AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN DE LA CAFEÍNA DEL TÉ

1 NEGRO (SIN EMPLEAR ACETATO DE PLOMO)

Astrid Carolina Gelves

Maria Camila Díaz
Michael Santos

Laboratorio II de Química Orgánica

Escuela de Química
Universidad Industrial de Santander
Bucaramanga, Colombia
2
INTRODUCCIÓN
La extracción líquido-líquido es una técnica de
separación, utilizada frecuentemente para aislar
compuestos a partir de su fuente natural; se basa en
las propiedades de solubilidad de la sustancia a
extraer y del solvente utilizado [1].
 MARCO TEÓRICO
3La extracción involucra generalmente la transferencia de material
orgánico desde una fase líquida acuosa a una segunda e inmiscible
fase líquida orgánica (solvente).

Un soluto orgánico que se encuentra diluido en una matriz acuosa,

forma una sola fase a la que se denomina fase acuosa; cuando a esta
fase se le adiciona un líquido inmiscible (el solvente orgánico), el
soluto –que también es soluble en la fase orgánica– empezará a
emigrar desde la fase acuosa a la nueva fase hasta que se alcance un
equilibrio entre ellas [2].
4

Figura 1. Extracción ideal: al mezclar eficientemente el solvente orgánico B con la

sustancia A presente en la matriz acuosa C, la sustancia A pasa al disolvente B
debido a su afinidad (fuerzas intermoleculares de solvatación). Tras la decantación
se obtienen dos fases: la fase extracto (A+B) y el líquido portador C [3].
5
Ley de Distribución o Ley de Partición: Si a un sistema de dos fases líquidas
A y B inmiscibles o muy poco miscibles, se le agrega un tercer componente Z
soluble en ambas fases, éste se distribuirá en cada una de las fases de tal
manera que el cociente que resulte de dividir las concentraciones logradas
en cada fase será una constante que dependerá de la temperatura [4].

[A] = Cantidad de componente Z en A

𝐴
[B] = Cantidad de componente Z en B 𝐾𝑑 =
𝐵
𝑲𝒅 = Coeficiente de partición o distribución
 Ejemplo 1:
6 Si la solubilidad a 25 °C de una sustancia Z es de 28 g por cada
100 mL de éter etílico y 45 g por cada 100 mL de agua, cuando se
agrega Z a una mezcla de iguales volúmenes de éter etílico y
agua, se disolverá en cada uno de ellos en cantidades que
dependerán de los respectivos coeficientes de solubilidad.

45 𝑔
100 𝑚𝐿 𝑎𝑔𝑢𝑎 45
𝐾𝑑 = = = 1.607
28 𝑔 28
100 𝑚𝐿 é𝑡𝑒𝑟

Entonces, la concentración de Z en agua será 1.6 veces mayor que

en la fase de éter etílico.
 Ejemplo 2:

Supóngase que una mezcla de reacción da, al diluirla con agua,

7 300 mL de una disolución acuosa con 30 g del producto de la
reacción, malononitrilo CH2(CN)2 , que ha de ser aislado por
extracción con éter. La solubilidad del malononitrilo en éter es de
20.0 g / 100 mL, y en agua es de 13.3 g / 100 mL. ¿Qué peso de
malononitrilo se recobrará por extracción con:

a) Una porción de éter de 300 mL

b) Tres porciones de éter de 100 mL cada una
c) Seis porciones de éter de 50 mL cada una
8
Determinación de coeficiente de reparto:

CH2(CN 2 en éter] 20 g/mL

Kd = = = 1,5037
CH2(CN 2 en H2 O] 13,3 g/mL

*El coeficiente de reparto se puede determinar como la relación

de las solubilidades del compuesto en cada uno de los
disolventes [5].
9
Determinación de la cantidad de malononitrilo para el apartado a)
agregando 1 porción de éter.

𝑥
300 = 20
(30 − 𝑥) 13,3
300

𝒙𝑻 = 𝟏𝟖, 𝟎 𝐠
10
Determinación de la cantidad de malononitrilo para el apartado b)
agregando 3 porciones de éter.

