Вы находитесь на странице: 1из 64

Микробиология и

лабораторная
диагностика менинго-
и гонококковых
инфекций
Классификация (по Bergey ,2001):
Семейство – Neisseriaceae
Род- Neisseria, Kingella, Chromobacterium,
Aquaspirillum
Род Neisseria включает 2 вида патогенных для
человека бактерий N. gonorrhoeae şi
N.meningitidis.
Комменсальные виды, находящиеся на
слизистой оболочке дыхательной и
пищеварительной систем, конъюнктиве глаза
,влагалища, дистальной части уретры :
Neisseria flava; Neisseria flavescens; Neisseria
subflava; Neisseria perflava; Neisseria lactamica;
Neisseria mucosa; Neisseria pharyngis;
Neisseria polysaccharea; Neisseria sicca;
Neisseria spp.. В некоторых случаях ведут
себя как патогенны-оппортунисты.
Общие характеристики вида Neisseria
- Грамотрицательные кокки,
ассоциированные в диплококки , иногда в
тетрады. Неподвижны.
- Карбоксифильные бактерии ,с
дыхательным метаболизмом.
- Каталаза и оксидаза позитивные.

- Находятся на слизистой человека и


животных.
- Патогенные виды культивируются и
требуют особых условий для роста
Neisseria meningitidis

1884 – Маркиафава и Келли обнаружили


грамотрицательные диплококки в
спинномозговой жидкости пациента с
менингитом
1887 – Антон Вейксельбаум изолировал бактерии
из СМЖ и устанавливает их этиологию
Бактерии колонизируют носоглотку у большого
количества процента здоровых носителей (5-
30%). Носительство длится от нескольких дней
до нескольких месяцев.
В некоторых случаях может вызывать септицемию
и/или спинномозговой менингит.
Морфобиологические
характеристики
N.meningitidis представлена в форме неподвижных
кокков , грам-,в мазке группируются в виде
диплококков с ровной поверхностью ,иногда с
небольшими углублениями (бобовидная
форма). Имеет капсулу и фимбрии .
Антигенная структура N.meningitidis
1. Полисахаридные АГ капсулы можно
разделить на 13 серогрупп: A, B, C, D, X,
Y, Z, 29E, W135, H, I, K и L. Чаще
встречаются серогруппы A, B, C, Y и
W135.
2. Белковые АГ внешней мембраны (5
главных белков) позволяют определить
серологические типы
3. Липоолигосахаридные АГ (серотипы)

