CALIBRACIÓN

2009
CALIBRACIÓN

Es evaluar la capacidad de
medida de los
instrumentos con objeto
de garantizar la
comparabilidad de los
resultados con los
obtenidos por otros
laboratorios.
 TIPOS DE CALIBRACIÓN

Calibración directa o instrumental

Calibración indirecta o analítica

Función de calibración analítica:
– Señal analítica = ƒ (concentración o cantidad
de analito)
intervalo definido
no puede extrapolarse
 Blanco, Control
La muestra blanco contiene todos
los componentes de la muestra
excepto el analito, y es sometida a
todos los pasos del proceso analítico
a que es sometida la muestra.
La muestra control tiene un
contenido definido de analito, que se
somete al procedimiento analítico,
junto con la muestra y blanco,
controla interferencias.
 CALIBRACIÓN INSTRUMENTAL
vs CALIBRACIÓN METODOLÓGICA

Instrumental

Metodológica
 Instrumental

Se refiere al correcto funcionamiento de un instrumento

analítico o un equipo de medida.

Metodológica

Conlleva la caracterización de la respuesta de un

instrumento analítico de acuerdo a las propiedades de un
analito determinado o de un conjunto de ellos.
 Instrumental Metodológica

Chequear el Caracterizar la respuesta

Definición funcionamiento correcto analítica de un instrumento en
de instrumentos función de las propiedades de
un analito

Método Analítico. Obtención

Objeto Aparatos o instrumentos de una relación inequívoca
entre la señal y las
características del analito

Patrón No requerido Requerido

Información Analítica Analítica

No analítica
 Instrumental Metodológica

Instrumento:
Polarografía
Cualitativo Espectrofotómetro
E1/2
Parámetro:(max)

Absoluto
Gravimetría

Estequiométrico
pH-metro Volumetría
Cuantitativo Disoluciones
reguladoras Relativo
Análisis Instrumental
GRÁFICAS DE CALIBRADO EN ANÁLISIS INSTRUMENTAL

LOS RESULTADOS OBTENIDOS EN

ANÁLISIS INSTRUMENTAL SON
EVALUADOS MEDIANTE MÉTODOS DE
CALIBRACIÓN

PROCEDIMIENTO DE CALIBRACIÓN EN ANÁLISIS INSTRUMENTAL

PREGUNTAS ESTADÍSTICAS
GRÁFICAS DE CALIBRADO EN ANÁLISIS INSTRUMENTAL

PROCEDIMIENTO DE CALIBRACIÓN EN ANÁLISIS INSTRUMENTAL

El Químico Analítico elige

adecuadamente un conjunto de
patrones de concentración
perfectamente conocida

Este conjunto de referencias analíticas

(patrones) son medidas en el
instrumento analítico en las mismas
condiciones experimentales que las
que se emplearán en la muestra real.

La concentración de analito en una

muestra real se obtiene por
interpolación.
GRÁFICAS DE CALIBRADO EN ANÁLISIS INSTRUMENTAL

PREGUNTAS ESTADÍSTICAS

¿Qué tipo de gráfica podemos emplear (recta, curva…)?

¿Qué recta es la mejor?¿Qué recta representa mejor mis

resultados experimentales?

Si se admite que la representación es lineal ¿Qué errores y límites

de confianza se establecen para la ordenada y para la pendiente?

¿Qué errores y límites de confianza se establecen para la la

determinación analítica de la concentración del analito?

¿Cuál es el límite de detección del método?

 ¿Qué significa Calibración?

“It is the process by means the answer of a

measurement system is transformed or
expressed in terms of a quality or quantity of
interest”.
Kowalski et al.
 TIPOS DE CALIBRACIÓN

UNIVARIANTE

Regresión lineal No Ponderada

y = a + bx Ponderada

Regresión polinómica

y = a + bx + cx2 + dx3 +….

Polinómica ortogonal

y = a + b(x - ) + c(x - 1) (x - 2) +….

