FACULTAD DE MEDICINA

“METODOS DE ESTUDIO DE
LA CELULA Y TEJIDOS”
Dra. Ada Del Carpio
 RESEÑA
HISTORICA
Antonio Van
LEEUWENHOEK
 NIVELES DE ESTUDIO
CELULAR
Estructural
Ultraestructural
Fisiología Celular
Bioquimica Citoquimica
Biología Molecular
 EQUIPOS DE MAGNIFICACION
Limite de la vision humana 0.1 mm.
Tipos de microscopios
a. Ópticos
b. Electrónicos
c. Microscopios de rayos X
d. Microscopios de barrido con sonda
- Microscopia de efecto tunel
- Microscopio de fuerza atómica
 MICROSCOPIOS OPTICOS
COMPUESTOS
Parte mecanica, estativo Parte optica
o montura:
• Pie
• Oculares: Tipos
• Columna (Pilar, charnela y brazo)
• Objetivos: Tipos (magnificacion,
• Tubo: Revolver A.N., longitud del tubo, espesor de
• Tornillos macrometrico y la laminilla)
micrometrico • Sistema de iluminacion: Fuente
• Platina: Pinzas sujetadoras y de luz, condensador y diafragma
mandos coaxiales
• Subplatina: Tornillos del
condensador, anillo portafiltro,
diafragma iris, soporte de luz o
espejo
 Dimensiones en Microscopía
SISTEMA MÉTRICO DECIMAL ABREVIACIÓN UNIDADES TRADICIONALES
Submúltiplos del metro

Metro m
Decímetro
Centímetro
Milímetro
0.1 mm.
0.01 mm.
0.001 mm. µm micra
0.1 micra
0.01 micra
0.001 micra nm Milimicra o
nanometro
0.1 nanometro A Angstron
 Microscopio de Campo Claro
Microscopios
Ópticos simples:
• Lupas,
estereoscopicos, de
diseccion
• Forman imágenes
derechas
• Poco aumento 50X
 MICROSCOPIOS OPTICOS
COMPUESTOS
Parte mecanica, estativo Parte optica
o montura:
• Pie
• Oculares: Tipos
• Columna (Pilar, charnela y brazo)
• Objetivos: Tipos (magnificacion,
• Tubo: Revolver A.N., longitud del tubo, espesor de
• Tornillos macrometrico y la laminilla)
micrometrico • Sistema de iluminacion: Fuente
• Platina: Pinzas sujetadoras y de luz, condensador y diafragma
mandos coaxiales
• Subplatina: Tornillos del
condensador, anillo portafiltro,
diafragma iris, soporte de luz o
espejo
Microscopio Óptico Compuesto
 Nociones de Microscopia
Factores que determinan la mayor
capacidad del microscopio
• Calidad de los lentes (corrección de
aberraciones cromáticas, de esfericidad y
curvatura de campo)
• Longitud de onda determina el poder de
resolución
• Resolución (0.2 µm)
 Resolucion
Límite de resolución (r) = 0.61 x (lambda)
AN
En donde:
0.61 es una constante que expresa la diferencia
de contraste mínimo que puede detectar el ojo
humano.
Lambda, es la longitud de onda de luz utilizada.
AN es la apertura numérica del objetivo.
Apertura Numérica
 Aberraciones de los Lentes

Curvatura de campo

Aberración cromática

Aberración de esfericidad
MICROSCOPIOS
ESPECIALES
Caracterí Contraste de De De De Campo Luz ultravioleta Fluorescencia
sticas Fase Interferencia Polarización oscuro
Usos Observación de células Determinar el peso seco Observación de Observación de Identificación de ácidos nucleídos Identificación de ácidos
y tejidos vivos de sustancias, minerales, de gérmenes de células nucleídos , cromosomas y
observación de células y componentes complemento par
tejidos vivos celulares o titulares inmunofluorecencia
con ordenamiento
molecular

Fuente Luz (fotones) Luz (fotones) Luz que vibra en Luz (fotones) LUV de 200 400 nm LUV de 400 nm
una sola dirección

Lentes De vidrio: Condensador De vidrio De vidrio De vidrio De cuarzo o fluorita De cuarzo o fluorita
y objetivos con placas
cambiadora de fases

Fundamentos Los retardos de fases Se logra la separación Se basa en la Condensador •Es invisible a nuestra vista Aprovecha propiedad de
en sustancias con de la luz en dos haces existencia de especial, dirige rayos •Su longitud de onda oscila entre ciertas sustancias que al
densidad y espesor antes de llegar al sustancias de luz en forma 400 nm a 200 nm ser excitadas por
variables, no son preparado. Un rayo birrefringentes con oblicua al •Se produce conjuntamente con
radiaciones emiten luz
percibidos por el ojo pasa por el preparado y alto grado de portaobjetos sin que luz visible en el arco voltaico y en
humano, peo cuando el otro fuera de el y sirve orientación molecular ningún rayo directo las lámparas de vapor de visible.
se convierten en para comparar (anisótropas) que ingrese al objetivo mercurio Fluorescencia primaria,
diferencia de intensidad dividen el rayo Se aprecia un fondo •Tienen efectos perjudiciales natural o autofluorecencia
luminosa por las placa incidente en un rayo oscuro con puntos sobre las células vivas y puede (clorofila que da
cambiadora de fase ordinario (eliminado brillantes cuando hay provocar lesiones oculares fluorescencia roja, la
adelantando o por el nicol de calcita muestra que refleje •No atraviesa las lentes de vidrio, riboflavina que produce
retardando un cuarto d y un rayo la luz con excepción de las ondas cuya fluorescencia amarilla; el
fase en condensador y extraordinario que longitud se aproxima a los 400 nm
bacilo de la tuberculosis)
objetivo, se exagera ingres al eje óptico) •Se propaga a través de lentes de
esa diferencia y se cuarzo fundido o de fluorita Fluorescencia secundaria
observa estructuras •Impresiona las placas inducida, (anaranjado de
fotográficas acridina, la quinadrina, etc)
•Se hace visible en las pantallas
fluorescentes
•Es absorbida por determinadas
sustancias

