Cromatografía de Gases

Universidad Nacional de Colombia - sede Bogotá

Facultad de Ciencias
Departamento de Farmacia
Asignatura: Análisis Instrumental.

Harold Betancourt Pérez- 25151536

Jorge R. Ojeda Revelo - 25151762
Objetivos

General

● Entender el funcionamiento de un cromatógrafo de Gases acoplado a

un detector FID, con variación en el sistema de inyección split.

Específicos

● Interpretar el cromatograma obtenido y analizar la Aptitud del

Sistema.
● Realizar una curva de Calibración en la cual se pueda interpolar el
Analito de interés y así lograr ver su concentración, con el método de
Adición de E.E.
Procedimiento

Diagrama 1. diagrama de flujo

describiendo el proceso paso a
paso usado en C-G.
 Condiciones cromatográficas Gradiente(CCD) (tablas 1-5)
Datos Reservorio

Volumen de inyección

Tabla 1 (CCD)

Gas-Carrier

Carrier He

Presión 137 Kpa

flujo total 31.6 mL/min

flujo columna 1.36 mL/min

Flujo de purga 3 mL/mim

imagen tomada de. Albertciencias.blogspot.com
Tasa split 20
Imagen 1. esquema general de cromatógrafo de
gases. Tabla 2 (CCD)
Datos Columna

T. Max Columna 310 °C

Largo 30 m
Condiciones cromatográficas
Gradiente (CCD) Diámetro interior 0.25mm

Grosor del film

Sistema de
inyección Tabla 4 (CCD)
Modo de Split Detector (FID)
inyección
Temperatura 250°C
Temperatura 210 ° C
(Make up) N2 Flujo 30 mL/min
Tabla 3 (CCD)
H2 Flujo 40 mL/min

Aire Flujo 400 mL/min

Tabla 5 (CCD)
Datos
Grupo Cuantificación Rango de ppm Rampa de T (°C)

G5 Ad. E.E. Tolueno 200-1000 Gradiente

Tabla 6. Condiciones para la curva de calibración

Características del Tolueno

Pureza 99.6%

Peso Molecular 92.14 g/mol

Densidad 0.87 Kg/L

Tabla 7. Características del estándar a utilizar

Datos

Volumen a tomar de E.E.( ) Sm del E.E. [ppm] V.Final (mL)

20.7 9000 2

Tabla 7. Sistema de cuantificación, solución Madre.

Datos

[ppm] V mL sm.EE VmL ae VmL M V mL (final) Área (uv)

E.E.

M ------ -------------- 0.870 0.130 1 126634

M+200 0.022 0.848 0.130 1 183214

M+400 0.044 0.826 0.130 1 239559

M+600 0.066 0.804 0.130 1 300572

M+1000 0.111 0.759 0.130 1 432996

Tabla 8. Construcción de curva de calibración

Datos

split proporción Área

5a1 0,05 1003475

10 a 1 0,1 550375

20 a 1 0,2 303695

50 a 1 0,5 140271

100 a 1 1 85423

Tabla 9. variación de sistema de inyección.

 Datos
Aptitud del sistema: Por Gradiente 70ºC (0.2min)→100ºC a 10ºC/min
Inyección HETP(USP) Tailing Number of Theoretical Resolution(USP) Capacity Separation Áreas
Factor Plate(USP) Factor(k') Factor

1 6,555 1,314 22882 7,998 0,426 2,800 300572

2 6,547 1,308 22913 8,015 0,457 2,580 302706

3 6,286 1,35 23863 8,028 0,457 2,578 301867

Promedio 6.463 1.324 23219 8.044 0.446 2.652 301715

SD 0.124 0.0185 455.3 0.0327 0.0146 0.104 877

%CV 1.91 1.39 1.95 0.40 3.27 3.92 0,294

Tabla 10. descripción de la aptitud del sistema, triplicado de M3.

Muestra de Cálculos

Adición de Estándar Externo- Tolueno

Concentración Real de Solución Madre (Tolueno) con volumen tomado:

Cálculo Teórico:
 Muestra de Cálculos

Interpolación de muestra
problema en Curva de
Calibración
Concentración de muestra problema según volumen tomado:
Ecuación de la recta
Obtenida :

Y = 313,77 X + 116514
Resultados

Gráfica 1. Cromatograma obtenido en gradiente con adición de patrón externo (M4 tolueno)
Resultados

Gráfica 2. Cromatograma obtenido en gradiente para medicion de sistema de aptitud, triplicado

en M3
Resultados

Gráfica 3. Cromatograma obtenido en gradiente Sp5 con adición de estándar externo (tolueno)
Resultados

Gráfica 4 Cromatograma obtenido en gradiente Sp100 con adición de estándar externo

(tolueno)
Resultados

Gráfica 5. Variación de split vs área Gráfica 6. Curva de calibración, concentración de

MP.
 Análisis de Resultados

Acetato de Etilo: Compuesto con polaridad elevada, esto le

limita la unión a la fase estacionaria y por ende tendrá el
menor tiempo de retención (Tr).