𝑥 𝑥 𝑥
100 = 20 100 = 20 100 =
20
(30 − 𝑥) 13,3 (20 − 𝑥) 13,3 (13,33 − 𝑥) 13,3
300 300 300

𝒙𝟏 = 𝟏𝟎, 𝟎 𝐠 𝒙𝟐 = 𝟔, 𝟔𝟕 𝐠 𝒙𝟑 = 𝟒, 𝟒𝟓 𝐠

𝒙𝑻 = 𝟐𝟏, 𝟏𝟐 𝐠
11
Determinación de la cantidad de malononitrilo para el apartado c)
agregando 6 porciones de éter.

𝑥 𝑥 𝑥
50 20 50 20 50 20
= = =
(30 − 𝑥) 13,3 (23,99 − 𝑥) 13,3 (19,19 − 𝑥) 13,3
300 300 300
𝒙𝟏 = 𝟔, 𝟎𝟏 𝐠 𝒙𝟐 = 𝟒, 𝟖𝟎 𝐠 𝒙𝟑 = 𝟑, 𝟖𝟒 𝐠

𝑥 𝑥 𝑥
50 20 50 20 50 20
= = =
(15,35 − 𝑥) 13,3 (12,28 − 𝑥) 13,3 (9,82 − 𝑥) 13,3
300 300 300
𝒙𝟒 = 𝟑, 𝟎𝟕 𝐠 𝒙𝟓 = 𝟐, 𝟒𝟔 𝐠 𝒙𝟔 = 𝟏, 𝟗𝟕 𝐠

𝒙𝑻 = 𝟐𝟐, 𝟏𝟓 𝐠
 Tabla 1. Relación de gramos extraídos de malononitrilo contra
número de extracciones realizadas
12 # Extracción 300 (mL) 150 (mL) 100 (mL) 75 (mL) 60 (mL) 50 (mL)
1 18,0 12,8 10,0 8,18 6,92 6,01
2 - 7,37 6,67 5,95 5,33 4,80
3 - - 4,45 4,33 4,10 3,84
4 - - - 3,15 3,15 3,07
5 - - - - 2,42 2,46
6 - - - - - 1,97

Extracción total (g) 18,00 20,17 21,12 21,61 21,92 22,15

Cantidad de malononitrilo extraída [g] vs Número de
Extracciones
Cantidad de Malononitrilo extraída

23
22
21
20
19
18
17
0 1 2 3 4 5 6 7
Número de extracciones
13 TANINOS[6]

El término tanino fue originalmente utilizado para describir ciertas sustancias

orgánicas que servían para convertir a las pieles crudas de animales en cuero, proceso
conocido en inglés como tanning ("curtido" en español).

Actualmente, estos reciben como definición “compuestos fenólicos hidrosolubles, de

masa molecular comprendida entre 500 y 3000 que presentan junto a las reacciones
clásicas de los fenoles, la de precipitar los alcaloides, la gelatina y otras proteínas”
(Bate‐Smith y Swain, 1962).

Figura 2. El ácido gálico, un tanino

14 Químicamente son metabolitos secundarios de las plantas. fenólicos, no
nitrogenados, solubles en agua y no en alcohol ni solventes orgánicos [7]
Como propiedades se tiene que son sustancias amorfas, solubles en agua para
dar coloides; solubles en ácidos diluidos, alcohol, acetona y glicerina y
precipitan con numerosos reactivos, como metales pesados (Fe, Pb, Zn, Cu), agua
de cal (hidróxido de calcio en solución) y de barita, wolframato sódico, molibdato
amónico. Además, pueden precipitar con proteínas: polvo de piel, gelatina,
albúmina, etc.

