Clase 2 : 09/04/19

Q.F. Fátima Eguía Márquez

 MÉTODOS GENERALES DE OBTENCIÓN
DE PRINCIPIOS ACTIVOS
Se parte de la droga y se realiza un proceso extractivo para aislar los p.a. directamente a
partir de la droga. Hay varios métodos extractivos:

MÉTODOS EXTRACTIVOS

Extracción Destilación E. Por gases E. Con

mecánica disolventes

- Por expresión Discontinúa Continúa

- Con calor
- Con incisiones
- Maceración - Percolación
- Digestión - Soxhlet
- Infusión
- Decocción
 1.- Extracción mecánica

Es una técnica que permite obtener los p.a. disueltos en los fluidos propios de la planta,
os cuales una vez extraídos se denominan jugo. La extracción mecánica se puede realizar.

a) Por expresión: consiste en ejercer una

presión sobre la droga

b) Con calor

c) Mediante incisiones por las que fluyen los

fluidos de la planta
 2.- Destilación

Es una técnica que se basa en la diferente volatilidad de los componentes de la droga, lo

cual permite la separación de componentes volátiles de otros que son menos o nada
volátiles. Se suelen hacer destilaciones por arrastre de vapor o hidrodestilaciones que
facilitan la extracción de p.a. volátiles. La destilación permite obtener, por ejemplo, las
esencias de las drogas. Es un método en el que se utiliza una fuente de calor, por lo que
solo es aplicable s p.a. termoestables.
 3.- E. con gases en
condiciones supercríticas

Se trabaja con dispositivos especiales donde es posible controlar la presión y la

temperatura y se trabaja a presión (P) y temperaturas (T) superiores a la P y T críticas. Los
gases más utilizados son el dióxido de carbono y el butano es bastante peligrosa, ya que
es un gas inflamable. La extracción con gases suele ser muy selectiva y posteriormente es
relativamente sencillo eliminar el gas extractor, pero resulta muy cara y es difícil
encontrar las condiciones óptimas de presión y temperatura.
 4.- Extracción con
disolvente

Consiste en poner en contacto la droga con un disolvente capaz de solubilizar los p.a. Los
p.a. deben pasar de la droga disolvente de manera que se obtenga un extracto líquido.
Posteriormente dicho extracto se puede concentrar eliminando mayor o menor cantidad
de disolvente. La extracción con disolventes es uno de los métodos que se emplea con
más frecuencia para la obtención de p.a. Para que la extracción con disolventes se lleve a
cabo correctamente hay que tener en cuenta diversos factores:

Características de Naturaleza del

Temperatura
la droga disolvente

Tiempo de
contacto entre la Control de la
droga y el difusión celular
disolvente.
 Se sumerge la droga en un disolvente, por lo que la
E. Discontinua o totalidad de la droga contacta con el disolvente
simultánea utilizado para la extracción y la difusión de los p.a. se
producirá en todas las direcciones hasta alcanzar el
equilibrio.

- Maceración: consiste en poner en contacto la droga seca

triturada con el disolvente utilizado para la extracción a Tº
ambiente, manteniéndolo todo en agitación.

- Digestión: es un método extractivo similar a la

maceración pero en el que se trabaja a temperturas más
elevadas.

- Infusión: Se trabaja con un disolvente (agua) a Tº próxima

a la ebullición, en el que introduce la droga que se quiere
extraer y a continuación se deja enfriar a Tº ambiente

- Decocción o cocimiento: se pone en contacto la droga con

el disolvente (agua) y el conjunto se lleva hasta la Tº de
ebullición, manteniendo dicha ebullición durante 15-30
min. Una vez enfriado, se filtra y se exprime el residuo.
 El disolvente utilizado para la extracción se va
E. Continua o
renovando y actúa en una sola dirección. Son métodos
progresiva que consisten en poner en contacto la droga con el
disolvente adecuado y mantener en todo momento el
desequilibrio entre la cc del p.a. en la droga y en el
disolvente.

- Percolación: Este procedimiento se realiza a Tº

ambiente. La droga se coloca en una columna y está en
contacto permanente con el disolvente que gotea por la
parte superior de la columna, atraviesa toda la zona donde
se encuentra la droga con los p.a. los va extrayendo y, por
la parte inferior se recogen los líquidos extractivos que
contienen los p.a.

