BENJAMÍN PAZ ALIAGA

Profesor Principal UCSM. Profesor Emérito UNSA

Profesor de la UPT. Profesor de la UPADS
2016
PROTEINAS :
ESTRUCTURA Y PROPIEDADES

Dr. Benjamín Paz Aliaga

2009

TEMARIO:
Generalidades
Funciones biológicas
Composición elemental:
Proteínas simples
Proteínas conjugadas

Carácter macromolecular
 PROTEÍNAS
FUNCIONES BIOLOGICAS (I)
 Rol catalizador de las reacciones
químicas celulares
 Rol estructural

 Rol energético

 Rol en el transporte intracelular y

extracelular de metabolitos
 Rol en la respuesta inmune
 PROTEÍNAS
FUNCIONES BIOLOGICAS (II)
 Rol de mensajero químico

 Rol en funciones especializadas

 Rol en el crecimiento y proliferación

celular
 Rol regulador del pH

NO HAY FUNCION CELULAR QUE NO SEA

MEDIADA POR LAS PROTEINAS
PROTEINAS:
IMPORTANCIA
PROTEÍNAS
 COMPOSICIÓN ELEMENTAL
 Carbono 50 %
 Oxígeno 23 %
 Nitrógeno 16 %
 Hidrógeno 7%
 Azufre 3%

(Válido para las proteínas simples)

 PROTEINAS:
COMPOSICIÓN
 SIMPLES CONJUGADAS
Constituidas solo por Constituida por
aminoácidos. aminoácidos + grupo
C:50%, O:23%, prostético (compuesto
N:16%, H:7%, S:3% orgánico o
inorgánico)

P= Np (100/16)

P: contenido proteico de una muestra.

Np: contenido de nitrógeno de la muestra
PROTEÍNAS:
COMPOSICIÓN
Proteínas
(>50aa, PM
>5000)

Cadenas
polipeptídicas

Aminoácidos

PÉPTIDO: cadena <50aa.

PROTEINAS
 CARÁCTER MACROMOLECULAR
--------------------------------------------------------------------
TABLA.- Datos moleculares de algunas proteínas
-------------------------------------------------------------------------------------------
-----
PROTEINA P.M. No de residuos No de cadenas
-------------------------------------------------------------------------------------------
Insulina-- 5733 51 2
Citocromo c (humana) 13000 104 1
RNAasa(bovino) 13700 124 1
Lisozima (huevo) 13930 129 1
Mioglobina(equina) 16890 153 1
Quimotripsina(bovino) 21600 241 3
Hemoglobina (humana) 64500 574 4
Ig G (humana) 145000 1320 4
Glutamato deshidrogen. 1000000 8300 40
PROTEINAS

 METODOS BASADOS EN EL
CARÁCTER MACROMOLECULAR DE
LAS PROTEINAS PARA SU
ANALISIS

 Separación por diálisis

 Ultracentrifugación
 Cromatografía por ultrafiltración molecular
DIALISIS
ULTRACENTRIFUGA
CROMATOGRAFIA POR
ULTRAFILTRACION MOLECULAR
 APOLARES, CADENA LATERAL ALIFATICA

GRUPO I
APOLARES. CON R AROMATICO GRUPO I
AMINOACIDOS
INUSUALES
AMINOACIDOS QUE NO FORMAN PARTE DE
PROTEÍNAS ( Se les encuentra libres)
COMPUESTOS DERIVADOS DE AMINOÁCIDOS
AMINOÁCIDOS: PROPIEDADES FISICAS
 ACTIVIDAD OPTICA: son capaces de desviar
el plano de luz polarizada, excepto glicina.

 ABSORCION DE LUZ: no absorben luz en la

región visible del espectro luminoso, pero si en
el ultravioleta lejano. (280nm = trp, tyr, fen)
- estimar la [] proteica en una muestra.

 PROPIEDADES ELECTRICAS
ABSORCION DE LUZ DE LOS AMINOACIDOS EN LA REGION ULTRAVIOLETA
Los aminoácidos en solución tienen carga eléctrica
AMINOÁCIDOS: PROPIEDADES
FISICAS
Separación
electroforética
Representación
simplificada de la
separación electroforética
de la alanina, lisina y ácido
aspártico a pH = 6.

La lisina catiónica es
atraída hacia el cátodo, el
ácido aspártico aniónico es
atraído hacia el ánodo y la
alanina se encuentra en su
punto isoeléctrico, por lo
que no se mueve
 REACCION DE LA
NINHIDRINA

calor

Ninhidrina reducida- N del aminácido-Exceso de ninhidrina)