Figura 3. Proceso de
precipitación de
taninos: (a) Antes de la
precipitación
(b) Después de la
precipitación.
a b
15 Precipitación de taninos con Gelatina[8]
La gelatina está conformada principalmente por colágeno. El proceso de conversión de
colágeno en gelatina involucra tres pasos principales. En el primero se remueve los
componentes ajenos al colágeno de la matriz (piel y huesos), luego sucede la conversión de
colágeno a gelatina por calentamiento en presencia de agua y debido al decaimiento de la
temperatura hasta un valor crítico donde ocurre la renaturalización de la proteína, para
obtener finalmente la estructura final conocida de la gelatina [9].
Las cadenas laterales polares de los grupos aminoácidos como lisina, arginina, ácido
aspártico, ácido glutámico, pueden formar puentes de hidrógeno con los grupos hidroxilo de
los taninos.
Otros aminoácidos como serina y treonina pueden también formar puentes de hidrógeno y
así, como los taninos tienen varios grupos hidroxilo y carboxilo pueden formar interacciones
de puentes de hidrógeno en múltiples puntos, estabilizando la interacción tanino-colágeno.
16

Lisina Arginina Ácido aspártico

Forman puentes de
hidrógeno con el
grupo hidroxilo de
los taninos.

Ácido glutámico Serina Treonina

17

Figura 4. Estructuras de aminoácidos y mecanismo propuesto para la interacción de

taninos con colágeno. a) Estructura de un aminoácido b) Aminoácido en medio ácido c)
Matriz acrílica cargada negativamente d) Unión de aminoácido cargado con una matriz
acrílica para análisis espectroscópico (IR) e) Esquema que representa un tanino f)
Interacción tanino-proteína [8] .
18 MATERIALES Y REACTIVOS
- MATERIALES:
• 2 Vasos de precipitado de 500 mL • Tubos de ensayo para la centrífuga
• Vaso de precipitados de 250 mL • Embudo de decantación
• Espátula • Erlenmeyer
• Papel filtro • Rotoevaporador
• Placa de calentamiento
• Vidrio de reloj

- SUSTANCIAS:
 Diclorometano  Gelatina sin sabor
 Sulfato de sodio (anhidro)  Té (negro)
19 METODOLOGÍA

EXTRACCIÓN DESTILACIÓN PURIFICACIÓN

Este paso solo se lleva a cabo en

caso de obtener un producto que
no tenga todas las
características congruentes con
la cafeína.

- PREPARACIÓN:
20
1 3
4 6
Figura 5. Preparación de la infusión de té.
1. Calentar 150 mL de agua en un vaso de
precipitados de 500 mL, simultáneamente, en un
vaso de precipitados aparte, calentar agua, para
realizar las infusiones de la práctica.
2. Pesar unos 5 sobres de té negro, equivalente a
unos 8.5 g – 9.0 g de té.
3. Agregar las bolsas de té al vaso de precipitados
con agua, cuando se observe ebullición en la
solución con las bolsas de té, se espera 5 minutos
(aprox.) y seguidamente, se procede a transferir la
solución de té a otro vaso de precipitados de 500
mL.
4. Al vaso con las bolsas de té, agregar 100 mL del
agua que en un principio se puso a calentar
(infusión).
5. Nota: el vaso a donde se transfieren las
infusiones de té se mantiene en una placa de
calentamiento con el fin de evaporar el solvente y
obtener al final de las 5 infusiones (200 mL) de
solución de té.
6. Realizar el procedimiento anterior 5 veces.
Cuando se tengan los 500 mL de solución de té,
correspondientes a las 5 infusiones, se pone a
calentar la solución para evaporar el solvente y
obtener así al final 200 mL de solución de té. Se
deja enfriar a temperatura ambiente.
 SEPARACIÓN: Preparación de la solución de
21 gelatina sin sabor
7. Agregar 40 mL de agua destilada que esté
tibia a un vaso de precipitado de 50 mL y
adicionarle 3 gr de gelatina sin sabor, agitar
suavemente. Evitar agregar toda la solución de
gelatina al té para que no se forme emulsión.

8. Como el embudo a utilizar en la extracción

es de 250 mL, el volumen de la solución de
gelatina a adicionar debe ser menor que 50
mL.