- Sohxlet: Es un sistema de extracción sólido-líquido en el

que la extracción se realiza en un aparato que consta de un
matraz plano de fondo plano (A), un cuerpo extractor (B) y
un refrigerante(C)
 Condiciones de los Tipos de Extracciones
Extracciones
Temperatura Tiempo Disolventes
Discontinuas
Agua, mezclas hidroalcohólicas,
Maceración Tº ambiente Horas – días
glicerina
Agua, mezclas hidroalcohólicas,
Digestión T > ambiente Horas – días
glicerina
T próx. A ebullición
Infusión 1-2 min hasta 30 min Agua
T menor
Decocción T de ebullición 15 a 30 min Agua

Extracciones
Temperatura Tiempo Disolventes
Continuas
Percolación Tº ambiente Variable Variados
Soxhlet T de ebullición Variable Disolventes orgánicos
 Ventajas e Inconvenientes de las Soluciones
Extractivas

Ventajas Inconvenientes

Baja estabilidad de las soluciones

Buena conservación.
extractivas acuosas.

Fácil utilización y prescripción. Dilución de los p.a.

Posibilidad de estandarizar los productos

Variación del «contexto natural».
obtenidos.

Posibilidad de eliminar los componentes

Presencias de disolventes indeseables.
indeseables de las drogas.
 Preparados

Tinturas: Infusiones: Decocciones: Extractos:

• Son preparaciones • Son líquidos extractivos • Son líquidos extractivos • Son preparados
líquidas obtenidas a T acuosos obtenidos por obtenidos por contacto obtenidos por cc parcial
ambiente mediante la acción poco de la droga con el o total de los líquidos
maceración o prolongada del agua a T disolvente acuoso a extractivos. Podemos
percolación o incluso próxima a la ebullición ebullición durante un distinguir diferentes
por disolución de los sobre las drogas, tiempo relativamente tipos de extractos
extractos secos. La cc seguido de una largo. La cc de p.a. en la según la cc de p.a.
de p.a. de las tinturas maceración que puede decocción es inferior a respecto a la droga
es inferior a la que durar hasta unos 30 la cc en la droga. original y según su
posee la droga. min. consistencia.
 Tipos de extractos
b) Extractos blandos: d) Crioextractos:
a) Extractos fluidos: c) Extractos secos:
Tiene consistencia Poseen una cc de p.a.
Se obtienen por Se obtienen de la droga
líquida y se obtienen superior a la de la droga
evaporación total de fresca congelada, de la
generalmente por original y tienen
disolvente y tienen una que se extraen los p.a.
maceración o consistencia semisólida. mediante nitrógeno
consistencia de polvo.
percolación. El El disolvente suele ser
Presentan una cc muy líquido y luego se añade
disolvente suele ser agua o mezclas
superior de p.a. que la alcohol etílico. Resultan
agua o mezclas hidroalcohólicas. Son ser muy caros, pero
droga original. Son
hidroalcohólicas. poco estables y difíciles muy útiles.
preparados estables.
de manipular.
 Resumen:

Extracto Consistencia Concentración Estabilidad

Poco estable a aire y
Extracto fluido Líquida Similar a la droga
luz
Extracto blando Semisólida Superior a la droga Muy inestable
Estable, algo
Extracto seco Pulverulenta Superior a la droga
higroscópico
Crioextracto Líquida Superior a la droga Estable
 PURIFICACIÓN Y AISLAMIENTO

La purificación y el aislamiento de los p.a. se puede llevar a cabo por métodos

fisicoquímicos no cromatográficos o por métodos cromatográficos.
M. Fisicoquímicos

Incluyen toda una serie de Consisten en la

operaciones como separación de los
sedimentación, componentes de una
decantación, mezcla debido a la

M. Cromatográficos
centrifugación, filtración, diferente velocidad de
precipitación selectiva, elución a través de una
cristalización, partición, fase estacionaria cuando
etc. la mezcla es transportada
por una fase móvil.
 Donde la fase estacionaria es un sólido poroso dispuesto,
formando una capa delgada, sobre una placa metálica o de
1. Cromatografía en
vidrio. Una vez se ha depositado la muestra sobre la placa
capa fina (CCF):
se coloca verticalmente en un recipiente hermético que
Técnicas cromatográficas utilizadas:

tiene el eluyente en el fondo del recipiente.

En la fase móvil es un eluyente líquido pudiendo ser la fase

estacionaria un sólido poroso o un líquido sobre un
2. Cromatografía
soporte inerte. La cromatografía líquida puede ser de dos
líquida :
tipos: en columna (CL clásica) y de alta resolución (HPLC
moderna).

