UNIVERSIDAD ANDINA DEL CUSCO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

TEMA:
oxidasa
ASIGNATURA:
MICROBIOLOGÍA MEDICA
INTEGRANTES:
 Altamirano Masias Alexia E.
 Cahuana Mosqueira Brizia Shakira
 Dueñas Alegría Lucía Stephany
 Huaman Soria Iraida Azucena
 Valderrama Quispe Yaqueline L.
¿QUE ES LA OXIDASA?

Es una enzima que cataliza una reacción de

oxidación/reducción empleando oxígeno
molecular como aceptor de electrones.

EN ESTAS
REACCIONES

EL OXIGENO SE REDUCE A:

 PERÓXIDO DE  AGUA
HIDROGENO (H2O2). (H2O)
 PRUEBA DE OXIDASA
 Los citocromos son hemoproteínas
ES UN MÉTODO que contienen hierro y completan el
DIAGNÓSTICO QUE sistema citocromo oxidasa. Existen
EVIDENCIA LA PRESENCIA
distintas variedades de citocromos
DEL COMPLEJO ENZIMÁTICO
DENOMINADO CITOCROMO
(citocromos a1, a2, a3 y 0). Algunas
OXIDASA C. bacterias pueden producir una sola, pero
otras hasta dos o tres a la vez. En este
sentido, la presencia del citocromo a y a3
se conoce como citocromo – oxidasa c.