MINOÁCIDOS: PROPIEDADES FISICAS
PROPIEDADES ELECTRICAS
 Separación de aa por cromatografía de
intercambio iónico:
los aa se pasan por
una columna de resina
EL ANALIZADOR
DE AMINOACIDOS
AMINOÁCIDOS: PROPIEDADES QUIMICAS
Reaccion Reactivo Aminoácido Color
Millon Nitrato de mercurio en ac. Tirosina Rojo
nitrico
Ehrlich Triptofano Azul
Nitroprusito Nitroprusiato de sodio en Cisteina Rojo
amoniaco diluido
Sullivan Sulfonaptoquinona e Cisteina Rojo
hidrosulfito de sodio
Pauli Ac. Sulfanilico en medio Histidina y Rojo
alcalino tirosina
Folin Ac. fosfomolibdotungstico Tirosina Azul
AMINOACIDURIAS
 Clasificación:
1. Por mayor formación del aminoácido
(Sobreproducción)
2. Por menor reabsorción tubular renal del
aminoácido
 Aminoacidurias Frecuentes:
 Fenilcetonuria
 Cistinuria
 Sindrome de Fanconi
 Enfermedad de Hartnup
Caso Clínico 1 ( a)
 E.M es un niño de 2 años de edad que
padece de convulsiones desde un año antes.
Para el tratamiento de su cuadro
convulsivo, se usaron diferentes fármacos,
los que fueron sustituidos desde hacía dos
meses por valproato, por considerarlo más
efectivo como anticonvulsivante. En las
últimas semanas el estado de salud del niño
fue desmejorando por lo que fue necesario
proporcionarle sus alimentos a través de
una sonda nasogástrica .
Caso Clínico 1 ( b)
 Días después en vista que no mejoraba, se
ordenó diversos exámenes de laboratorio.
 Se encontró la presencia de glucosa en la
orina( glucosuria), sin hiperglicemia y un
aumento en la excreción urinaria de fosfato
asociado a hipofosfatemia. Una muestra de
orina fue utilizada para hacer un
cromatografía en capa fina y luego de
Caso Clínico 1 ( c)
 revelar la lámina con ninhidrina se pudo
identificar una serie de manchas que
correspondían a diversos aminoácidos, en
la misma lámina se sembró una muestra de
orina normal y también se pudo detectar
algunas manchas pero de mucha menor
intensidad que las encontradas en la orina
del paciente.
 Se practicó una biopsia renal y el examen
microscópico reveló alteraciones a nivel
tubular de tipo inflamatorio, pero sin
alteración alguna en la estructura
mitocondrial .
 Caso Clínico 1 (d)
 Los médicos que atendieron al enfermo
pensaron que la administración del último
anticonvulsivante tenía alguna relación
con el estado del paciente y con las
alteraciones de los exámenes de
laboratorio y decidieron suspenderlo. A
los pocos días se normalizaron todos los
análisis y el paciente mejoró
notoriamente a tal punto que se
suspendió la alimentación por la sonda.
 Caso Clínico 2 (a)
 Un niño de 12 años de edad fue llevado al
servicio de emergencia de un hospital público,
por presentar un dolor muy intenso en el
flanco derecho. El examen clínico no arrojó
otras anormalidades. Los padres refirieron que
eran primos hermanos.
 Se centrifugó una muestra de orina del
paciente y el sedimento se observó al
microscopio y se encontró además de
hematíes, unos cristales hexagonales.
 Caso Clínico 2 (b)
 La radiografía de abdomen permitió visualizar
cálculos (piedras) a nivel de ambos riñones,
siendo más llamativos en el derecho. Mediante
cromatografía en capa fina se identificó
cantidades importantes de cistina en la orina,
la que posteriormente se cuantificó con HPLC.
Se practicó las pruebas del cloruro férrico y
de la 2,4 dinitrofenilhidrazina en la orina del
paciente resultando negativa la primera y
positiva la segunda.; en tanto que la reacción
de Sakaguchi resultó positiva.
 Caso Clínico 3 (a)
 Niña de 9 años de edad hija de padres
consanguíneos fue internada en un hospital por
presentar cuadros de dermatitis ( piel rojiza y
escamosa) y diarrea, además de alteraciones
neurológicas evidenciadas por la presencia de
ataxia. La madre pensó que la niña tenía la
misma enfermedad que su hermano mayor , la
cual había sido diagnosticada como pelagra. No
obstante la niña no tenía ninguna deficiencia
dietética de vitaminas.
 Caso Clínico 3(b)
 El examen de orina reveló una poliamino-
aciduria y cuando el hermano mayor mejoró de
su enfermedad también se pudo demostrar en
la orina una excreción aumentada de varios
aminoácidos, de manera especial los neutros.
 El examen de orina en los otros 4 hermanos
reveló que dos de ellos tenían también
poliaminoaciduria; en tanto que los otros dos
eran normales.
NIVELES DE ESTRUCTURACION
DE LAS PROTEINAS
1. PRIMARIO
2. SECUNDARIO: alfa hélice y lámina
plegada
3. TERCIARIO
4. CUATERNARIO
+NH3-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO………….. NH-CH-CO-NH-CH-CO –

R(1) R(2) R(3) R(165) R(166)

Estructura Primaria de una proteína que tiene

166 aminoácidos
ESTRUCTURA PRIMARIA DE LA INSULINA DE
PANCREAS DE BOVINO
 1958 1980
FRED SANGER PREMIO NOBEL EN
QUIMICA EN 1958 Y EN 1980
Variaciones en los aminoácidos de
la insulina de diferentes especies
ESPECIES A8 A9 A10 B30

