DR. NESTOR ALAYO RODRIGUEZ DR. JULIO BRIONES CASTILLO MATERIALES: • Sangre venosa Sangre sana Sangre con anemia Sangre con infeccion • Pipeta cuenta glóbulos rojos y blancos • TUBOS DE WINTROBE (hematocrito) • Anticoagulantes: • Solución de turk • Lanceta de punción, ligadura de brazo y jeringa hipodérmica de 5cc. • Micropipetas para dosajes de hb. • Centrífuga y fotocolirimetro (klett – smmerssonóbeckman) • Microscopio • Otros materiales de vidrio : pipetas pasteur, laminillas porta jetos, laminas escabadas. • Otros materiales: gradilla, algodón, alcohol, papel filtro, agujas hipodérmicas nº 20, 21. • Cámara de newzwer (recuento de glóbulos) • Capilares heparinizados • Colorante wright • solución hayems (glóbulos rojos) • solución turk (glóbulos blancos) • solución hidroxido de amoniaco (hemoglobina) PROCEDIMIENTO Recuento de los Glóbulos Rojos Sumar los glóbulos contados en los cinco campos exigidos de 16 cuadraditos cada uno.
Las dimensiones de la cámara y el grado de dilución constituyen la base del
cálculo. Como cada uno de los cuadraditos más pequeños tiene una superficie de 1/400 mm2, de los cuales se han contado 80, la profundidad es de 1/10mm. y la dilución es de 1/200; para calcular el número de hematíes por mm3, se debe efectuar las siguientes operaciones: N x 400 x 10 x 200 ó N x 4000 x 200 80 80 Recuento de Glóbulos Blancos
El cálculo se basa, igualmente, en las dimensiones de la cámara
y el grado de dilución. Como los glóbulos de han contado en cuatro mm2, la altura de la cámara es de 0.1 mm; el grado de dilución es de 1/20; para calcular el número de glóbulos blancos por mm3. Se efectuará la siguiente operación:
N x 10 x 20 4
Dónde: N: número de glóbulos blancos contados en los 4mm2. Volumen Hematocrito Microhematocrito: (método de Guert – Wichselbaun modificado)
Guert – Wichselbaun modificado)
Llenar con sangre el tubo capilar heparinizado hasta una altura convencional que representa el 100%, sellar el extremo inferior por donde ingresó la sangre con plastilina; luego agitar convenientemente empleando una pequeña barra metálica introducida en el capilar, la cual se desplaza por la fuerza de un pequeño imán que se moviliza externamente. Centrifugar a 2450 r.p.m. durante 20 minutos. Se utiliza la escala milimetrada y la determinación se realiza de la manera siguiente: Colocar el capilar con la muestra sanguínea sobre la línea vertical de la derecha, de manera que el límite inferior de la columna sanguínea coincida con el 0%. Velocidad de Sedimentación
Coloque en un tubo de hematocrito una muestra de sangre con
anticoagulante hasta la marca superior. Déjelo en reposo y en forma vertical por espacio de una hora, al cabo de la cual leerá el límite inferior que alcanza la columna clara de plasma, en mm. El resultado se expresa en am. por hora. Dosaje de Hemoglobina
Tomar en una micropipeta para hemoglobina; 0.02 ml de sangre y luego pasarlo
