAS.- Catalizan la pérdida de hidrógeno de un sustrato teniendo como aceptor al oxígeno. TEMPERATURA
Todas las enzimas son proteínas. Por lo tanto, todas las enzimas sufren desnaturalización Finalmente en los tubos con Pb(No3)2 notamos una cantidad moderada de burbujeo ya que este
 QUINASAS (CINASAS).- Catalizan la transferencia de grupos fosfato del ATP a otra molécula. frente al calor. Esto quiere decir que cuando la temperatura es muy elevada, la enzima pierde inhibidor actúa diferente, no se sitúa totalmente en el sitio activo si no que hace que la enzima
su estructura terciaria, por lo tanto su sitio activo también se desnaturaliza, y ya no puede catalasa retarde y se le dificulte el proceso o la función que tiene que realizar, por ello se nota
 TRANSAMINASAS.- Transfieren grupos amino a grupos carbonilo. CARACTERISTICAS DE 𝑵𝒂𝑪𝑵 𝒚 𝑷𝒃(𝑵𝑶 )
𝟑 𝟐 cumplir su función. En general, la velocidad de la reacción se incrementa con la temperatura que un poco de burbujeo al añadirle el H2O2.
La adición de plomo puede lograr una sustitución del ión Fe(III) por la del ión Pb(II). Cuando se logra la sustitución, la hasta que un punto máximo es alcanzado. Este incremento se debe a que aumenta el número
 FOSFATASAS.- Rompen enlaces fosfoéster en presencia de agua. enzima queda desactivada, pues el plomo (ahora en la enzima) no tiene la cantidad de orbitales vacíos para cumplir de moléculas ricas en energía que pueden pasar la barrera energética de estado de transición,
 TIOQUINASAS (TIOCINASAS).- Forman enlaces tioéster dependientes de ATP a partir de la coenzima A y con la misma función del hierro. para formar a los productos; la temperatura a la cual la actividad catalítica es máxima se llama
temperatura óptima. Sin embargo, si la temperatura aumenta por encima de la temperatura
ácidos carboxílicos. La adición de ión cianuro tiene un modo diferente de actuar. El ión cianuro se coordina muy fuertemente con el ión óptima, disminuye e incluso cesa la actividad enzimática debido a que la enzima se
 MUTASAS.- Catalizan rearreglos intramoleculares de grupos funcionales. Fe(III). Ésto hace que el ión Fe(III) no tenga la capacidad de reaccionar con el oxígeno extra del peróxido de hidrógeno, desnaturaliza.. Cada enzima posee una temperatura óptima, en las enzimas humanas suele
estar alrededor de 37°C.
 TRANSALDOLASAS Y TRANSCETOLASAS.- Transfieren grupos de tres y dos carbonos respectivamente. y entonces no cumpla su función
La enzima catalasa, al igual que otras proteínas, se puede desnaturalizar al exponerla a altas
 EPIMERASAS.- Catalizan la formación de compuestos con orientaciones espaciales diferentes. FUNCIÓN DE LA ENZIMA CATALASA temperaturas. Al perder su estructura se perderá también la función, por lo que no podrá
La CAT como parte del sistema antioxidante está involucrada en la destrucción del H2O2 generado durante el metabolismo descomponer el agua oxigenada.
 DESCARBOXILASAS.- Eliminan grupos carboxilo. celular. Esta enzima se caracteriza por su alta capacidad de reacción pero relativamente poca afinidad por el sustrato
 SINTETASAS.- Forman nuevos compuestos por condensación de dos sustratos. Se han identificado tres grupos de catalasas: i) las catalasas monofuncionales, que contienen hemo y están presentes tanto
en los organismos procariotos como en los eucariotos.
 HIDROLASAS.- Rompen enlaces introduciendo una molécula de agua ii) las Mn-catalasas, que son enzimas hexaméricas que no tienen hemo, tienen Mn en el sitio activo.
iii) las catalasas- peroxidasas, que tienen actividad de catalasa y de peroxidasa, contienen hemo y sólo están presentes en
 FOSFORILASAS.- Introducen fosfato inorgánico.
las bacterias y los hongos
Variables que influyen en la velocidad de una reacción enzimática CARACTERISTICAS DE LA ENZIMA CATALASA
NOTA
Significado de la constante Km La catalasa (peróxido de hidrógeno: peróxido de hidrógeno oxidorreductasa, EC 1.11.1.6) es una de las enzimas más La adición de más sustrato a la reacción da lugar a un aumento de la velocidad de reacción,
1. Concentración de enzima 1. Constante de equilibrio de disociación del complejo ES (en abundantes en la naturaleza y se encuentra ampliamente distribuida en el organismo humano. Esta enzima es una pero no hasta el grado que se observa en las reacciones sin inhibir. La inhibición acompetitiva
2. Temperatura condiciones de equilibrio rápido)
suele observarse en las reacciones en las que las enzimas unen más de un sustrato o en las que
3. pH 2. Medida inversa de la afinidad de la enzima por el sustrato (en metaloproteína tetramérica, cuyo peso molecular se encuentra en el rango de 210-280 kD. Consta de 4 subunidades
condiciones de equilibrio rápido) idénticas que se mantienen unidas por interacciones no covalentes. Cada subunidad contiene un grupo prostético de requiere un cofactor ya que el inhibidor suele unirse a él
4. Concentración de sustrato Valores de Km Grandes -----------Afinidad Pequeña protoporfirina IX y el contenido protohémico y el de hierro representan un 1,1 % y 0,09 % respectivamente del peso
5. Efectores (Activadores e Inhibidores) Valores de Km Pequeños ---------Afinidad Grande
molecular total de la enzima.