Es una cromatografía gas-líquido que se aplica a sustancias

volátiles o que puedan dar derivados volátiles. La fase
3. Cromatografía
estacionaria, que es un líquido retenido sobre un soporte
de gases (CG) :
sólido, está dispuesta en una columna. La fase móvil es un
gas inerte.
 MARCHA FITOQUÍMICA PRELIMINAR

La Fitoquímica es una disciplina A partir de allí orientar la

científica, donde se inicia la
etapa de la investigación
permitiendo detectar o
determinar cualitativamente los
principales metabolitos
presentes .
extracción, aislamiento, análisis,
purificación, elucidación de la
estructura y caracterización de
la actividad biológica de diversas
sustancias producidas por los
vegetales.
Se puede nombrar de distintas
maneras a este estudio como:
marcha fitoquímica, escreening
fitoquímico, tamizaje
fitoquímico, cribado, etc

Una manera de realizar este

El Extracto Etanólico Total de
proceso es mediante la
una planta puede ser separado
denominada Marcha
o discriminado en diversas
Fitoquímica, que consiste en una
categorías o grupos de
partición líquido-líquido con
sustancias.
solventes.
 MARCHA FITOQUÍMICA PRELIMINAR
El screening fitoquímico de los
extractos vegetales es una secuencia
de aislamientos y purificaciones de
los compuestos presentes en la
muestra vegetal. Permite a su vez
que sus moléculas presentes den
reacciones con determinados
reactivos, afirmando o descartando
su presencia.
Dentro de los metabolitos
secundarios a analizarse se
encuentran: los alcaloides,
esteroles, flavonoides, taninos,
saponinas, cumarinas,
antraquinonas, heterósidos
cardiotónicos,
sesquiterpenolactonas

Marcha
Fitoquímica
• Extracto Etanólico Total: EET.
• Extracto para la determinación de
alcaloides en fase orgánica:
Extracto B.
• Extracto para la determinación de
Esteroles en fase orgánica: Extracto
C.
• Extracto para la determinación de
Flavonoides, Taninos, Saponinas,
Antraquinonas en fase acuosa:
Extracto D.
• Extracto para la determinación de
Cumarinas, Sesquiterpenolactonas,
Heterósidos Cardiotónicos en fase
orgánica: Extracto E.
Una vez efectuada la extracción exhaustiva se
realiza bioensayos específicos encaminados a
demostrar la presencia de sustancias
bioactivas en él y, por otro lado, disponer de
materia parar obtener cromatogramas.
Los procesos de fraccionamiento
se realizan a través de reacciones
cualitativas que determinan la
concentración de los metabolitos
secundarios que contienen las
especies vegetales, así se logró
determinar: alcaloides,
saponinas, flavonoides, taninos,
cumarinas, esteroles, quinonas,
heterósidos cardiotónicos y
sesquiterpenolactonas.
Identificación La identificación se realiza en forma cualitativa.
de alcaloides En el extracto B

• Prueba de Mayer :
Alícuota del extracto B + Reactivo de Mayer.
Resultado Positivo: Precipitado de color
blanco, formando flóculos blanquecinos.

• Prueba de Draggendorff:
Alícuota del extracto B + Reactivo de
Draggendorff2 .
Resultado Positivo: Precipitado de color rojo
ladrillo.

• Prueba de Wagner:
Alícuota del extracto B + Reactivo de Wagner
Resultado Positivo: Precipitado de color
marrón (café).
Identificación En el extracto C se realiza las siguientes
de esteroides pruebas de identificación.

• Prueba de Lieberman-Buchard
1 ml del Extracto C + 0.5 ml Anhídrido acético +
1 gota de ácido sulfúrico (c).
Resultado Positivo: Anillo de color azul
clarísimo en el punto de contacto.

• Prueba de ZACK
1 ml de Extracto C + 2 ml de ácido acético + 2
gotas de Cloruro Férrico (FeCl3) al 20%.
Resultado Positivo: Coloración verde, llevar a
baño maría algunos segundos si no aparece el
color.
 Se colocó una alícuota del extracto D tratado y
Identificación
se realiza las siguientes reacciones de
de flavonoides coloración.

• Prueba de Shinoda
1 ml del Extracto D + 1 ml de Ácido Clorhídrico (HCl) (c) + limaduras
de magnesio.
Resultado Positivo: Espuma abundante y/o coloración roja intensa

• Prueba de Cianidina
1 ml de extracto D + 1 ml de solución de alcohol clorhídrico4 + 2 o 3
trocitos de magnesio.
Resultado Positivo: Coloración rosa a roja.