 TIPOS DE CALIBRACIÓN

MULTIVARIANTE

Regresión lineal múltiple

y = a + b1x1 + b2x2 + ….

Regresión por componentes principales

Polinómica ortogonal
 TIPOS DE CALIBRACIÓN

MÉTODOS ABSOLUTOS
MÉTODOS RELATIVOS

El modelo es conocido, por lo tanto

puede ser evaluado sin medidas El modelo no es conocido y debe ser
comparativas. El modelo se basa en estadísticamente estimado
principios físicos y químicos y
constantes
 Se ha llevado a cabo un conjunto de observaciones (x,y). Algunas
réplicas para el mismo valor de x conducen a un valor medio de y

ASPECTOS CRÍTICOS

Los patrones de calibración deben cubrir todo el intervalo

de concentraciones que se empleen en el análisis.

Es necesario incluir en la curva de calibrado un valor para el

blanco.

Todos los errores se cometen en la medida de la y (señal)

Se asume una distribución normal/gaussiana en las

medidas de la señal.
 ETAPAS A SEGUIR

Seleccionar un modelo matemático (ej. Lineal)

DESPUÉS DE LA REPRESENTACIÓN INICIAL DE LOS DATOS OBTENIDOS)

Obtener los parámetros verdaderos del modelo

Validar el modelo
(análisis de la varianza o análisis de residuos)

Calcular los límites de confianza para los parámetros del

modelo, la función de regresión y el resultado analítico.
CORRELACCIÓN Y REGRESIÓN

CORRELACCIÓN: NO conlleva relación funcional

(NO MODELO)

Mide el grado de asociación de variables

(indicado a través de un coeficiente de correlación)

REGRESIÓN: SÍ conlleva relación funcional (MODELO)

El interés radica en determinar

una variable dependiente
a través de los parámetros de regresión
obtenidos por el modelo.
CORRELACIÓN Y REGRESIÓN

Calibración Metodológica, en un amplio sentido, trata de

describir las relaciones cuantitativas entre dos variables.

En particular, la calibración está interesada en cómo

varía la señal (variable dependiente) con la
concentración (variable independiente)

Las técnicas estadísticas que estudian la calibración

se denomina Análisis de Regresión

El principal objetivo del Análisis de Regresión

es comprender qué modelo matemático es adecuado
con fines de descripción o de predicción
Coeficiente de correlación lineal: su expresión

 x i  x  y i  y 
r i
12
 2  2 
   x i  x     y i  y   
 i  i 

r
t n2
1 r 2
Coeficiente de correlación lineal: su significado
 El límite de detección y de determinación
Señales Interpolando en la recta Concentraciones

Límite de Detección
yLOD  yB  3sB (LOD)

y LOQ  y B  10sB Límite de Cuantificación

(LOQ)

Límite de Detección
y LOD  a  3s y x (LOD)

y LOQ  a  10s y x Límite de Cuantificación

(LOQ)
 Interpretación estadística del límite de detección

Error  decir que SI hay analito cuando NO hay analito: FALSO POSITIVO

Error  decir que NO hay analito cuando SI hay analito. FALSO NEGATIVO
PROTOCOLOS DE CALIBRACIÓN: el concepto

Indirecto o de Calibración externa: las muestras contienen un cantidad

desconocida del analito y los patrones tienen una cantidad
perfectamente conocida de analito. Los patrones contienen al analito
pero éste es EXTERNO al analito de la muestra

Adiciones Patrón o Calibración Interna: el analito en sí mismo es

usado para la calibración interna. El analito de la muestra es empleado
en el protocolo de calibración.

Patrón Interno : previo a la determinación se añade una cantidad

conocida de una sustancia similar al analito
(patrón interno)
PROTOCOLOS DE CALIBRACIÓN: adiciones estándar

El empleo más habitual del Método de las Adiciones Patrón es

para eliminar la existencia de errores sistemáticos generados
por el efecto de matriz por parte de la muestra.