Данные антигены являются


эпидемиологическими маркерами
Характеристика культуры
N.meningitidis –карбоксифильный
микроорганизм ,требовательный к
внешним условиям при культивации.
Растёт только на средах обогащения с
кровью или сывороткой – кровяной агар,
агар-сыворотка, агар-шоколад,среда
Мюллера-Хинтона – при нагревании в
термостате.
Колонии типа S, маленькие (1-2 mm), с
гладкими краями, неровный рельеф,
прозрачные, появляются через 24-48 часов
инкубации при 37С во влажной
атмосфере,обогащенной 5-10% CO2.
Биохимическая активность
N.Meningitidis образует каталазу и
оксидазу, расщепляет глюкозу и
мальтозу без образования газа.
Резистентность к факторам внешней
среды : N.meningitidis –чувствительна к
факторам внешней среды ,особенно к
высушиванию,солнечному
свету,изменениям рН и замораживанию;
температуры до 37 C вызывают автолиз
бактерий .
Факторы патогенности
1. Адезины (фимбрии и белки ME)
2. Капсула – антифагоцитарная роль
3. sIg A-протеаза – расщепляет sIg A на
поверхности слизистой оболочки
4. Эндотоксины – запускают секрецию
цитокинов
5. Рецепторы –захватчики железа
(мембранные рецепторы для
трансферрина и
лактоферина,позволяющие захватывать
железо из этих субстанций или прямо из
гемоглобина)
 Эпидемиология менингококковых
инфекций
Источник инфекции – больные менингитом,
ринофарингитом менингококковой природы или
носители бактерии
Путь передачи– воздушно-капельный,через
загрязненные предметы(игрушки…)
Патогенез
Менингококк прикрепляется на эпителий
носоглотки , вызывая местную инфекцию
(ринофарингит), или бессимптомную инфекцию.
В случае уменьшения резистентности организма
, бактерия проходит в подслизистый слой , а
потом в кровеносное русло (менингококкцемия).
Данная транслокация фаворизируется
имеющимся ринофарингитом , в особенности
вирусным.
 В общем кровотоке ,благодаря капсуле
бактерия защищена от иммунной
системы человека. Через сосудистое
сплетение менингококк проходит в
менингиальное пространство ,вызывая
спинномозговой менингит .
 С исчезновением материнских антител
N. meningitidis становится главным
возбудителем менингитов у
новорождённых. В последствие,
появляется менингококковый иммунитет ,
который снижает общую заболеваемость
менингитом .
Клинические формы менингококковых
инфекций
1. Ринофарингит (самая встречаемая
форма, часто асимптоматичная)
2.Септицемия (менингококкцемия).
Представляет 2 стадию заболевания.
Осложнения: молниеносная форма
менингококкцемии (синдром
Уатерхауса-Фридриксена) в 10-20%
случая (кровотечение в
надпочечниках , эндотоксический
шок , пурпура, ДВС-синдром)
3. Менингит спинномозговой
эпидемический
Предшествует фарингит с бактериемией.
Характеризуется лихорадкой , головной
болью, рвотой, светобоязнью , кожной
гиперэстезией. Иногда встречается
мышечная контрактура . Часто
сопровождается губным герпесом
,артралгиями. Поражение нервной
системы выражается в потере сознания ,
появления бреда , сонливости , иногда
кома, парезы и параличи, конвульсии.

В отсутствии лечения смертность


достигает 80-90% случаев,оставшиеся 10-
20% - имеют серьёзные поражения
нервной системы.
4. Другие формы: бронхолёгочные
инфекции, эндокардиты , перикардиты,
остеомиелиты , артриты
,конъюнктивиты,ангины.
 Лабораторная диагностика
менингококковых инфекций
Материал для исследования : в
зависимости от клинической формы
берется содержимое носоглотки , кровь ,
СМЖ, суставная жидкость.
Пробы берутся до назначения антибиотиков
и доставляются в короткий срок в
лабораторию , пробы должны быть
защищены от солнечного света и
перепадов температур. По необходимости
используется среда Стюарта.
 Прямой метод диагностики
Исследование СМЖ является первичной
при диагностике менингита. Материал
собирается в асептических условиях с
помощью поясничной пункции , в
объёме 4-6 мл в 2 пробирки.
СМЖ мутная, содержит тысячи или
десятки тысяч клеточных элементов ,
с преобладанием 95-100%
нейтрофилов.Эта реакция
сопровождается гипогликорахией ,
гиперальбуминорахией и кислым pH
из-за накопления пировиноградной и
молочной кислоты.
I. Микроскопический метод для
седиментации СМЖ
a) Окрашивание мазков
метиленовым синим или по
Граму: диплококки Грам- ,
бобовидной формы внутри- и
внеклеточные ,бактериальная
плотность снижена,проба
отрицательная в 1/3 случаев.
Наличие лейкоцитов в большом
количестве означает более
благоприятный прогноз.
b) РИФ
II. Бактериологическое исследование
 Седиментация из СМЖ засевается на обогощённых
средах как кровяной агар , шоколадный агар, среда
Мюллера нагретый до 37 C.
 Носоглоточный экссудат засевается сразу после
взятия пробы на среду с добавлением антибиотиков(
линкомицин , ванкомицин , ристомицин ) для
ингибирования роста других бактерий в экссудате.
 Кровь засевается на жидкую среду (сахарный
бульон 2% с 5% долей крови). Исследования
проводятся каждый день на протяжении 5-7 дней
через субкультуры.
Идентификация и дифференциация комменсальных
нейссерий базируется на морфологическом аспекте -
на мазках по Граму, тесте на оксидазу , который
является положительным, расщеплении глюкозы и
мальтозы, серологическая идентификация - РА с
иммунными сыворотками соответствующими группе.
III. Прямая идентификация в крови и в СМЖ a
капсульных полисахаридных антигенов,
используя реакции обратного
иммуноэлектрофореза, ELISA, латексной
агглютинации и коагглютинации с групповой
специфической антисывороткой.
IV. Идентификация нуклеиновых кислот

