ENZIMOLOGIA

Joselyn Castro
4324
 PARA EL MODELO S ↔ P

𝐸𝑜 = 𝐸 + 𝐸𝑆 + [𝐸P]
Se considera un sustrato, un producto y
una enzima 𝑉𝑡 = 𝑉1 − 𝑉2

𝑑𝑆 𝑑𝑃
𝑉𝑡 = − =
Cumple con la cinética de Michaelis 𝑑𝑡 𝑑𝑡
Menten E enzima libre
ES complejo enzima sustrato
EP complejo enzima producto
Su estudio en Vo velocidad K constantes de velocidad
unidireccionales extrapoladas a tiempo
cero
Subíndices pares: der – izq
Subíndices impares: Izq - der
Vt = V1 – V2. Suma algebraica de dos
velocidades unidireccionales Estados elementales E libre. No
estados de transición
 Resolución de las ecuaciones en el estado
Ley General de velocidad de Rx:
estacionario

𝑉𝑡 = 𝑘1 𝐸 𝑆 − 𝑘2 𝐸𝑆 = 𝑘5 𝐸𝑃 − 𝑘6 [𝐸][𝑃]
𝐸𝑜 = 𝐸 + 𝐸𝑆 + [𝐸P]
0 0
𝑑[𝐸]
[S] >> [𝐸𝑜 ]  Condiciones de Michaelis - Menten = 0 = − 𝑘1 𝑆 + 𝑘6 𝑃 𝐸 + 𝑘2 𝐸𝑆 + 𝑘5 [𝐸𝑃]
𝑑𝑡
𝑑[𝐸𝑆]
= 0 = 𝑘1 𝑆 𝐸 − 𝑘2 + 𝑘3 𝐸𝑆 + 𝑘4 [𝐸𝑃]
𝑑𝑡

Condiciones de estado estacionario: 𝑑[𝐸𝑃]

= 0 = 𝑘6 𝑃 𝐸 + 𝑘3 𝐸𝑆 − (𝑘4 + 𝑘5 )[𝐸𝑃]
𝑑𝑡
𝑑[𝐸]
=0
𝑑𝑡 Combinación lineal  Sistema tiene solución
𝑑[𝐸𝑆]
=0
𝑑𝑡 Formación matriz de coeficientes
𝑑[𝐸𝑃]
=0
𝑑𝑡
 Regla de Cramer. Determinantes
1 1 1
∆= − 𝑘1 𝑆 + 𝑘6 𝑃 𝑘2 𝑘5
𝑘1 𝑆 − 𝑘2 + 𝑘3 4

Teorema de Rouche

• Combinación lineal  Sistema tiene 𝑘𝑜 1 1

solución 0 𝑘2 𝑘5
0 − 𝑘2 + 𝑘3 𝑘4
𝐸 =
Solución  Regla de Cramer ∆

• Formación matriz de coeficientes 1 𝑘𝑜 1

− 𝑘1 𝑆 + 𝑘6 𝑃 0 𝑘5
𝑘1 𝑆 0 𝑘4
𝐸𝑆 =
∆
 (𝑘2 𝑘4 + 𝑘2 𝑘5 + 𝑘3 𝑘5 )
𝐸 = 𝐸𝑜
𝑘2 𝑘4 + 𝑘2 𝑘5 + 𝑘3 𝑘5 + 𝑘1 𝑘3 + 𝑘1 𝑘4 + 𝑘1 𝑘5 𝑆 + 𝑘2 𝑘6 + 𝑘3 𝑘6 + 𝑘4 𝑘6 𝑃

(𝑘1 𝑘4 𝑆 + 𝑘4 𝑘6 𝑃 + 𝑘1 𝑘5 𝑆)
𝐸𝑆 = 𝐸𝑜
𝑘2 𝑘4 + 𝑘2 𝑘5 + 𝑘3 𝑘5 + 𝑘1 𝑘3 + 𝑘1 𝑘4 + 𝑘1 𝑘5 𝑆 + 𝑘2 𝑘6 + 𝑘3 𝑘6 + 𝑘4 𝑘6 𝑃