En este sentido los efectos de matriz son

igualados en los patrones al igual que existen
en la muestra.
PROTOCOLOS DE CALIBRACIÓN: adiciones estándar

 
S y x 1 y 2 
S xE    2 2 
b  n b   xi  x  
 i 
 Pendiente Calibración Externa=
Pendiente Adiciones Patrón
No hay efectos de matriz

Pendiente Calibración Externa <

Pendiente Adiciones Patrón

Sí hay efectos de matriz: calibrado

interno revela exaltación de la
sensibilidad

Pendiente Calibración Externa>

Pendiente Adiciones Patrón
Sí hay efectos de matriz: calibrado
interno revela inhibición de la
sensibilidad
PROTOCOLOS DE CALIBRACIÓN: adiciones estándar

Dos diseños incorrectos en Calibración Interna

Intervalo de concentraciones demasiado Intervalo de concentraciones demasiado

grande pequeño
Protocolos de Calibración Método de las adiciones estándar

Cada muestra requiere su propia calibración.

Se necesitan grandes cantidades de muestra.

La automatización es difícil.

En términos estadísticos es menos preciso porque la

determinación se realiza por extrapolación.
PROTOCOLOS DE CALIBRACIÓN: patrón interno

Este método corrige los errores aleatorios y sistemáticos.

Se emplea cuando existen pérdidas incontroladas en la

cantidad analizada (inyección en Cromatografía de Gases)

Patón Interno (IS): características

Debe presentar compatibilidad con las muestras y con los patrones

(solubilidad).
Características físicas y químicas similares al analito.
Respuesta analítica distinguible del analito.
PROTOCOLOS DE CALIBRACIÓN: patrón interno

Un compuesto similar al analito es añadido en una cantidad

perfectamente conocida a la muestra y a los patrones.

Patón Interno (IS)

El patrón interno debe presentar un comportamiento idéntico

al analito en todas las etapas metodológicas críticas.
Debe añadirse tan pronto como sea posible en el
procedimiento analítico.
PROTOCOLOS DE CALIBRACIÓN: patrón interno

Una muestra es inyectada

después de haberse inyectado
individualmente los analitos.

Una muestra es inyectada,

previa adición del IS, después de
haberse inyectado
individualmente los analitos con
previa adición de IS.
PROTOCOLOS DE CALIBRACIÓN: patrón interno

Una muestra es inyectada,

previa adición del IS, después de
haberse inyectado
individualmente los analitos con
previa adición de IS.

Señales Normalizadas
Tiempo
Analito Área
retención
1 tN1 = t1 / tIS AN1 = A1 / AIS
2 tN2 = t2 / tIS AN2 = A2 / AIS
3 tN3 = t3 / tIS AN3 = A3 / AIS
 Rectas de Regresión para comparar Métodos Analíticos

La validación de un nuevo método frente a otro conocido de

referencia.

El objetivo principal será de nuevo el hallazgo de errores

sistemáticos.

Se utiliza este método cuando el intervalo de concentraciones

es muy amplio (como ocurre en Análisis Instrumental)

Si las concentraciones son pequeñas puede emplearse los

test estadísticos.
Rectas de Regresión para comparar Métodos Analíticos
Si cada muestra proporciona el mismo resultado por ambos
métodos, la recta de regresión tendrá como características:

Ordenada (a)=0

Pendiente (b)=1

Coeficiente de
correlación (r)=1

Si 0 está incluido en a ± t Sa NO HAY ERROR

SISTEMÁTICO
Si 1 está incluido en b ± t Sb NO HAY DIFERENCIAS
DATOS ANÓMALOS EN REGRESIÓN

Residuos uniformes en el tamaño a medida

que aumenta el valor predicho de y por el
modelo

Residuos aumentan a medida que aumenta el

valor predicho de y por el modelo

Indican un gráfico de
regresión ponderada

Residuos son primero negativos, después

cortan al cero y finalmente aumentan

Indican un gráfico curvilíneo

Residuos uniformes en el tamaño a medida

que aumenta el valor predicho de y por el
modelo (excepto un dato anómalo)