MICROSCOPIA

MICROSCOPIA, PELOS Y FIBRAS

M.C. MARÍA DEL REFUGIO TORRES PÉREZ
Propósito
ANALIZAR LOS ANTECEDENTES HISTÓRICOS DE LA
MICROSCOPÍA EXAMINANDO EL SURGIMIENTO,
EVOLUCIÓN Y CARACTERÍSTICAS DEL MICROSCOPIO
PARA COMPRENDER SU PROGRESO.
Microscopio óptico “Actividades en clase/tarea”
1. Evolución del microscopio (15 puntos determinantes en el
proceso) libro: Lo malo y lo feo de los microbios
2. Partes del microscopio y función de cada una de ellas.
3. Limpieza y entrega del microscopio después de usarlo en el
laboratorio
4. Servicio y mantenimiento del microscopio
5. Diferenciar el sistema óptico, el sistema mecánico y el sistema
eléctrico
6. Calibración del microscopio óptico.
MICROSCOPÍA
CONJUNTO DE MÉTODOS QUE SE UTILIZAN PARA PODER
VISUALIZAR OBJETOS MUY PEQUEÑOS QUE ESTÁN FUERA DEL
ALCANCE DE RESOLUCIÓN DEL OJO HUMANO. LA
MICROSCOPÍA UTILIZA INSTRUMENTOS ESPECIALES COMO LA
LUPA Y EL MICROSCOPIO (DEL GRIEGO MIKROS = PEQUEÑO,
SKOPEIN = OBSERVAR), QUE PERMITEN MAGNIFICAR EL
TAMAÑO DE ESTRUCTURAS IMPERCEPTIBLES
Medidas de longitud utilizadas en microscopia

.
Espectro
electromagnético
Tipos de microscopios
Microscopios según el sistema de iluminación
1) Microscopio óptico
2) Microscopio electrónico
3) Microscopio de luz ultravioleta
4) Microscopio de luz polarizada
5) Microscopio de fluorescencia
Tipos de microscopios
Microscopios según el número de lentes
1) Microscopio simple (lupa)
2) Microscopio compuesto (ocular-objetivo)

Microscopios según la transmisión de la luz

1) Microscopio de luz transmitida
2) Microscopio de luz reflejada
Tipos de microscopios
Microscopios según el número de oculares
1) Microscopio monocular
2) Microscopio binocular
3) Microscopio trinocular

Microscopios según la configuración de los elementos

Microscopios digitales
Microscopio estereoscópico (fundamento) tarea
Tipos de microscopios
Otros tipos de microscopios
1) Microscopio confocal
2) Microscopio de campo oscuro
3) Microscopio de contraste de fases
Potencia de un microscopio
1. Poder de magnificación (número de aumentos) Ocular x objetivo
2. Resolución (capacidad de discernir claramente dos puntos del objeto)
3. Poder de penetración de la luz (luz transmitida o luz reflejada)

¿Cuántas veces se aumenta el tamaño real de un objeto en un

microscopio óptico del laboratorio de Criminalística?
¿Cuál es la capacidad de resolución de un microscopio óptico del
laboratorio de Criminalística?
El objetivo es el elemento más importante y complejo del
microscopio óptico número de aumento y su apertura numérica

En el objetivo se produce la
mayor parte del aumento
aportado por el microscopio.
Su complejidad radica en el hecho
de que para cumplir con su
función necesita distintas lentes
de alta calidad y precisión.

La imagen obtenida una vez los rayos de luz han atravesado el

objetivo se denomina imagen real. Estos rayos de luz atraviesan a
continuación el ocular, dando lugar a una imagen virtual que es
observada por el usuario del microscopio.
 Cuando la imagen se forma del lado contrario a la ubicación
del objeto se denomina real.

Refracción de la luz

Cuando la imagen se forma del mismo lado del objeto se

denomina virtual.
La distancia focal de una
lente es la distancia
entre el centro óptico de
la lente y el foco. La
inversa de la distancia
focal de una lente es la
potencia, y se mide en
dioptrías.
La apertura numérica de un objetivo
Este parámetro se
puede entender como el
tamaño del cono a
través del cual llega luz
al objetivo.
Los objetivos con una
apertura numérica baja
tienen un cono de
entrada de luz más
pequeño que los
objetivos con una
apertura numérica alta. A mayor apertura numérica mayor resolución
Diferencia entre objetivos secos y
objetivos de inmersión
Los objetivos secos tienen una
apertura numérica baja, no es
posible fabricar un objetivo seco con
una apertura numérica superior a
0.95.
Con la ayuda de los aceites de
inmersión es posible alcanzar una
apertura numérica alrededor de 1.4.
Esto supone una mejora sustancial
en términos de resolución obtenida.
Los máximos aumentos se obtienen Objetivo seco Objetivo de inmersión
mediante objetivos de inmersión.
 En el caso de los objetivos
Medios de inmersión de inmersión existe un
código de colores para
indicar el medio de
inmersión que debe
utilizarse.
Datos de un objetivo
•Objetivos del microscopio
https://www.youtube.com/watch?v=zWlz7SJFQz8

•Manejo y uso del microscopio

https://www.youtube.com/watch?v=kNPucKW5m8o
Nombre del fabricante: Zeiss, Olympus, Leica, Nikon, etc.

