Eduardo Avellaneda, Yuranis Leal, Eduardo Varela

1
1.Introducción
2.¿Qué es cromatografia?
3.
4

2
Cromatografía
Preparativa

3
Técnica para la elución de
cantidades significativas
(mayor a 0.1 g) de
componentes puros usando
columnas de gran diámetro.

4
 Peso requerido de la
Objetivo Usos
muestra (mg)
Identificación tentativa Métodos instrumentales <1

Métodos instrumentales,
confirmación de la
Identificación positiva 1-100
estructura por reacciones
químicas
Usar como estándar Síntesis y análisis
>100
analítico rigurosos
* Tomado de; Introduction to Modern Liquid Chromatography, L.R. SNYDER

5
* Tomado de; Introduction to Modern Liquid Chromatography, L.R. SNYDER
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El sistema menos sofisticado y de
menor costo se puede usar
satisfactoriamente Bombas, sistemas de
muestreo y detectores
eficientes
Columnas grandes; 2 cm
• 100 mL/min de suministro de disolvente Depósitos de solventes >2L
.

• No alta presión; 200 bar

• Bombas reciprocas Altas tasas de Bombeo

Salida continua de
solvente
• Las pulsaciones de las bombas que afectan las
. líneas de base del detector no son una desventaja.
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 Sensibilidad
Concentraciones
Picos superpuestos
¿Columna sobrecargada o respuesta del detector?

Detector UV
 Resolución Incompleta de los dos componentes
de interés

Detector de índice de refracción (RI)

Excelente separación
* Tomado de; Introduction to Modern Liquid Chromatography, L.R. SNYDER 8
 Detector UV
Muestra Impura, con dos compuestos isómeros.

Recuperación de los componentes deseados del

39% del peso de la muestra inyectada en el “Pico
principal 1”

El 23% del material se eluyó después del “Pico

principal” cuando se muestra componentes muy
pequeños
* Tomado de; Introduction to Modern Liquid Chromatography, L.R. SNYDER

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 Detectores UV y RI

 Detector RI; Picos (2) y (3) Isómeros

deseados, representan 66% en peso de la
muestra inyectada

Detector UV; Pico (1) Impurezas, con

tiempo de retención similar al de los
constituyentes deseados

* Tomado de; Introduction to Modern Liquid Chromatography, L.R. SNYDER

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Los efectos de extra columna no son un problema con las columnas de
gran diámetro utilizadas en LC preparativa.

El detector no debe estar hecho con tubos de diámetro muy bajo

Limita severamente el flujo de la fase móvil

Causa una contrapresión considerable a los

caudales necesarios para las columnas de gran
diámetro. 11
Las alícuotas de muestra grandes usadas en LC
preparativa pueden introducirse
convenientemente con una válvula, sin
interrumpir el flujo de la fase móvil durante la
separación.
Aislar uno o unos
La recolección manual de fracciones pocos componentes
separados
Colectores automáticos de fracciones

Aislar una gran cantidad de componentes en una sola

ejecución o cuando se usan corridas repetitivas para aumentar 12
el peso de uno o más componentes
.