ANÁLISIS DE BRUCELLA Y

SALMONELLA PRESENTES
EN LA LECHE DE
VACA, EMPLEANDO
ESPECTROSCOPIA
INFRARROJA.
BRUCELLA
La Brucelosis bovina es una zoonosis de declaración

obligatoria y la de mayor difusión en el mundo según la

Organización Mundial de la Salud OMS. Esta enfermedad

ocasiona pérdidas importantes en la producción, reproducción

del ganado lechero y en humanos afecta la salud.

SALMONELLA
La infección por Salmonella, o salmonelosis, es una
enfermedad trasmitida por los alimentos y causada por
bacterias del género Salmonella. La mayoría de las
infecciones se contraen a través de alimentos
contaminados (generalmente carne de ternera, carne de
aves de corral, huevos o leche).
• En este trabajo se presenta un análisis de la leche de vaca
proveniente de granja, la cual ha sido contaminada
intencionalmente con los microorganismos patógenos Brúcela
y Salmonella.
• El análisis de las muestras contaminadas se realizó empleando
la técnica de espectroscopia Infrarroja por Transformada de
Fourier.
ADQUISICIÓN DE DOS MICROORGANISMOS
SALMONELLA SPP. Y BRUCELLA SPP.

BRUCELLA

• Siembra: en placas Petri

• Agar al 2%
• En una campana de flujo laminar nivel 2
• 37° por 48 horas porque requiere por lo
menos 5% de CO2 para el crecimiento.
 Procedimiento
SALMONELLA: MEDIO: LB. 27° POR 24H.

Luego:

• Crecimiento bacteriano en un tubo falcón

con 5ml de H2O destilada con
formaldehido al 5%.
• Agitación moderada por 48h a 20°C
• El sedimento se lavará con agua destilada
estéril y se centrifuga a 7500rpmx 20´.
 Procedimiento

• Densidad óptica para Brucella fue 2.5 y

salmonella 2.4.
• Luego se inocularon en la leche bronca.
• Luego de la contaminación intencional, se
realizó el análisis con espectroscopía.
ESPECTROMETRÍA INFRARROJA
CON TRANSFORMADA DE
FOURIER (FTIR)
• Es una técnica que proporciona un
espectro de reflexión de las
bandas de los grupos funcionales
de las sustancias inorgánicas y
orgánicas, por lo cual es posible
realizar una identificación de los
materiales.
• El equipo dotado de una sonda
con fibra óptica permite el análisis
directo de la superficie del objeto
de estudio.
Fuente de Unam-Andreah
• Aplicada a materiales biológicos que proporciona un reflejo de la
composición química y estructural, representados por bandas
constituidas por una superposición de picos originados por la absorción
de sus constituyentes (proteínas, carbohidratos, lípidos y otros
compuestos de bajo peso molecular), representando “huellas digitales”
altamente específicas (Nichols 1995; Naumann 2000).
• Ha sido empleada a nivel mundial en el análisis de fluidos humanos,
bacterias, hongos, virus, células individuales, tejidos, secciones de
tejidos, etc., lo que ha permitido el diagnóstico de diversas
enfermedades infecciosas, procesos oncológicos y odontología
(Naumann 2000; Naumann 2008).
• En el estudio de microorganismos revelan una imagen de la composición
química de la pared celular, membranas plasmáticas, citoplasma,
biopolímeros y moléculas pequeñas intracelulares.
RESULTADOS

• Se observan regiones
carbohidratos (900-
1100cm-1) y proteínas
(1500-1700cm-1)
• Picos característicos a
los enlaces C – H
(2750-3100cm-1) y la
región de moléculas de
agua (3100-3700cm-1)
Leche contaminada
con Brucella;
B1,B2,B3,B4 y B5, en
los que se observan
cambios y forma de
línea principalmente
en la región que
comprende la Huella
dactilar (800-
1700cm-1)
Se observan
cambios
considerables en
la zona de lípidos
(2800-3000 cm-
1)
• Leche contaminada con
Salmonella S1, S2, S3, S4
y S5. Estuvo basado en el
cambio en forma de línea
por presencia de grupos
funcionales que integran
las distintas muestras.
• Se observa la región
dactilar.
Dentro de los cambios
que se observan de
manera específica
podemos señalar la
zona de las proteínas
(1500-1700cm-1)
• Se observan diferencias que son más evidentes para la región
de las proteínas de la leche en las que se observan dos bandas
ensanchadas en 1540 y 1645 cm-1, a diferencia del espectro
de las bacterias puras, que muestran bandas en posiciones
muy similares, pero más definidas y un ancho medio menor al
de las bandas de la leche cruda.
DISCUSIÓN

De los resultados obtenidos mediante el método

de espectrocospia de Fourier se puede deducir
que los microorganismos como la Salmonella y
Brucella se muestran principalmente en las
regiones espectrales de los carbohidratos y
proteínas.
QUESO NO PASTEURIZADO

• A comparación de otros estudios como en quesos

frescos no pasteurizados se analizaron presencia de
microorganismos como Brucella y Samonella
• Se utilizo 52 muestras de queso fresco no
pasteurizado, 46 se detecto Brucella y el restante
Salmonella.