Correcciones ópticas: Indicaciones acerca del tipo de lentes utilizadas en el objetivo para corregir las aberraciones
ópticas. Existe una gran variedad de opciones en este punto, la nomenclatura específica puede variar en función del
fabricante.

Aumento: Capacidad de aumento del objetivo, es decir, relación entre los tamaños de la imagen real y el objeto real.

Apertura numérica: Indicación del tamaño del cono de luz incidente al objetivo.

Longitud del tubo: Este número indica la distancia en milímetros que debe haber entre el objetivo y el ocular para
que la imagen se forme correctamente. El símbolo infinito se utiliza para indicar que los rayos son completamente
paralelos al salir del objetivo.

Espesor del cubreobjetos: Este número indica el espesor en milímetros del cubreobjetos que debe utilizarse para
minimizar las aberraciones ópticas.

Código de color: Mediante un código de colores suele indicarse el aumento proporcionado por el objetivo. La
mayoría de los fabricantes siguen el estándar incluido en la siguiente sección de este artículo. Adicionalmente, en el
caso de los objetivos de inmersión, un segundo color indica el medio de inmersión que debe utilizarse.
La máxima apertura numérica de los objetivos
Está limitada a valores de aproximadamente 1.50 (utilizando objetivos de inmersión). Por este
motivo, el máximo aumento útil que se puede obtener con un microscopio óptico es 1500 (1.50
x 1000).
Este es un dato importante porque existen microscopios que se anuncian con un aumento de
2000 x. Hay que tener en cuenta que cualquier valor de aumento superior a 1500 se refiere a
aumento vacío y es por lo tanto inútil en cuanto a la información que aporta.
POTENCIA DE UN MICROSCOPIO
PODER DE MAGNIFICACIÓN PODER DE RESOLUCIÓN

El aumento del microscopio está determinado El poder de resolución de un microscopio esta

por el producto del aumento del objetivo y el en función de la apertura numérica. Esta
aumento del ocular. depende del semi-angulo de apertura de la
lente y del índice de refracción.
(10 x) (4 x) = 40 x
El índice de refracción puede aumentarse
(10 x) (100 x) = 1000 x colocando una capa de aceite de inmersión
(aceite de cedro).
El uso de luz monocromática de menor
longitud de onda (violeta, azul, UV) produce
un aumento del poder de resolución.
¿Cómo mejorar la resolución de un microscopio?

APERTURA NUMÉRICA

En un objetivo del
microscopio se define
como la medida de su
capacidad para colectar la
luz y poder examinar los
detalles del espécimen.
Con el fin de aumentar la
apertura adecuada y el poder de
resolución del microscopio, el
condensador genera un rayo
cónico de iluminación en el lado
de la muestra, permitiendo que
el objetivo pueda colectar los
rayos de luz, resultando amplios
ángulos de difracción en el
aumento de la resolución del
sistema de microscopio.
 1) Microscopio óptico
En el microscopio óptico la muestra es
iluminada mediante luz visible. Esto
significa que existe un foco de luz
apuntando hacia la muestra. Esa misma luz
es conducida a través del objetivo y del
ocular hasta llegar a formar la imagen en el
ojo del observador. Este es el tipo de
microscopio más habitual pero su
resolución está limitada por la difracción
de la luz. El aumento máximo que se puede
obtener con este tipo de microscopio
alcanza alrededor de 1500x.
2) Microscopio electrónico

En el microscopio electrónico la muestra

no es iluminada con luz sino que se
utilizan electrones. Los electrones
impactan contra la muestra dentro de
una cámara de vacío. Existen diferentes
tipos de microscopio electrónico pero
su principio de funcionamiento se basa
siempre en capturar los electrones
dispersados u omitidos por la muestra y
así poder reconstruir una imagen.
Aumento del microscopio electrónico
Debido a la difracción de la luz, los microscopios ópticos
están limitados a un aumento máximo de 1500x. En
términos físicos esta limitación es una consecuencia de la
longitud de onda de la luz.
En el caso de los microscopios electrónicos, la muestra no
es iluminada con luz sino con electrones. Este permite
iluminar la muestra con longitudes de onda 100000 veces
más pequeñas que en el caso del microscopio óptico. Esto
se traduce en unos aumentos muy superiores que pueden
llegar a 10,000,000x.
 Microscopio electrónico de
TIPOS barrido (MEB):

Microscopio electrónico de Produce una imagen que da una

transmisión (MET):
Se encarga de proyectar
electrones a través de una fina
capa de material o tejido a
observar reflejando una imagen
sobre una pantalla fosforescente.
impresión de ser en tres
dimensiones. Utiliza tres o dos
puntos donde llegan los
electrones de la muestra que
escanean la superficie del
espécimen a observar.