Observación Visual, micrografías Visual, micrografías Visual, Visual, Impresionan placas Visual, micrografías
micrografías micrografías fotográficas Y placas fotográficas

Peculiaridad La separación de los Similar al Nicol polarizador Condensador con Filtros seleccionados Filtro e radiación
rayos (directo y Microscopio de (debajo del filtro opaco que determinan longitud de onda ultravioleta
refractado) es en contraste de fase. Se condensador) bloquea el paso de Propiedades de visualizar en
todo el preparado logra colores de Nicol analizador luz al objetivo pantallas fluorescentes
interferencia (encima del sustancias que absorben la
objetivo) ultravioleta
Microfotografía con contraste de
fase´con 400 X.
Etapa de 4 blastómeras de un cigoto
de Emerita análoga (muy muy)
Microfotografía tomada con microscopio
de contraste de fase.
A la izquierda se aprecia un óvulo, a la
derecha un cigoto, con 2 y con 4
blastómeras, de Emerita análoga.
Microfotografías de células epiteliales de la cavidad oral
vistas con microscopio de: (a) Campo claro. (b) Contraste
de fase. (c) De interferencia
Microfotografía de la
corona de un diente
visto con microscopio
de luz polarizada:

E = Esmalte.
D = Dentina
1 = Laminilla del
esmalte.
2 = Límite
amelodentinal.
3 = Canalículos
dentinales
Microscopía de campo oscuro. a) Con condensador
paraboloide. B) Con condensador cardioide (en forma de
un corazón).
Microfotografía de
células tomadas
con microscopio
de fluorescencia.
Los “colorantes”
fluorescentes
utilizados
permiten ver los
núcleos de color
azul y en el
citoplasma se
aprecian fibras del
citoesqueleto con
fluorescencia
verde
MICROSCOPIO
ELECTRONICO
 RAYOS CATODICOS
CARACTERISTICAS Y PROPIEDADES

Son haces de electrones que se propagan en el vacío siguiendo un trayecto

ondulatorio.
Se puede disminuir a voluntad la longitud de estas ondas, hasta conseguir
ondas miles de veces más pequeñas que las de luz (esto se consigue
aumentando la diferencia de potencial entre el cátodo y el ánodo).
Estos electrones atraviesan láminas finísimas de materia.
Son deflexionados por campos electromagnéticos
Producen efectos térmicos y mecánicos
Son invisibles.
Producen fluorescencia al incidir sobre planos de material fluorescente.
Impresiona las placas fotográficas.
 DIFERENCIAS ENTRE:
MICROSCOPIO OPTICO Y
ELECTRONICO
 Microscopio Optico Caracteristicas Microscopio Electronico

De interferencia de rayos Imagen dada por el M Rayos catodicos, deflexionados por

luminosos campos elecromagneticos

Simple con aire Tubo Al vacio con gran diferencia de

potencial

Luz (fotones) Fuente Filamento de Tungsteno (electrones)

Ocular, objetivos y condensador Lentes Bobinas: Campos electromagneticos o

condensador, objetivo y proyectos

Celulas vivas o muertas Estudian Celulas muertas

Coloreada o no Observacion de Diferentes tonos de gris, sombreados

imágen electronicamente

0.1 µm Poder de resolucion 1 nm o 10 A

5 500 A Longitud de onda λ 0.05 A (puede disminuir a voluntad por

difenerencia de potencial entre ánodo
y cátodo)
500 a 2000 de veces Aumento 200 000 a 300 000 aumentos directos
 Microscopio Optico Caracteristicas Microscopio Electronico

Formol, Carnoy, etc Fijacion Bicromato dde K., tetraoxido de

osmio, formaldehido
Parafina o celoidina Inclusión Acrilicos o resina epoxi

Con el microtomo Cortes Con el ultramicrotomo

De acero Cuchilla para corte De diamante o vidrio

De 4 a 10 µm Grosor de cortes 20 a 100 nm

De vidrio Portaobjeto De colodion, aluminio o berilio

Estructura Nivel de observacion Ultraestructura

Visual, micrografias y placas Observacion Impresionan placas

fotgraficas fotograficas 1 000 000 de
aumentos
De campo claro, de contraste de Tipos De transmision, de barrido
fase, de Interferencia, de luz (scanning)
polarizada, de acmpo oscuro, de
LUV, de fluorecencia
Mecanica y optica Partes Tubo o columna y consola
FIN