9. La solución de gelatina se agrega gota a gota

y se agita suavemente con una varilla para
homogenizar.

10. Para verificar que los taninos se han

precipitado, se toma una gota de la solución en
un vidrio de reloj, se le agrega una gota de la
gelatina - observar detenidamente si hay
precipitado.
Figura 6. Precipitación de los taninos con gelatina.
22 11. Al agregar la solución de gelatina se
precipitan los taninos, al principio se agrega la
solución y se observa como se va formando el
precipitado. Cuando puede ver que la gota de
la solución de gelatina no se “cuartea” sobre la
superficie de la solución de té sino que se
disuelve normalmente, se deja de agregar
gelatina.

12. Transferir la solución en tubos de

centrifugación a un volumen de 10 mL cada
uno.

13. Llevar la solución a la centrifuga durante 15

minutos a 3500 rpm y Después de centrifugar,
se recoge el sobrenadante en un vaso de
precipitado.

Figura 7. Proceso de centrifugación. 14. En caso de tener número de tubos impar,

se debe usar un tubo de centrifugación lleno
de agua al mismo volumen para completar la
paridad.
 EXTRACCIÓN DISCONTÍNUA
23
15. Verter la fase líquida en
(extracción) verificar que el pH de
un embudo de decantación
18. Agitar la solución
suavemente para evitar
formación de emulsión
Formación de emulsión
1) En caso de que sea poca, agregar
diclorometano y salmuera, agitar
suavemente para romper la
emulsión.
2) En caso de que la presencia de
emulsión sea abundante, centrifugar
nuevamente la solución y la parte
líquida añadirla nuevamente al
embudo de decantación.
Observación: Es preferible la
opción 1 en caso de formación
de emulsión
Nota: Antes de este paso
la solución sea básico
16. Realizar el montaje de
decantación simple.
17. Agregar la fase líquida y un
correspondiente al 10% del
volumen de la fase líquida con
diclorometano.
19. Decantar la fase orgánica en
un Erlenmeyer (tapa de papel
aluminio).
20. Realizar 5 veces el proceso
de extracción siempre revisando
que el PH sea básico.
Nota. La solución de té debe
estar a temperatura ambiente Figura 8. Montaje para la
para realizar la extracción. extracción
 EXTRACCIÓN CONTÍNUA
24
15. Verter un poco de
diclorometano en el extractor
Soxhlet de manera que la
entrada inferior quede ocupada
por el diclorometano y no se
vaya a pasar la fase líquida
evitando derrames. (medir estas
cantidades)
16. Verter la fase líquida en el
extractor Soxhlet evitando su
paso por la entrada superior (se
puede hacer con ayuda de un
embudo).
17. Pesar el balón de fondo
redondo recolector.
18. Realizar el montaje de
extracción contínua (Figura 9.)
Nota. La extracción debe
dejarse por lo menos un día
para mejores resultados.
Al momento de desmontar Figura 9. montaje para
tener cuidado para que no se la extracción continua
contamine el balón de fondo.

Nota. La solución de té debe

estar a temperatura ambiente
para realizar la extracción.

Figura 10. Balón de fondo

con diclorometano
 FILTRACIÓN Y ROTOEVAPORACIÓN:
25
a b
21. Agregar sulfato de sodio a la fase
orgánica decantada en el erlenmeyer
hasta notar que las partículas no se
agrupan.

22. Filtrar la fase orgánica agregándola

c
a un balón de 100 mL (previamente
pesado).

23. Realizar la rotoevaporación a 40 ºC

con el sistema abierto (sin vacío) hasta
que se destile todo el solvente.
Figura 11. (a) Agrupación del sulfato de sodio en
la fase orgánica decantada,
(b) Filtración de la fase orgánica y
(c) Montaje de rotoevaporación.
 24. Después de colectar el
a b

26 diclorometano en la botella de
“diclorometano-reciclado”;
conectar el vacío de la bomba y por
1 minuto; rotoevaporar y luego
pesar el balón.