El microscopio electrónico de transmisión Zeiss EM910 opera a

80kV. Está equipado con una cámara digital Slow Scan CCD-
Camera for TEM, 1024×1024, TRS.
 3) Microscopio de luz ultravioleta
Iluminan la muestra, con luz UV 200 nm por lo
tanto puede alcanzar una resolución de 100 nm.
Sus resultados son registrados en fotografías. La
muestra no se puede observar directamente a
través del ocular porque la luz ultravioleta
puede dañar la retina.
Sirve para detectar ácidos nucleicos y proteínas
mediante longitudes de ondas específicas. Los
elementos ópticos de estos microscopios están
hechos con cuarzo, fluorita o sistemas de
espejos iluminados.
4) Microscopio de luz polarizada

También conocido como microscopio

petrográfico. Este microscopio es en
realidad un tipo de microscopio
óptico al que se la han añadido dos
polarizadores. Esto significa que la
onda de luz utilizada para observar la
muestra tiene una dirección de
oscilación concreta. Este tipo de
microscopio es muy útil para
observar estructuras cristalinas de
rocas y minerales.
 Microscopio de fluorescencia

Utiliza las propiedades de fluorescencia para

generar una imagen de la muestra. Este
microscopio permite observar sustancias que
emiten luz propia cuando son iluminadas con
una longitud de onda determinada. Para ello
la muestra es habitualmente iluminada con
una lámpara xenón o con una lámpara de
vapor de mercurio. Estos microscopios
incorporan además filtros de luz para aislar la
luz correspondiente a la muestra.
Microscopios según la transmisión de la luz

Dos tipos básicos de microscopio óptico según el camino seguido por

la luz hasta llegar el objetivo: microscopios de luz transmitida y los
microscopios de luz reflejada.
Luz transmitida: Luz reflejada:

Luz que pasa a través de un La luz que incide en un

cuerpo semiopaco. Se da objeto se difunde en él y
cuando el foco lumínico se finalmente nuestros ojos y
sitúa en la cara del objeto cerebro elaboran la imagen
opuesta al observador. del objeto.
 1) Microscopio de luz transmitida

En este tipo de microscopio la luz atraviesa la

muestra. Para esta clase de microscopios es
necesario preparar la muestra cortándola en
láminas muy finas. La muestra se ilumina desde
debajo la platina. La preparación de la muestra
hace que esta sea semitransparente y parte de
la luz pueda atravesarla y llegar al objetivo para
ser observada posteriormente a través del
ocular. En general este es el sistema de
iluminación más utilizado entre los microscopios
ópticos.
 2) Microscopio de luz reflejada

En este caso la luz ilumina la

muestra y parte de esta es reflejada
y dirigida al objetivo. De este modo
es necesario iluminar la muestra
desde la parte superior de la platina.
Este tipo de microscopía es utilizada
para examinar materiales opacos
como pueden ser estructuras
metálicas, materiales cerámicos, etc.
 Los microscopios estereoscópicos
(permiten observar la
Tienen objetivos de 2 o 4 aumentos,
muestra en tres
dimensiones) son combinados con lentes oculares de entre
siempre de luz 5 y 20 aumentos. En consecuencia, el
reflejada. aumento total está comprendido entre
10 y 80 aumentos

Tarea:
Explica el fundamento del microscopio
estereoscópico.
 Microscopio confocal
Astro glía

Microscopio de fluorescencia. En
lugar de iluminar la muestra de
forma global se ilumina punto a
punto de forma sucesiva y se Microscopio confocal: Zeiss LSM800 con Airyscan

reconstruye la imagen al final del

proceso. Este proceso de escaneado
de la muestra es similar al que se
produce en los microscopios
electrónicos de barrido. Este tipo de
microscopio fue inventado por
Marvin Minsky en 1957. Unión neuromuscular
 Microscopio de campo oscuro

Esta técnica de microscopía consiste en

iluminar la muestra oblicuamente. De este
modo los rayos de luz que llegan al objetivo
no provienen directamente del foco de luz
sino que han sido dispersados primero por
la muestra. Permite ver muestras que de
otro modo no serían visibles debido a su
transparencia. También tiene la ventaja que
no requiere teñir la muestra para aumentar
su contraste y poder observarla.
Microscopio de contraste de fases
La luz viaja a distintas velocidades dependiendo
del medio de propagación. Esta propiedad es
utilizada en el microscopio de contraste de fases ya
que la luz atraviesa la muestra con distintas
velocidades en distintas secciones. Este efecto es
amplificado para generar la imagen de la muestra.
Mediante esta técnica no hace falta utilizar tintes y,
por lo tanto, pueden observarse células vivas. El
microscopio de contraste de fases fue inventado
por Frits Zernike en 1932 y recibió por ello el
premio Nobel de física en 1953.
Bibliografía
1. Schuchner, E. y Pérez Lloret, A. (1984). CITOHISTOLOGÍA BÁSICA. CITOBIOLOGIA. Argentina:
Panamericana.
2. Bruno P. Kremer MANUAL DE MICROSCOPIA Edit Omega 2012.