Hombre Treonina Serina Isoleucina Treonina

Vaca Alanina Serina Valina Alanina

Cerdo Treonina Serina Isoleucina Alanina

Gallina Histidina Asparragi Treonina Alanina

-na
 Figura 5.1 Estructura Primaria de la Ribonucleasa
ESTRUCTURA PRIMARIA DE LA RIBONUCLEASA
DESNATURALIZACION DE LA RIBONUCLEASA
AGENTE LUGAR DE CORTE ESPECIFICIDAD
Lugares
1.Sobre enlaces Primer o último
de acción
pepti-dicos externos. enlace peptídico. de las
enzimas
-R de Edman Libera el aminoácido Cualquier aminoácido que
Aminopeptidasa N terminal Cualquier aminoácido hidrolizan
Libera al aminoácido
N terminal enlaces
Carboxipeptidasa A Libera el aminoácido C Todos los aminoácidos excepto Arg,
peptídicos
terminal Lis y Pro
Carboxipeptisada B Libera al aminoácido C Cuando es Arg y Lis
terminal
2. Sobre enlaces peptí- Del segundo al penultimo
dicos internos enlace peptídico

-Bromuro de cianógeno Lado carboxilo De la metionina

Tripsina Lado carboxilo De Lis, Arg y Cis si está

aminooetilada. No actua si el que
sigue es Pro.

Pepsina Lado amino De Fen, Tir, Tri, Leu, Asp y Glu. No

actúa si el anterior es Pro.

Termolisina Lado amino De Fen, Tir, Tri y Leu

Quimotripsina Lado carbosilo De Fen, Tir, Tri y Leu
LAS DISTANCIAS INTERATOMICAS EN EL
ESQUELETO PEPTIDICO
ESTRUCTURA
SECUNDARIA
 HELICE ALFA
 espiral o resorte.
 3,6 aa por cada vuelta.
 Puentes H son lineales y
paralelos al eje.
 Puede ser:
- alfa helice derecha (Hb,
mioglobina, queratina)
- alfa helice izquierda
(colageno)

 Prolina impide espiral.

 ESTRUCTURA
ESTRUCTU
-HELICE
RA
-HÉLICE
PUENTES DE HIDROGENO
LAMINA PLEGADA PARALELA
LAMINA PLEGADA ANTIPARALELA
 ESTRUCTURA SECUNDARIA
 LAMINA PLEGADA
 Puentes H son
perpendiculares
 Gran estabilidad
 Puede ser:
-paralela
- antiparalela:
Fibroína (seda)
ESTRUCTURA PRIMARIA , SECUNDARIA Y
TERCIARIA DE UNA PROTEINA
ENLACES QUE
MANTIENEN LA
ESTRUCURA
TERCIARIA DE
LAS
PROTEINAS
ESTRUCTURA CUATERNARIA
 >1 cadena polipeptidica (subunidad)
 Intervienen las mismas interacciones
que en la estructura terciaria.
 Pueden ser:
- homogenea
- heterogenea
 5.4 A

NIVELES DE ESTRUCTURACION DE LAS

PROTEINAS
 SECUNDARIA : LAMINA PLEGADA

PRIMARIA

SECUNDARIA : ALFA HELICE

TERCIARIA

CUATERNARIA
COLAGENO
HEMOGLOBINA
DESNATURALIZACION REVERSIBLE DE LAS PROTEINAS
 DESNATURALIZACIÓN DE
PROTEÍNAS
 Proceso generalmente irreversible
mediante el cuál la proteína pierde su
estructura 2º, 3º y 4º, careciendo de
importancia biológica.

- incrementa la viscosidad
- perdida de capacidad de cristalización
- disminución solubilidad
- cambia coeficiente de sedimentación
- cambia coeficiente de difusión
 Es una proteína
conjugada
(hemoproteína) formada
por:
 Fracción proteica:
globina
 Fracción no proteica
(grupo prostético)
 Porción orgánica: grupo
HEM
 Porción inorgánica:
átomo de Fe+2.
 Función: transporte de
O2 en el músculo
73
 L: cadenas livianas
 H: cadenas pesadas
 Existen 5 tipos: , d, g,
m, e

74
 Fc: con actividad biológica,
define la clase de cadena
pesada.
 Fab: unión al Ag.
 Dominios ctes: CH
 CL
 Dominios variables:
Responsables de la unión al
Ag.
 VH: definen los 5 tipos de
cadenas H.
 VL
ELECTROFORESIS DE LAS
PROTEINAS DEL SUERO SANGUINEO
ELECTROFORESIS DE LAS PROTEINAS SERICAS
Paciente de 72 años con mieloma múltiple.
 1Y 5: PATRONES

ELECTROFORESIS DE LAS HEMOGLOBINAS

 Niño saludable de
3 años de edad
nacido en EEUU,
de raza negra y
fue estudiado en
un programa de
descarte.
Electroforesis el
acetato de
celulosa pH 8.4
1.- Madre
2.- Padre
3.- Paciente
4.-hermana del
paciente de 7
años

Case 6.