Непрямая диагностика
Серологическая диагностика. Титруются Ат
антименингококковые с помощью РА sau РНГА.
Диагностическая значимость невысокая.
Лечение назначается в срочном порядке , сразу
после госпитализации и проведении
люмбальной пункции.
Лечение etiotrop заключается в назначении
антибиотиков на срок 7-10 дней :пенициллин G,
ампициллин, хлормафеникол, цефалоспорины.
 Специфическая профилактика : активная иммунизация –
полисахаридная вакцина антименингококковая
моновалентная или поливалентная (A, C, Y, W),которую
вводят под- или внутрикожно, после 3 месяцев (для группы
A), предоставляя защиту на 95-100% на срок 2-3 года;
капсулярный полисахарид типа В – гомополимер сиаловый
кислоты и не является иммуногеным для человека.
 С июня 2012 в США – комбинированная вакцина
(N.meningitidis тип C и Y и Haemophilus influenzae b) – для
детей от 6 недель до 18 месяцев
Люди, вступавшие в контакт с больным находятся под
наблюдением в клинике на срок 10 дней.
Хемопрофилактика
(рифампицин,ципрофлаксацин ,цефтриаксон) применяется в
семьях или в дошкольных коллективах
Носители подвергаются лечению.

Случаи менингита и менинкококкцемии объявляются через 24


часа после обнаружения
МИКРОБИОЛОГИЯ И ЛАБОРАТОРНАЯ
ДИАГНОСТИКА ГОНОРЕИ
Гонорея является специфической формой
уретрита, с массивным выделением гноя, чаще у
мужчин , чем у женщин.
Tермен “гонорея" впервые ввёл Гален во II веке и
означает “выделение семени".
Долгое время гонорею и сифилис не могли
отличить друг от друга. Paracelsus (1530) считал,
что гонорея является ранним симптомом
сифилиса . Эта путаница была подтверждена
английским учёным John Hunter, в 1767. Hunter
ввёл себе гной от больного гонореей и заболел
сифилисом!
Возбудитель гонореи, Neisseria gonorrhoeae, была
описана впервые Albert Neisser в 1879 в гное
больного гонореей.
Микроорганизм был изолирован в чистой культуре в
1882 Loeffler –ом в сыворотке и этиологическая
роль была установлена позже на добровольцах
(согласно постулатам Коха)
 Neisseria gonorrhoeae
Морфобиологические характеристики
Neisseria gonorrhoeae представляет собой
грамотрицательный кокк с диаметром 0,6-
1,0 мкм, обычно наблюдаемый попарно с
смежными вогнутыми поверхностями.
Патологические выделения (гной,
экссудат) часто находятся внутриклеточно
в полиморфноядерных лейкоцитах
(нейтрофилах). Неподвижен. Он имеет
капсулу и фимбрии длиной в несколько
микрометров. В зависимости от наличия
фимбрии известны четыре типа N.
gonorrhoeae: T1, T2, T3, T4
Культуральные характеристики
- Гонококк возможно культивировать. Для его
изоляции используются среды обогащения с
сывороткой крови, дрожжевым экстрактом,
асцитической жидкостью и т. Д. (Среда HYL,
среда Thayer-Martin, шоколадный агар). Культуры
растут при 35-36 ° C, при влажной атмосфере с 5-
10% CO2. Небольшие колонии (0,5-1 мм),
гладкие, полупрозрачные появляются через 24-
48 часов.
Согласно колониям, можно описать четыре типа:
Колонии типа I и II появляются изолировано,
соответствуют вирулентным штаммам, носители
пилей (фимбрий),
Колонии III и IV типов, возникающие при
пересеве, более крупные, соответствуют
штаммам без пилей
Антигенная структура
- 3 главных белка с ME (PI/ Por, PII/ Opa,
PIII) определяют различные
серотипы(варианты). PII проявляет
большую антигенность, даже в пределах
одного штамма.
- Липополисахарид в клеточной стенке
- Белок фимбрий, с большой антигенной
вариабельностью
Биохимические характеристики:
гонококки являются оксидазо-
положительными, окисляют глюкозу до
кислоты, не затрагивая мальтозу
Факторы патогенности
1. Адезины (PilE fimbria, некоторые внешние
мембранные белки - PII / Opa). Опа также индуцирует
трансцитоз гонококков в эпителиальных клетках
2. IgA-протеазы с ролью в колонизации слизистых
оболочек
3. Белки ME (PI / Por), которые ингибирует образование
фаголисосомы (выживание и размножение
гонококков в фагоцитах)
4. Эндотоксин (устойчивость к комплементарным и
антимикробным пептидам, секреция цитокинов)
5. Системы захвата железа (мембранные рецепторы
для трансферина и лактоферина)
6. Быстрые антигенные изменение адгезионных
фимбрий и белка Opa (конверсия, гипермутация,
трансформация)
7. Капсула из сиаловой кислоты
Designation Location Contribution
major fimbrial
PilE initial binding to epithelial cells
protein
outer membrane
P.II (Opa) contributes to invasion
protein
outer membrane may prevent phagolysosome formation in
P.I (Por)
porin neutrophils and/or reduce oxidative burst
outer membrane
elicits inflammatory response, triggers
LOS lipooligosaccharide
release of TNF