varias veces en un tubo de prueba que contiene una solución de NH4OH al 0.4%; luego, aforar a 5ml con solución. Dejar en reposo 10 minutos para finalmente leerse en el fotocolorímetro Beckman. La lectura fotocolorimetría será multiplicada por el factor correspondiente que será dado oportunamente en la práctica, obteniéndose el resultado en g. de Hb. por 100ml de sangre. Fórmula Leucocitaria Lavar varias veces las láminas portaobjetos con agua jabonosa; enjuagar con alcohol éter para remover la grasa; secar con un paño que no deje pelusas. Para realizar el frotis de sangre, colocar una pequeña gota de sangre a medio cm. del extremo de un portaobjeto limpio. Colocar otra lámina con una angulación de 45°, inmediatamente, por delante de la gota de sangre y suavemente, moverlo hasta tocar con la gota dejando que la sangre se extienda a lo largo de su borde. Deslizar la lámina suavemente hasta el extremo del portaobjeto en el que se está haciendo frotis. Hacer varias extensiones y dejar secar. Cubrir el frotis con colorante de Wright, contando el número de gotas que se ha usado; dejar por un minuto, con lo que el frotis se fija al vidrio. Examinar el frotis al microscopio, usando objetivos de inmersión y clasificar por lo menos 100 leucocitos. Constantes Corpusculares Para esta determinación es necesario conocer previamente la cantidad de hematíes por mm3, el hematocrito, y la cantidad de Hb. Estas constantes corpusculares son: Volumen corpuscular medio (V.C.M.); hemoglobina corpuscular media (Hb.C.M.) y concentración de Hb corpuscular media (C.Hb.C.M). V.C.M.- es el volumen medio correspondiente a un eritrocito, expresado en micras cúbicas (u3). Ht% x 10 = V.C.M en u3 Número de hematíes en millones Hb.C.M.- es la cantidad media de Hb., correspondiente a un eritrocito, expresando en micro microgramos (u ug). Hb.g.% x 10 = Hb.C.M en uug Número de hematíes en millones C.Hb.C.N.- es la concentración de la Hb., dentro del eritrocito, expresando en %. Hb.g.% x 100 = C.Hb.C.N. expresado en % Hematocrito RESULTADOS TIPO DE PACIENTE Nº NORMAL CON ANEMIA CON INFECCION PARAMETRO HEMATOLOGICO 1 2 3 x 1 2 3 x 1 2 3 x 1 Número de globulos 4420 4830 5070 4773 2800 2690 2860 3203 4030 4970 4560 452 rojos (mm3) 000 000 000 37 000 000 000 333 000 000 000 0 2 Número de globulos 1080 9900 9600 1010 8600 9350 1230 1221 1355 1370 1590 143 blancos (mm3) 0 0 0 6 0 0 0 83 3 Hematocrito (%) 54 50 56 533 48 25 36 36.3 27 44 40 37 4 Microhematocrito (%) 56 54 312 47 48 24 17 31.3 2758 42 36.6 35.3 9 5 Hemoglobina (g/dl) 18 18 18.6 18.2 16 9.6 12 12.53 9 14 13.3 12.1 6 Velocidad de 9/30 25/30 22/26 16/10 36/30 24/29 8/10 30/30 25/30 sedimentación (mm/h) 24/1h 48/30 24/30 r Formula leucocitaria 41 56 60 523 56 62 57 583 50 68 71 63 (%) Neutrofilo Linfocito 48 38 50 45.3 14 31 41 28.6 35 32 43 36.7 Monocito 4 4 7 5 16 3 5 8 8 8 9 Basofilo - 0 - 0 1 0 - 03 - 0 - Eosinofilo 4 9 6.6 14 14 4 7 8.3 7 2 3 4 8 Constante 2000/ 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 corpusculares 2 1 15 0329 016 088 - VCm 0.000 0.000 0.000 -Hb CM 37 0356 028 - 0.6% 38.4% 318% CHbCM DISCUSIÓN El recuento de glóbulos rojos es el número total de glóbulos rojos que hay por milímetro cúbico de sangre. Los glóbulos rojos son las células sanguíneas que contienen en su interior la hemoglobina. Son los principales portadores de oxígeno a las células y tejidos del cuerpo. Tienen una forma bicóncava para adaptarse a una mayor superficie de intercambio de oxígeno por dióxido de carbono en los tejidos, Las cifras normales de glóbulos rojos o hematíes es de 4.500.000- 5.000.000 por mm3, con variaciones de índole fisiológica (edad, sexo, ejercicio, hábitat, etc.). Se conoce como poliglobulímia el número anormalmente alto de hematíes, y como anemia la escasez de los mismos.
