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ENDOTOXINAS EN EL

CONTROL DE
PRODUCTOS ESTERILES
INTEGRANTES:
 Huamani Miranda,Monica
 Martinez Yaye Geraldine
 Ramos Jamjachi,Maribel
 Rojas Cardenas,Nathalie
 Yapuchura Mamani, Marilu DOCENTE: RITA
SECCION:FB6M1
En la actualidad, la calidad, inocuidad y seguridad de los
productos farmacéuticos inyectables es de relevante
importancia por su amplia formulación en la prevención y
el tratamiento de muchas enfermedades.
El ambiente de los laboratorios, el personal, los
implementos y equipos de trabajo, así como el agua y las
materias primas, albergan microorganismos que se
desarrollan y afectan la calidad de los medicamentos
parenterales.
Un contaminante propio de origen bacteriano en estos
medicamentos son las denominadas endotoxinas,
provenientes de las bacterias gram negativas. Estas
endotoxinas producen consecuencias en el organismo y
en algunos casos pueden causar la muerte convirtiéndose
en un peligro para el hombre
FORMAS FARMACUTICAS ESTERILES
Pueden agruparse en:
Líquidos Estériles
◦ Inyectables
◦ Ampollas
◦ Viales

Polvos Estériles
◦ Para Reconstituir

Ungüentos Estériles
◦ Oftálmicos

Gotas Estériles
◦ Oftálmicos

Sistemas Terapéuticos
◦ Dispositivos Intrauterinos
◦ Implantes
ENDOTOXINAS BACTERIANAS
Las bacterias Gram negativas tienen su membrana
externa formada por lipopolisacáridos, esta
estructura es tóxica para otros organismos
superiores, como los animales y los hombres.
Estos lipopolisacáridos se conocen como
endotoxinas, para diferenciarlos de otras toxinas
que puedan secretar las bacterias pero que no
forman parte de su estructura, llamadas
exotoxinas. Cuando las bacterias se multiplican o
se destruyen, parte de estas endotoxinas pasan al
medio, por lo que ejercen su función patógena.
LA FUENTE MÁS
COMÚN
Son pirógenos del agua, los
productos químicos y el material de
vidrio, por lo que se recomienda el
uso de soluciones estériles
recientemente preparadas, reactivos
de alta pureza, material
despirogenizado y una correcta
metodología de trabajo.
ENSAYOS DE PIRÓGENOS
Método del conejo
Método del LAL (control de endotoxina)
Productos inyectables
◦ Agua, producto intermedio, producto terminado
◦ Método de farmacopea validado para cada tipo de producto
◦ Siempre para agua e intermediarios
Fallas del ensayo
◦ Causas investigadas
◦ Acción correctiva
APLICACIONES DEL ENSAYO DE LAL
EN LA INDUSTRIA FARMACÉUTICA
En las bacterias, como en todos
los organismos vivos, tienen
lugar reacciones químicas de
transformación de nutrientes
que permiten la formación de las
estructuras necesaria para la
vida de estos microorganismos.

El conjunto de estas reacciones es lo que conocemos como metabolismo bacteriano.


Los lipopolisacáridos (LPS) que forman parte de la membrana externa de las bacterias
Gram negativa, son tóxicos para los animales y el hombre, por lo que son conocidos
como endotoxinas bacterianas.
La membrana externa de las bacterias Gram
negativas es la estructura que las diferencia de
las bacterias Gram-positivas, y principalmente esta
diferencia consiste en una capa externa de
naturaleza glicolipídica formada principalmente
por lipopolisacárido. El lipopolisacárido específico
de cada bacteria determina en que medio esta
bacteria puede vivir y las condiciones ambientales
que va a ser capaz de resistir. La estructura del
lipopolisacárido consta de tres partes:
El método recomendado actualmente por las farmacopeas
europeas y estadounidense para detectar la presencia de
endotoxinas bacterianas en fármacos es el ensayo de
lisado de Amebocitos de Limulus (LAL).
ENDOTOXINAS BACTERIANAS
PROCEDENTES DE BACTERIAS GRAM
NEGATIVAS EN FÁRMACOS
Las endotoxinas bacterianas son el contaminante más frecuente y peligroso que puede
encontrarse en los productos terminados de la industria farmacéutica.

Se puede afirmar que cuando un


fármaco está libre de endotoxinas no
contiene otros componentes
pirogénicos, ya que las endotoxinas
bacterianas son las que más efecto
como pirógeno tienen y las más
usuales.
Durante la elaboración de productos inyectables hay que tomar todas las
medidas concebibles para evitar la contaminación pirogénica, así como
disponer de un ensayo confiable de control en el producto terminado.
CONTROL DE CALIDAD EN LA
OBTENCIÓN DE FÁRMACOS
MEDIANTE EL MÉTODO LAL
En los últimos años, con el avance científico técnico del sector farmacéutico y biotecnológico, se han
incrementado las exigencias acerca de la calidad de los productos farmacéutico.

El, se ha impuesto para determinar la ausencia


de pirógenos en productos terminados, sobre
todo en aquellos de uso parenteral. El análisis
de pirógenos constituye uno de los principales
ensayos en el control de calidad de la
fabricación de fármacos, por su repercusión en
la salud humana.

Ante las disposiciones de las Farmacopeas e Instituciones Reguladoras Internacionales, el ensayo del LAL gana cada vez
más el interés de la Industria Farmacéutica y Biotecnológica nacional. Teniendo en cuenta además el notable desarrollo
que ha alcanzado el método y su importancia para el cumplimiento de las Buenas Prácticas en el proceso de fabricación
de inyectables
EL REACTIVO LAL
La historia del descubrimiento del reactivo LAL comienza en 1956, cuando el doctor Frederick
B. Bang reporta la muerte por coagulación intravascular en el cangrejo herradura americano Limulus
polyphemus.