Tomado de: https://es.123rf.com/

Tolueno: Compuesto con Impurezas: Presentan algunas

polaridad baja, más apolar de
todos los evaluados. será más
afín a fase estacionaria. tendrá
el mayor tiempo de retención
(Tr).
Tomado de: https://es.123rf.com/
un Tr mayor que el tolueno es
decir son sustancias más
apolares y existen otras con los
tiempos de retención más
rápidos que el acetato de etilo,
es decir son aún más polares
que este último.
 Análisis de Resultados

Aptitud del sistema:

- HETP(USP)
La eficiencia de la columna cromatográfica aumenta cuanto
mayor es el número de platos N y cuanto menor es la altura H del
plato [1], comparando con rampa de temperatura con isoterma,
la altura del plato disminuye ( 6.463 ) con rampa en gradiente.
- Tailing Factor
La forma característica gaussiana de una banda cromatográfica
se atribuye a la combinación aditiva de los movimientos
aleatorios de las diversas moléculas a medida que descienden
Oscar Quatrochi et al. . Intr. a HPLC¨1992.pp 45
por la columna. [1] es decir que la simetría entre la retención en
fase estacionaria y pasó a fase móvil sea simétrica. en cuanto se
acerca a 1 es mejor (banda gaussiana disminuida de error
aleatorio) en nuestro caso (1.324) es una muy buena medida.
 Análisis de Resultados
Aptitud del sistema:
- Number of Theoretical Plate(USP)
Este número es un valor teórico que se calcula para un sistema
en particular, ya que este número puede variar de laboratorio a
laboratorio según las condiciones de experimentación y de
manejo del sistema cromatográfico. [2] comparando nuestros
resultados de rampa de gradiente contra rampa de isoterma, se
ve un aumento sustancial del número de platos teóricos de cerca
de 5000.
- Resolution(USP)
La resolución es la medida entre los picos adyacentes, e integra
Oscar Quatrochi et al. . Intr. a HPLC¨1992.pp 45
su ancho de banda, debida a intercambios de masa en tiempos
óptimos entre fase estacionaria y fase móvil. al comparar los
resultados de gradiente contra los obtenidos por rampa de T
isocrática vemos una diferencia de entre 2 y 3 unidades (11.0)
por encima de rampa de T en gradiente (8.0).
 Análisis de Resultados
Aptitud del sistema:
- Factor de Capacidad (k¨)
Se relaciona con el coeficiente de distribución entre ambas fases,
adicionalmente puede demostrarse que este es proporcional al
tiempo de retención del soluto. idealmente para mezclas de dos
o menos componentes debe entre 2-10. [2] en nuestro caso, el
factor de capacidad es de 0.5, un tanto bajo en del umbral
inferior. esto se debe a la presencia de algunas impurezas que
eluyen a tiempo similar al tiempo muerto. por ende este
resultado se sesga.
- Factor de separación ( )
Oscar Quatrochi et al. . Intr. a HPLC¨1992.pp 45
Este factor depende de la afinidad del soluto por la fase móvil, asi
una disminución de la fuerza de la fase móvil aumenta la
retención. [2] según USP este valor debería ser mayor a 1. en
nuestro caso, está muy bien (2.65) esto en gradiente de T. y para
rampa de T isocrática es de 1.1 en promedio.
 Análisis de Resultados
Variación del inyector:

El número de SPLIT hace referencia a la proporción del número de

partículas que son inyectadas en el sistema con relación al número
de partículas que salen, por ejemplo, en un SPLIT 10 por cada
partícula que entra al sistema, saldrán otras 10. Así pues, al realizar
la comparación entre los diferentes números de SPLIT se esperaría
que a mayor número, el área bajo la curva del pico sea menor ya
que está entrando un menor número de partículas en la inyección
de la muestra, supuesto que se confirmó en la práctica y se puede
observar claramente en el gráfico 5 en una relación exponencial
entre el área bajo la curva y el número de Split.

imagen topmada de: licencia de documentación libre GNU,

Análisis de Resultados

Curva de Calibración y Muestra problema:

En cuanto a la muestra problema podemos decir, que

el resultado obtenido es confiable, la ecuación de la
recta creada con la adición de Estándar Externo
(Tolueno) muestra un comportamiento satisfactorio,
con un de 0.998, corroborando la correlacion de la
curva casi en su perfección. Por lo tanto la
interpolación de nuestra muestra problema en esta
curva es confiable. su desviación con respecto a la
concentración real se debe al volumen tomado al inicio
de la práctica el cual varió en 0,1 Microlitro por no
tener en cuenta el desvío del 0,05% del porcentaje de
pureza.
Conclusiones
● El sistema Cromatográfico usado en la práctica fue entendido en su cabalidad,
en torno a las muestras utilizadas y con respecto a la interpretación de su
funcionamiento.
● El cromatograma obtenido por parte del equipo junto con los datos de aptitud
del sistema fueron claramente explicados y cotejados con información de
literatura entre la cual está la USP. libro madre para este tipo de
procedimientos.
● A través de la curva de calibración creada se logró dilucidar cuál era la
concentración de la muestra problema.
Bibliografía
[1] Douglas A. Skoog, F. James Holler y Stanley R. Crouch ¨Principios de análisis instrumental ¨Sexta
edición . © D.R. 2008 por Cengage Learning Editores. pp769

[2] Oscar Alberto Quatrocchi et al. ¨introduccion al HPLC¨ . Artes Graficas Farro S.A. 1992. pp 50