En la ecuación de Vt:

𝑘1 𝑘3 𝑘5 𝑆 − (𝑘2 𝑘4 𝑘6 𝑃)
𝑉𝑡 = 𝐸𝑜
𝑘2 𝑘4 + 𝑘2 𝑘5 + 𝑘3 𝑘5 + 𝑘1 𝑘3 + 𝑘1 𝑘4 + 𝑘1 𝑘5 𝑆 + 𝑘2 𝑘6 + 𝑘3 𝑘6 + 𝑘4 𝑘6 𝑃

𝑉𝑚𝑆 𝐾𝑚𝑃 𝑆 − 𝑉𝑚𝑃 𝐾𝑚𝑆 [𝑃]

𝑉𝑡 =
𝐾𝑚𝑆 𝐾𝑚𝑃 + 𝐾𝑚𝑃 𝑆 + 𝐾𝑚𝑆 [𝑃]
RESOLUCIÓN GRÁFICA DE LAS ECUACIONES CINÉTICAS. MÉTODO DE
KING Y ALTMAN

Diferentes Estado
Mecanismo
especies químicas estacionario 
cinético complejo
 [E], [ES] y [EP] 𝐸𝑜 = σ[𝐸𝑋𝑗 ]
E
• No. de vértices igual al
P k6 numero de especies químicas
k2 k5 que se puede hallar la enzima
S k1
Polígono de k3
• Constantes cinéticas

King Y Altman ES
k4
EP • Construcción de polígonos
abiertos
• Por cada uno de los lados del
mismo.
 E E
E E
P k6
P k6
k2 k5
k2 k2 k5
S k1
S k1 S k1
k3 k3
k3
ES EP ES EP
k4 k4 ES EP ES EP
k4
E
E
P k6
P k6
k5
k2 k5
S k1
k3c
ES EP
ES EP k4

[E] = (k2k4) + (k2k5) + k3k5) [EP]=(k1k3S) + (k2k6P) + (k3k6P)

 E E
P k6
k2 k2 k5
S k1 S k1
k3
ES EP ES EP
k4

E
P k6
k5

k3
ES EP
k4

[ES] =(k1k4S) + (k1k5S) + (k4k6P)

 FORMAS DE
TÉRMINOS
LA ENZIMA
[E] 𝑘2 𝑘5 𝑘2 𝑘4 𝑘3 𝑘5

[ES] 𝑘1 𝑘5 [𝑆] 𝑘1 𝑘4 [𝑆] 𝑘4 𝑘6 [𝑃]

[EP] 𝑘2 𝑘6 [𝑃] 𝑘1 𝑘3 [𝑆] 𝑘3 𝑘6 [𝑃]

Razón de una determinada especie química σ[𝑇𝑒𝑟𝑚𝑖𝑛𝑜𝑠 𝑞𝑢𝑒 𝑎𝑓𝑒𝑐𝑡𝑎𝑛 𝑎 𝐸]

𝐸 = 𝐸𝑜
σ 𝑇𝑜𝑑𝑜𝑠 𝑙𝑜𝑠 𝑡é𝑟𝑚𝑖𝑛𝑜𝑠
[𝐸𝑋𝑖 ] términos que afectan a la especie

[𝐸𝑜 ] términos que afectan a todas las especies 𝑘2 𝑘5 + 𝑘2 𝑘4 + 𝑘3 𝑘5

𝐸 = 𝐸𝑜
σ 𝑇𝑜𝑑𝑜𝑠 𝑙𝑜𝑠 𝑡é𝑟𝑚𝑖𝑛𝑜𝑠
Se producen por la presencia de dos o más
sustratos
Nomenclatura
 Por número de Sustrato y Producto
Uni-Uni A P