Bang, junto a Jack Levin, revela


en 1964 que las endotoxinas
son el vector causante de la
coagulación de la hemolinfa
del Limulus
Por lo tanto, el reactivo LAL es un extracto acuoso de los amebocitos, compuesto por
una cascada de enzimas serino proteasas tipo tripsina capaz de reaccionar frente a
pequeñas cantidades de endotoxinas

La bioquímica de la reacción del LAL se conoce en detalle y el mecanismo en


cascada parece ser el responsable de su extraordinaria sensibilidad.
DETECCIÓN DE ENDOTOXINAS
MEDIANTE EL ENSAYO DEL LAL
El ensayo del LAL solo detecta endotoxinas. Las endotoxinas son compuestos químicos
complejos que se encuentran exclusivamente en la membrana externa de la pared celular
de las bacterias gramnegativas.
Los primeros defensores de la aplicación del LAL en la industria farmacéutica plantearon
que esta característica no era un inconveniente determinante, debido a que las
endotoxinas eran el pirógeno más relevante por las razones.

Las bacterias gramnegativas son tan ubicuas, capaces incluso de colonizar el agua destilada, puede
esperarse que ellas y/o sus endotoxinas estén presentes en cierto nivel en la mayoría de los artículos,
contaminando comúnmente las materias primas y el equipamiento empleado para la producción de
inyectables.
Las endotoxinas se caracterizan sobre todo por su potente actividad biológica, por lo que son capaces de
producir profundos cambios fisiológicos cuando son administradas por vía parenteral.
MÉTODOS DEL LAL
Existen 3 variaciones básicas del ensayo del LAL en el
mercado:
La presencia de endotoxinas es determinada por la formación de un
gel o coágulo insoluble.
Se puede desarrollar de forma cuantitativa o semicuantitativa.
Produce resultados binarios, positivo (+) o negativo (-). Un tubo es
positivo cuando el gel permanece intacto después de que se invierte
cuidadosamente un ángulo de 180 º, cualquier otra condición es
interpretada como negativa.
El alcance del método está limitado únicamente por la sensibilidad
del lisado.
MÉTODOS TURBIDIMÉTRICOS.
Estos métodos se fundamentan por el
aumento de la turbidez en la mezcla de
reacción provocado por el incremento de
la concentración de coagulina insoluble, la
cual se monitorea
espectrofotométricamente. La proporción
del aumento de turbidez está relacionada
con la concentración de endotoxinas en la
muestra.
MÉTODOS CROMOGÉNICOS
Estos métodos han sido empleados
especialmente para la cuantificación de
endotoxinas en muestra de plasma, sangre y
otros fluidos biológicos.40,41 Al igual que los
métodos turbidimétricos, el equipamiento que
requiere es costoso pero de uso variado en el
laboratorio. El sustrato cromogénico es el
componente más caro e inestable del kit.
Cuenta con 2 versiones de punto final y una
cinética.
MÉTODO DE GEL-CLOT PARA
CUANTIFICAR ENDOTOXINAS MEDIANTE
EL ENSAYO DE LAL
El método Gel-Clot consiste en determinar si aparece un gel, la
gelificación ocurre al coagularse las proteínas por la presencia
de endotoxinas.
Un criterio usado en el método de gelificación es girar el tubo
de ensayo hasta cubrir un ángulo de 180º con el giro y
comprobar que el gel se mantiene intacto. El método Gel-Clot
puede usarse de manera cualitativa, dando resultados positivo
o negativo si no se llega a formar el gel, y semicuantitativa.
TEST LIMULUS COLOR KY PARA
LA DETECCIÓN DE
ENDOTOXINAS
Está diseñado para determinar de manera cuantitativa la
cantidad de endotoxina bacteriana presente en una
muestra. Al reaccionar la endotoxina con el lisado de
amebocitos de Limulus se libera un cromóforo que es el
responsable de colorear la muestra y que permite la
detección colorimétrica. La cantidad de endotoxina
presente es proporcional a la cantidad de cromóforo
liberado y por tanto a la intensidad de la banda de
absorción responsable del color.
CONCLUSIONES
Existen principios activos que no pueden ser probados mediante el
método de LAL.
La interferencia de los productos puede dar falsos negativos.
El método de LAL es rápido y efectivo para la detección de
pirógenos en un producto farmacéutico.
La sensibilidad del kit tiene que ser comprobada previo al análisis de
un producto farmacéutico.
Previo al análisis del producto, se tiene que realizar una
investigación bibliográfica para conocer el principio activo que se va a
someter a éste tipo de pruebas.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1. Gnass S. Manual de esterilización para centros de salud. Washington:Pan American
Health Org;2008.
2. Rodríguez J , Picazo J. Compendio de microbiología médica. España: Elsevier ;1999.
3. Perdomo R. Ensayo del lisado de amebocitos del Limulus (LAL). Rev Cubana
Farm [Internet]. 2004 Abr [citado 2017 Nov 19] ; 38( 1 ): 1-1. Disponible en:
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-75152004000100008&lng=es.

4. Burguet Nancy, Brito Lázaro César. Validación del método LAL para determinar
endotoxinas bacterianas en el inyectable heparina sódica. Vaccimonitor [Internet].
2012 Dic [citado 2017 Nov 19] ; 21( 3 ): 32-36. Disponible en:
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1025-028X2012000300006&lng=es.