23. Rotoevaporar nuevamente por 2

c d
minutos más – pesar el balón y repetir
el proceso hasta registrar un peso
constante.

26. Obtener el peso de la cafeína

mediante diferencia de pesado.

Figura 11. (a) y (b) Rotoevaporación al

vacío, (c) y (d) Toma del punto de fusión.
27. Proceder a tomar el punto de
fusión y luego el espectro IR.
 SUBLIMACIÓN:
27
28. Realizar el montaje de sublimación a
(solo si se tiene suficiente muestra). Se
puede utilizar la pistola de
calentamiento para este paso, pero el
calentamiento con ésta no es uniforme.

b c
29. Traspasar la cafeína sublimada a un
vidrio de reloj

30. Proceder a tomar espectro IR y Figura 12. Montaje para la sublimación:

punto de fusión. (a) Con aceite mineral en placa de calentamiento, (b)
y (c) Con pistola de calentamiento.
 28
a
b

Figura 13. Cristales

de: (a) Cafeína cruda
y (b) Cafeína
sublimada.
b a
a
b
b
29 % de extracción =
𝐺𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑓𝑒í𝑛𝑎 𝑜𝑏𝑡𝑒𝑛𝑖𝑑𝑎
𝐺𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙
x100

Tabla 2. Resultados con extracción liquido-liquido continua

Grupo Muestra inicial Masa obtenida % de extracción
1 10,52 g 0,149 g 1,42
4 8,906 g 0,097 g 1,09
Tabla 3. Resultados con extracción liquido-liquido con embudo
Grupo Muestra inicial Masa obtenida % de extracción
2 8,934 g 0,712 g 7,9
3 8,701 g 0,101 g 1,16
5 8,561 g 0,147 1,71
 Resultados
30 2017-1
𝐺𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑓𝑒í𝑛𝑎 𝑜𝑏𝑡𝑒𝑛𝑖𝑑𝑎
% de extracción = x100
𝐺𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙

Tabla 5. Resultados cafeína obtenida.

Grupo Muestra inicial Masa obtenida % de extracción

(g) (mg)
1 9,913 34 0,34
2 8,823 66 0,75
3 9,929 60 0,60
4 8,960 38 0,42
31 RESULTADOS SEMESTRE ANTERIOR

Tabla 6. Resultados cafeína obtenida.

Muestra Inicial Masa Obtenida
Grupo [mg]
%
[g]
1 11,100 90 0,81
2 10,384 92 0,87
3 10,000 170 1,70
4 9,235 31 0,33
5 11,041 90 0,82
6 9,640 76 0,79
7 10,650 269 2,52
32
Tabla 4. Resultados puntos de fusión de cafeína cruda y cafeína sublimada.

Punto de fusión Punto de fusión de

Punto de fusión
experimental de la la cafeína, tomado
Grupo experimental de la
cafeína sublimada de la literatura
cafeína [ºC]
[ºC] [ºC]

1 234,5 - 236
2 220 - 230
3 231,2 - 232,7 233,1-236 238,0
4 233,2 - 234,1
5 232,5 – 233,2
 Resultados
33
2017-1
Tabla 7. Resultados puntos de fusión de cafeína cruda y cafeína sublimada.

Punto de fusión Punto de fusión de

Punto de fusión
experimental de la la cafeína, tomado
Grupo experimental de la
cafeína sublimada de la literatura
cafeína [ºC]
[ºC] [ºC]

1 230,2-231,1
2 229,2-231,2
236,9-237,9 238,0
3 227,1 - 227,4
4 228,0 - 229,0
 RESULTADOS SEMESTRE
34
ANTERIOR
Tabla 8. Resultados puntos de fusión de cafeína cruda y cafeína sublimada.
Punto de fusión Punto de fusión de la
Punto de fusión
cafeína, tomado de la
Grupo experimental de experimental de la
literatura
la cafeína [ºC] cafeína sublimada [ºC]
[ºC]
1 226,0 -
2  -
3 224,6 -
4 237,7 - 238,0
5 225,5 -
6 201,7 -
7 223,3 -
35
Resultados
generales
Tabla 9. Resultados cafeína obtenida.