•𝐴 → 𝑃 E EA E
𝑑𝐴 𝑑𝑃
•− =
𝑑𝑡 𝑑𝑡
Bi-Uni A B P

E EA EAB E

• 𝐴+𝐵 →𝑃
𝑑𝐴 𝑑𝐵 𝑑𝑃
• − = − =
𝑑𝑡 𝑑𝑡 𝑑𝑡
Bi-Bi
Mecanismo Ordenado

• 𝐴+𝐵 →𝑃+𝑄
𝑑𝐴 𝑑𝐵 𝑑𝑃 𝑑𝑄
• − = − = =
𝑑𝑡 𝑑𝑡 𝑑𝑡 𝑑𝑡
 Ping-Pong

Uni-Uni-Uni-Uni
Orden de entra y salida

Orden predeterminado
 REACCIÓN DE SIMPLE
DESPLAZAMIENTO

• 𝐸 + 𝐴 ֞ 𝐸𝐴 + 𝐵 ֞ 𝐸𝐴𝐵 ֞ 𝑃 + 𝐸𝑄 ֞ 𝑄 + 𝐸
𝐴 𝐵
• 𝑉𝑜 = 𝑉𝑚𝐴𝐵 ∙
𝑘𝑖𝑎 𝑘𝐵 +𝐾𝐵 𝐴 +𝐾𝐴 𝐵 + 𝐴 𝐵

-Grupo1
-Complejo ternario
-Se une primero la
coenzima
-No se modifica la enzima
 1 1
𝑉 𝑉

1
1 𝑉𝑚𝐴𝐵
𝑉𝑚𝐴𝐵

1 1 1
−
𝑘𝑖𝑎 𝐴 𝐵

Inhibición por producto

SUSTRATO SUSTRATO
INHIBICIÓN
A(SATURADO B) A(SATURADO B)
P Acompetitiva No Competitiva
Q Competitiva -
 REACCIÓN DE DOBLE
DESPLAZAMIENTO O PING-PONG

• 𝐸 + 𝐴 ֞ 𝐸𝐴 ֞ 𝐸 ′ + 𝑃 + 𝐵 ֞ 𝐸 ′ 𝐵 ֞ 𝑄 + 𝐸
𝐴 𝐵
• 𝑉𝑜 = 𝑉𝑚𝐴𝐵 ∙
𝐾𝐵 𝐴 +𝐾𝐴 𝐵 + 𝐴 𝐵

-Grupo 2
-Primer sustrato modifica la enzima, sale un producto
-Segundo sustrato recupera la enzima libre
1 1
𝑉 𝑉

1
1
𝐵
𝐴
Inhibición por producto
SUSTRATO SUSTRATO
INHIBICIÓN
A(SATURADO B) A(SATURADO B)
P - Competitiva
Q Competitiva -
Mecanismo al Azar
Aleatorio
-Se forma el complejo terciario: EAB o EBA
• 𝐸 + 𝐴 ֞ 𝐸𝐴 + 𝐵 ֞ 𝐸𝐴𝐵 ֞ 𝑃 + 𝐸𝑄 ֞ 𝑄 + 𝐸
• 𝐸 + 𝐵 ֞ 𝐸𝐵 + 𝐴 ֞ 𝐸𝐵𝐴 ֞ 𝑄 + 𝐸𝑃 ֞ 𝑃 + 𝐸
𝐴 𝐵
• 𝑉𝑜 = 𝑉𝑚𝐴𝐵 ∙
𝐾𝐵 𝐾𝐴 +𝐾𝐵 𝐴 +𝐾𝐴 𝐵 + 𝐴 𝐵
 1 1
𝑉 𝑉

1 1 1
1 −
− 𝐴 𝑘𝐵 𝐵
𝑘𝐴
Inhibición por producto
SUSTRATO SUSTRATO
INHIBICIÓN
A(SATURADO B) A(SATURADO B)
P No Competitiva No Competitiva
Q No Competitiva No Competitiva