Imágenes 1,2,3,4 y 5
EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE LA ENZIMA
EFECTO DE LA TEMPERATURA
Conclusión
Manteniendo [S], T, pH = constantes Manteniendo [S], [E], pH = constantes
En efecto, la actividad enzimática se puede inhibir por varias formas, en
La temperatura afecta a las esta practica las que realizamos fueron por efecto de la temperatura y por
reacciones químicas. Las sustancias que forman complejos con el, como el cianuro de sodio y el
reacciones enzimáticas no nitrato de plomo, esto lo pudimos comprobar mediante esta practica.
son la excepción. Pero
Manteniendo la debido a que las enzimas
concentración de sustrato son proteínas se presenta
constante la velocidad de una desnaturalización
reacción es directamente térmica CUESTIONARIO
proporcional a la 6 La adición de más sustrato a la reacción da lugar a un aumento del grado de inhibición. A [S] 1.– ¿Cuál es el efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática?
5 Todas las enzimas son proteínas. Por lo tanto, todas las enzimas sufren
concentración de la enzima elevadas, todos los sitios activos están llenos de sustrato y consecuentemente el inhibidor tiene
más complejos a los que puede unirse desnaturalizarción frente al calor. Esto quiere decir que cuando la temperatura es
muy elevada, la enzima pierde su estructura terciaria, por lo tanto su sitio activo
Efecto de pH Manteniendo [S], [E], T = constantes también se desnaturaliza, y ya no puede cumplir su función.
Las enzimas presentan un comportamiento diferente frente a los cambios de pH Cuando añadimos el agua oxigenada, no se observa el burbujeo. En general, la
dependiendo del comportamiento ácido-base de la enzima y el sustrato velocidad de la reacción se incrementa con la temperatura hasta que un punto
máximo es alcanzado. Este incremento se debe a que aumenta el número de
Estos comportamientos pueden explicarse por:
moléculas ricas en energía que pueden pasar la barrera energética de estado de
Colinesterasa transición, para formar a los productos; la temperatura a la cual la actividad
Tripsina 1. Una alteración de la carga neta de la proteína que repercute en la
solubilidad. catalítica es máxima se llama temperatura óptima. Sin embargo, si la temperatura
2. Alteración de la conformación de la proteína al afectar los niveles 3º y/o 4º aumenta por encima de la temperatura óptima, disminuye e incluso cesa la actividad
lo cual repercute en una mayor o menor actividad. enzimática debido a que la enzima se desnaturaliza. Cada enzima posee una
3. Un efecto del pH sobre el sustrato 3 4 temperatura óptima, en las enzimas humanas suele estar alrededor de 37°C.
Pepsina Papaina 4. Una combinación de los efectos anteriores. 2.– ¿Qué es el factor Q-10?
(sustrato = benzoilargininamida) Otro parámetro que se utiliza para cuantificar el efecto de la temperatura es el
El pH óptimo de una enzima no es necesariamente idéntico al pH de su entorno
EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO coeficiente de temperatura (Q10), que se define, para una temperatura dada, como
El efecto de un inhibidor competitivo sobre la actividad puede invertirse aumentando la el factor de incremento de la velocidad de reacción cuando la temperatura se
intracelular normal. Esto probablemente sea una de las maneras de controlar la
Manteniendo [E], T, pH = constantes
concentración de sustrato. A [S] elevadas, todos los sitios activos están llenos de sustrato y incrementa 10 o C.
4. Es la concentración de sustrato actividad enzimática.

Al aumentar la concentración de sustrato se incrementa la velocidad de reacción alcanza el valor que se observa sin un inhibidor
5.Efectore(Activadores e Inhibidores)
la velocidad de la reacción. Esto se debe a que más INHIBIDORES ENZIMÁTICOS
Los inhibidores enzimáticos son sustancias que afectan
moléculas de sustrato colisionarán con las moléculas
negativamente la función de las enzimas y, en 3.– Escribir el complejo que se forma con el Fe y el CN.
de enzima, por lo que se formará el producto más - reversible: los inhibidores se unen en forma NO covalente.
consecuencia, ralentizan o en algunos casos, detienen El ion ferroso (Fe2+) forma un complejo con seis iones cianuro (CN) y es un
rápidamente. No obstante, al superar cierta - Irreversible: Los inhibidores se unen en forma covalente.
la catálisis. complejo octaédrico que se llama ferrocianuro. El ion férrico también forma un
concentración de sustrato no habrá ningún efecto sobre Dependiendo de la cantidad de Enzima o inhibidor la inhibición puede ser:
Hay tres tipos comunes de inhibición enzimática: complejo con seis iones cianuro, el complejo octaédrico formado se llama
la velocidad de la reacción, pues la enzimas estarían 1 - Total: La concentración de inhibición es igual o mayor que la enzima.
competitiva, no competitiva e inhibición del sustrato. ferrocianuro y la única diferencia es que el complejo de hierro II tiene un electrón
saturadas y funcionando a su máxima velocidad. 2 - Parcial: La concentración de inhibidor es menor que la enzima. más que el complejo de hierro III.