Semestre Cafeína [gr]

2016-2 0,178
*2017-1 0,225
2018-1 0,347
*Se suma la cafeína sublimada del semestre anterior y el actual para dar el total de
cafeína sublimada.
36
1

2
5 6
4
Banda Origen
1 Sobretono tensión C=O
2 Vibración de tensión del enlace C-H
3 Tensión del grupo C=O
4 Tensión del C=C
5 Flexión del C-H fuera del plano
6 Tensión del C-N
3

Figura 14. Espectro de infrarrojo de la cafeína, tomado de la literatura [7].

37
1
2

Banda Origen
5
1 Sobretono tensión C=O
6
2 Vibración de tensión del enlace C-H
4
3 Tensión del grupo C=O
4 Tensión del C=C
5 Flexión del C-H fuera del plano 3
6 Tensión del C-N

Figura 15. Espectro de infrarrojo de la cafeína.

38
1
2

Banda Origen
1 Sobretono tensión C=O 5 6
2 Vibración de tensión del enlace C-H
4
3 Tensión del grupo C=O
4 Tensión del C=C
5 Flexión del C-H fuera del plano
3
6 Tensión del C-N

Figura 16. Espectro de infrarrojo de la caféína sublimada.

39 RESULTADOS
1
2

Banda Origen 5
1 Sobretono tensión C=O
4 6
2 Vibración de tensión del enlace C-H
3 Tensión del grupo C=O 3
4 Tensión del C=C
5
6
Flexión del C-H fuera del plano
Tensión del C-N
GRUPO 4

Figura 17. Espectro de infrarrojo de la cafeína cruda (extraída de té negro).

40 RESULTADOS
1
2

Banda Origen 5
1 Sobretono tensión C=O
4 6
2 Vibración de tensión del enlace C-H
3 Tensión del grupo C=O 3
4 Tensión del C=C
5 Flexión del C-H fuera del plano
6 Tensión del C-N

Figura 18. Espectro de infrarrojo de la cafeína sublimada (extraída de té negro).

41 RESIDUOS
EXTRACCIÓN

Residuo de lavado de tubos

Residuos orgánicos
(taninos precipitados con
provenientes del té.
gelatina)

RESIDUOS SÓLIDOS
Al lavabo
(Caneca Roja)
42 RESIDUOS
DECANTACIÓN

Residuo de decantación Na2 SO4 hidratado

(Solución de
diclorometano con fase
(residuo de
acuosa) filtración)

RESIDUOS
TÓXICOS SÓLIDOS
(Caneca Roja)
43
RESIDUOS
DESTILACIÓN CON ROTOEVAPORADOR

Diclorometano

DICLOROMETANO RECICLADO
(se recicla)
44
RESIDUOS

SUBLIMACIÓN

Restos de cafeína con alcohol etílico

RESIDUOS FLAMABLES
45 RESIDUOS 2018-1
Tabla 10. Residuos.
Diclorometano
Disolventes halogenados Residuo solido
reciclado
Grupo Diclorometano
Sulfato de sodio
Fase acuosa con diclorometano [mL] reciclado de la
usado [g]
rotoevaporación [mL]

1   
2   
3 265 9 2,265
4   
5   
TOTAL 265 9 2,265
46 RESIDUOS 2017-1
Tabla 11. Residuos.
Diclorometano
Disolventes halogenados Residuo solido
reciclado
Grupo Diclorometano
Sulfato de sodio
Fase acuosa con diclorometano [mL] reciclado de la
usado [g]
rotoevaporación [mL]

1   
2   
3   
4 288 105 6,466
TOTAL 288 105 6,466
 BIBLIOGRAFÍA
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2. Valcárcel Cases M. Gómez Hens A. Técnicas Analíticas de Separación. Editorial Reverté S.A. España.1988.
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10. Fennema R., Owen. Food chemistry. Editorial Marcel Dekker. United States
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