• Prueba en Medio Alcalino

1 ml de extracto D + gotas de Hidróxido de Potasio (KOH) (5% en
etanol 95°) + 1 ml de solución de alcohol clorhídrico + 2 o 3 trocitos
de magnesio.
Resultado Positivo: Coloración amarillo-naranja.

• Prueba con Cloruro Férrico (FeCl3)

1 ml de extracto D + Cloruro férrico al 2%.
Resultado Positivo: Coloración azul verdosa.
Identificación Se coloca una alícuota del extracto D tratado y
de antocianos se realiza las siguientes reacciones de
coloración.

• Prueba en medio ácido

1 ml de extracto D + 2 gotas de Ácido Clorhídrico (HCl) (c)
agitar y dejar en reposo.
Resultado Positivo: Coloración roja, en caso positivo
adicionar exceso de amoníaco (Color cambia a azul).

• Prueba en la Planta Directa

1 g de planta pulverizada + 10 ml de agua hirviendo, llevar a
ebullición 5 minutos, filtrar y realizar la reacción en Medio
Ácido.
Resultado Positivo: Coloración roja, en caso positivo
adicionar exceso de amoníaco (Color cambia a azul).
Identificación de Se coloca una alícuota del extracto D
tratado y se realizó la siguiente
antraquinonas reacción de coloración.

• Reacción de Borntrager modificada por

Krauss:
 Tomar una alícuota del extracto D.
 Adicionar 5 ml de Ácido Sulfúrico 1 N.
 Llevar a ebullición por 10 minutos.
 Separar la fase orgánica (parte superior).
Adicionar 1 ml de hidróxido de amonio.
Observar la coloración rosa de la capa
acuosa (parte inferior).
 Identificación Se coloca una alícuota del extracto D tratado y
de taninos se realizó las siguientes reacciones de
coloración.

• Prueba con Cloruro férrico 49

1 ml de extracto D + 2 gotas de Cloruro férrico al 2%. Resultado
Positivo: Coloración azul si son hidrolizables, y coloración verde si no
son hidrolizables.

• Prueba Gelatina salada

1 ml de extracto D + una cantidad igual a la mitad de la alícuota de
reactivo de gelatina salada5 .
Resultado Positivo: Precipitado blanco en forma de flóculos.

Diferenciación de taninos hidrolizables y no hidrolizables:

• Prueba Stiasny • Prueba Ácido Clorhídrico (HCl)

1 ml de extracto D + una cantidad de
formol clorhídrico6 .
Resultado Positivo: Taninos condensados
precipitan en grandes copos de color
rojizo.
concentrado
Llevar a ebullición 1 ml del extracto D +
gotas de Ácido Clorhídrico (HCl) por 10
minutos.
Resultado Positivo: Precipitado y/o rojo.
Identificación Se coloca una alícuota del extracto D tratado y
de saponinas se realizó las siguientes reacciones de
coloración.

• Prueba con agua

1 ml del extracto D + 1 ml del agua. Agitar.
Resultado Positivo: Observar la presencia de espuma que permanece
mínimo por 1 minuto.

• Prueba Hemólisis
1 ml del extracto D + 2 gotas de sangre.
Resultado Positivo: Observar al microscopio Hemólisis.

• Prueba en la Planta Directa con Agua

1 g de planta pulverizada adicionar agua y agitar.
Resultado Positivo: Observar la presencia de espuma que permanece
mínimo por 1 minuto.

• Prueba en la Planta Directa con Hemólisis

1 g de planta pulverizada colocar sobre una placa agar sangre. Dejar
por un período de 12 a 24 horas. Resultado Positivo: Observar la
presencia de un halo de hemólisis.
Identificación de Se colocó una alícuota del extracto E
tratado y se realizó las siguientes
cardiotónicos reacciones de coloración.

• Prueba Baljet
1 ml del extracto D + 0.5 ml del reactivo de Baljet y unas gotas de
hidróxido de potasio 10% en etanol.
Resultado Positivo: Color rojo naranja inestable.

• Prueba Kedde
1 ml del extracto D + 0.5 ml de reactivo de Kedde añadir gotas de
KOH 10% en etanol.
Resultado Positivo: Color rojo – púrpura muy estable.

• Prueba Raymond – Marthoud

1 ml del extracto D + 0.5 ml de reactivo de Raymond-Marthoud ,
añadir gotas de KOH al 10% en etanol
Resultado Positivo: Color violeta fugaz.