elicits formation of ineffective antibodies that


outer membrane
P.III (Rmp) block bactercidal antibodies against P.I and
protein
LOS
outer membrane
Tbp1 and
receptors for iron acquisition for growth
Tbp2
transferrin
outer membrane
Lbp receptor for iron acquisition for growth
lactoferrin
Устойчивость во внешней среде
N. gonorrhoeae это нежный м/о, чувствительны к
изменениям температуры, высыханию, УФ-
лучам и другим условиям внешней среды.

Гонококк ингибируется хлопком в тампонах


(гипохлорит ...). Для сбора образцов
используются тампоны с альгинатом Са или из
дакрона.
 Эпидемиология гонококковой инфекции

Источник инфекции– единственный


источник - пациент с гонореей,
особенно с бессимптомной инфекцией
Передача
– у взрослых – исключительно через
половой контакт;
- У новорожденных– при прохождении
через родовой канал матери
 Патогенез инфекции вызванной
N.gonorrhoeae
Гонококковая инфекция обычно ограничивается
слизистыми оболочками с столбчатым эпителием.
Чаще всего вовлечены: уретра, шейка матки,
прямая кишка, глотка и конъюнктива. Плоский
эпителий влагалища не восприимчив к инфекции N.
gonorrhoeae. Однако у девочек гонококк может
вызвать вульвовагинит.
Инфекции слизистой оболочки обычно
характеризуются гнойными выделениями.
Патогенез гонореи
С помощью фимбрий и белков ME (Opa)
гонококки прикрепляются к клеточным
ворсинкам столбчатых эпителиальных без
реснитчатых клеток .
После их проникновения в клетку (путём
эндоцитоза), вакуоль переносится к
основанию клетки, где бактерии
высвобождаются экзоцитозом в
субэпителиальную ткань.
 Во время инфекции бактериальный
липополисахарид (LPZ / LOZ) и
пептидогликан высвобождаются путем
автолиза клеток. Оба вещества активируют
комплемент по альтернативному пути, LPZ
также стимулирует продуцирование
фактора некроза опухоли (TNF), который
вызывает гибель клеток. Нейтрофилы
немедленно привлекаются к вспышке и
поглощают бактерии. Многие гонококки
способны выживать внутри фагоцитов до
их смерти, с высвобождение поглощённых
бактерий.
 Специфика гонореи у мужчин
В большинстве случаев протекает остро
(85-95%), с такими клиническими
проявлениями, как:
1. Уретрит (бело-жёлтые уретральные
выделения, боль и жжение при
мочеиспускании, дизурия)
2. Простатит