Estos géneros dan la

Los géneros Neisseria prueba de oxidasa
y Pseudomonas positiva, ayudando a
contienen citocromo diferenciarlos de los
oxidasa c. géneros:
 Acinetobacter
 Stenotrophomonas
respectivamente.
FUNDAMENTO
CARACTERÍSTICAS DEL SISTEMA CITOCROMO OXIDASA C
El sistema citocromo
oxidasa c actúa de la
siguiente manera:
Esto da como resultado que se produzca
energía (ATP) y agua o peróxido de
hidrógeno, dependiendo del sistema de
citocromo oxidasa que posea el
microorganismo.
PRINCIPIO DE LA PRUEBA
utiliza sustancias que
actúan como aceptores
artificiales de electrones
los microorganismos oxidasa
positivos utilizan el oxígeno para
generar energía a través de
la respiración aeróbica.
Este sistema funciona gracias al
transporte de electrones a partir de
sustancias donadoras como el
NADH+ hacia sustancias receptoras,
en este caso el oxígeno.
si el citocromo utilizado
por el microorganismo
es diferente al citocromo
oxidasa c, también dará
la prueba negativa.
REACTIVOS
DISCOS DE OXIDASA
Son discos comerciales
que vienen impregnados
REACTIVO DE NADI con reactivo para la
Está compuesto por α- prueba de oxidasa.
naftol al 1% en alcohol Existen diversas marcas
etílico (etanol al 95%) y comerciales en el
1% de mercado.
aminodimetilanilina. La Su uso es bastante
mezcla se prepara a práctico, ya que no hay
partes iguales y que preparar reactivos
utilizando alcohol frescos, lo que facilita el
etílico absoluto como
trabajo. Los resultados
diluente, hasta
obtenidos son
completar la cantidad
confiables siempre y
suficiente para 100 ml.
cuando los discos se
conserven
adecuadamente.
REACTIVO DE
CARPENTER, SUHRLAND
Y MORRISON
REACTIVO DE OXIDASA Con la solución lista, se
DE KOVACS preparan tiras reactivas
El reactivo de Kovacs se de la siguiente manera:
REACTIVO DE GORDON prepara disolviendo 1 gr se impregnan tiras de
Y MCLEOD de la sustancia antes papel de filtro Whatman
Se prepara como fue mencionada en 50 ml de N°1 de 6-8 cm con el
descrito para el reactivo agua destilada. Se reactivo de oxalato de
de oxidasa de Kovacs, calienta sutilmente dimetil-p-fenilendiamina
sustituyendo por la hasta su disolución al 1%.
sustancia involucrada. total. Esperar al menos
Se dejan secar sin que
Este reactivo es 15 minutos antes de
tenga contacto con
ligeramente más estable usar. metal, guardar en
que el reactivo de (+) cambio de color de la frascos tapa de rosca
oxidasa de Kovacs, colonia a lavanda, que con desecante y
aunque todos los vira rápidamente a conservar en nevera.
reactivos que contienen púrpura casi negro. Estas tiras son estables
p-fenilendiamina son (-) no hay cambio de hasta por 6 meses.
inestables. color de la colonia o
Es el reactivo más
Esta reacción es más
esta toma una ligera estable de todos los
tardía, se interpreta
coloración rosada. Con mencionados, pudiendo
como positiva con la
este reactivo el tiempo durar en solución hasta
aparición de un color de reacción es crucial, 6 meses. Otro punto a
azul –púrpura dentro de se considera una favor es que no colorea
10 a 30 minutos. reacción positiva aquel el medio alrededor de la
cambio de color que colonia, si se usa directo
ocurre entre 5 a 15 seg. sobre la placa.
METODOS
MÉTODO DE LA PLACA MÉTODO INDIRECTO
DIRECTA SOBRE PAPEL
• Se adicionan 2 o 3 • Cortar un trozo de papel de
gotas de cualquiera de filtro (Whatman N°1) a un
tamaño de 6 cm2 y se
los reactivos antes coloca dentro de una placa
mencionados para de Petri vacía.
este fin directamente • Adicionar 2 o 3 gotas del
sobre la o las colonia reactivo de oxidasa de
(s) contenidas en una Kovacs en el papel, tomar
placa de medio de parte de la colonia que se
quiere estudiar con un asa
cultivo que no
de platino o palillo de
contenga glucosa. madera y extenderla en
• Se interpreta el cambio línea recta sobre el papel
o no de color de las impregnado de reactivo.
colonias, no del medio. Interpretar en un lapso de
El tiempo de reacción 5 a 10 segundos.
válido depende del • Con las tiras preparadas
con el reactivo Carpenter,
reactivo utilizado. Suhrland y Morrison se
extiende una colonia sobre
la tira seca. Una misma tira
sirve para probar varias
cepas. Interpretar en 10
seg.
DISCOS (MÉTODO
DIRECTO)
• Humedecer sutilmente los
discos comerciales con
agua destilada estéril y
sobreponer sobre la
colonia a estudiar. Se
recomienda usar las placas
a 35°C, si se usan placas a
temperatura ambiente o
placas refrigeradas la
reacción es un poco más
lenta. Interpretar el cambio
de color entre 10 a 20 seg.
• Se pueden usar colonias
contenidas en agar sangre
o chocolate.
DISCOS (MÉTODO
INDIRECTO)
• Humedecer el disco como.
Colocarlo en una placa de
Petri vacía. Tomar cantidad
suficiente de la colonia a
estudiar con un asa de
platino o palillo de madera
y colocar sobre el disco.
Interpretar el cambio de
color entre 10 a 20 seg.
Las tiras presentan una
estabilidad muy superior
comparado con el ensayo
tradicional de laboratorio,
gracias a que el reactivo
tetrametil-p-fenilendiamina
se encuentra fijado a la
almohadilla.
 CONCLUSIÓN
 El género Neisseria y Acinetobacter en ocasiones se parecen
mucho morfológicamente porque a pesar de que el género
Acinetobacter es un bacilo Gram negativo, a veces puede
adoptar una forma cocoide y distribuirse en pares, simulando
el género Neisseria. En este caso la prueba de oxidasa es
realmente útil. El género Neisseria es positiva y
Acinetobacter negativa.
 Sin embargo, el género Moraxella es muy similar al género
Neisseria y ambas dan reacción positiva; es por ello que
siempre hay que realizar pruebas de fermentación de
carbohidratos para la identificación definitiva.
 Por otra parte, la prueba de oxidasa es útil para diferenciar
una bacteria perteneciente a la familia Enterobacteriaceae
(todos oxidasa negativa) de otros fermentadores, tales como
el género Pasteurella, Aeromonas, Plesiomonas (oxidasa
positivos).
 El género Vibrio y Helicobacter también son oxidasa
positivos.
 referencias
BIBLIOGRÁFICA
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2. oogle.com/search?biw=1366&bih=576&tbm=isch&sa=1&ei=0rOQXa6LDqKV_QbIm6OIBQ&q=prueba+de+
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3. https://www.who.int/drugresistance/infosharing/WHO-CDS_CSR_RMD_2003_6_Manual_Laboratorio.pdf
4. https://www.lifeder.com/prueba-de-oxidasa/