SIGNIFICADO DE LOS RESULTADOS ANORMALES
Los números de glóbulos rojos más altos de lo normal pueden deberse a: Consumo de cigarrillo Cardiopatía congénita Deshidratación (como por ejemplo, por diarrea severa) Tumor renal (carcinoma de células renales) Niveles bajos de oxígeno en la sangre (hipoxia) Fibrosis pulmonar *El conteo de glóbulos rojos se incrementará durante varias semanas cuando usted se traslade a una altitud mayor. Los números de glóbulos rojos más bajos de lo normal pueden deberse a: Anemia Insuficiencia de la médula ósea (ejemplo, por radiación, toxinas o tumor) Deficiencia de eritropoyetina (secundaria a enfermedad renal) Hemólisis (destrucción de glóbulos rojos) debido a transfusión, lesión vascular u otra causa Hemorragia (sangrado) Leucemia Desnutrición Mieloma múltiple Deficiencias nutricionales de: Hierro, cobre, folato, vitamina B12, vitamina B6 Sobrehidratación Embarazo Los recuentos leucocitarios determinan la concentración de leucocitos en la sangre de un paciente. Un recuento diferencial de leucocitos determina el porcentaje de cada uno de los cinco tipos de leucocitos maduros. Un recuento elevado de leucocitos produce en infección , alergia, enfermedad sistémica, inflamación, daño tisular, y la leucemia. Un bajo conteo de leucocitos puede ocurrir en algunas infecciones virales, inmunodeficiencia y fallo de médula ósea. El recuento de leucocitos ofrece pistas sobre ciertas enfermedades y ayuda a los médicos a monitorear la recuperación de un paciente. Conteos anormales que vuelven a la normalidad indican que la afección está mejorando, mientras que los valores que se vuelven más anormales indican que la condición está empeorando. El diferencial revelará qué tipo de leucocitos son los más afectados. Por ejemplo, un recuento elevado con un aumento absoluto de linfocitos que tienen un aspecto atípico es más a menudo causado por la mononucleosis infecciosa. El diferencial de leucocitos también identificará principios que pueden ser reactivos (por ejemplo, una respuesta a la infección aguda) o el resultado de una leucemia. El hematocrito es el porcentaje del volumen total de la sangre compuesta por glóbulos rojos.1 Los valores medios varían entre el 42 y el 52 % en los hombres, y entre el 37 y el 47 % en las mujeres, debido a la mayor musculatura y por ende mayor necesidad de oxígeno de los primeros. SIGNIFICADO DE RESULTADOS ANORMALES Un índice bajo de Hematocrito puede deberse a: Anemia Fallos en la médula ósea (Radiaciones, toxinas, fibrosis, tumores, etc.) Embarazo Hemorragias Hipertirodismo Hemolisis (destrucción de glóbulos rojos) por una transfusión Leucemia Problemas de alimentación Artritis reumatoide Un índice alto de Hematocrito puede deberse a: Cardiopatías Deshidratación Eclampsia (en el embarazo) Enfermedades pulmonares crónicas Exceso de formación de hematíes (eritrocitosis) Policitemia vera Choque (shock) GRUPOS DE LEUCOCITOS Hay diferentes grupos de glóbulos blancos, los llamados polimorfonucleares (neutrófilos, eosinófilos y basófilos) y los mononucleares (linfocitos y monocitos).
La CONCENTRACIÓN MEDIA DE HEMOGLOBINA
CORPUSCULAR (CMHC) define la relación entre el peso de la hemoglobina y el volumen de los glóbulos rojos, seexpresa en porcentaje o en gr/100cm3. Se calcula según la fórmula:CMCH= hemoglobina (gr/100cm3) x 100 / hematocrito (%)
La HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA (HCM) expresa el
peso de hemoglobina por hematíe, permite, como la anterior, clasificar las anemias en hipocrómicas, normocrómicas e hipercrómicas. Para calcularla utilizamos la fórmula: HCM= hemoglobina (gr/100cm3) x 100 / n° de hematíes Su valor oscila entre 11 y 17 picogramos (pg). GRACIAS