3. Орхит

4. Эпидидимит
 Particularităţile gonoreei la femei
В большинстве случаев инфекция протекает
(80% случаев) с преходом в хроническую
форму.
Formele clinice:
1. Цервицит (с или без лейкореи) - наиболее
распространенная форма
2. Уретрит
3. Бартоленнит
4. Сальпингит (опасность бесплодия,
внематочной беременности)
5. Оварит
6. Эндоетриит
7. Перитонит
Другие клинические проявления:
 Фарингит и гонококковый проктит
 Распространение гонококковой инфекции (1-3%)
вызывает артрит, поражения кожи, септицемию,
эндокардит, менингит.
 Штаммы N. gonorrhoeae вызывающие
диссеминированные инфекции, обычно устойчивы
к комплементу и бактерицидной реакции
сыворотки.
 У новорожденных гнойный конъюнктивит с
быстрым распространением инфекции в глазное
яблоко (офтальмия новорожденный) может быть
вызван загрязнением при прохождении через
родовой канал
 Лабораторая диагностика гонореи
Образцы на исследования:
- У мужчин - уретральные выделения
- У женщин – выделения из уретры влагалища, из
внутришеечных или вульварных желёз.
- Можно исследовать содержимое поражений
кожи, суставного экссудата, носоглотки, крови,
конъюнктивального гноя, LCR, ректального мазка.
- Для сбора этих секретов используется тампон с
альгинатом Ca (или бактериологическая петля),
который затем немедленно отправляется в
лабораторию для тестирования (при
необходимости используется транспортная среда
Стюарта с тиогликолятом и активированным
углем).
 Если выделения бедные, требуется
стимулировать секрецию (реактивация,
вызывание):
- Продуктами питания (с алкогольными
напитками - пивом)
- Химически (капли с с нитратом Ag – sol.
1% в уретру, 10% в шейку матки)
- Биологически (прививка гоновакциной,у
женщин сбор серкетов сразу посе
менструации)
- Механически (массаж простаты)
- Термически (диатермия или
индуктотерапия)
 Методика диагностики
1. Микроскопическая диагностика
(показательно только в случае
острого уретрита у мужчин).
- В уретральных мазках, окрашенных
по грамму или метиленовым синим
наблюдаются грам- диплококки,
расположенные внутри- или
внеклеточно.
- РИФ
 Бактериологическое обследование (обязательно
в бессимптомных или хронических формах)
 Gonococcus - очень хрупкая бактерия, образцы
необходимо немедленно отдать на посев или
использовать адаптированную транспортную
среду. Для выделения используются среды
обогащения (например, среда Thayer-Martin,
которая богата факторами роста и содержат
антибиотики (ванкомицин, колистин,
амфотерицин), которые ингибируют другие
бактерии из образца, среда шоколад-агар).
Колонии появляются в через 18-24 ч инкубации в
атмосфере с CO2.
Идентификация N.gonorrhoeae выполняется по
морфотинкториальным признакам, на основе
колоний, выращенных на селективных средах.
Оксидазо +, расщепляет только гдюкозу до
кислоты. Сероидентификация с моноклональным
Ат в реакции коагглютинации.
 Прямое выявление N. gonorrhoeae в
образцах – такие техника, как ELISA
или РИФ

 Выявление нуклеиновых кислот -


генетическая гибридизация или
амплификация

 Серологическое исследование
(серодиагностика)
РСК
 Лечение гонореи
Антибиограмма незаменима для
эффективного лечения!
- пенициллины
- цефалоспорины третьего поколения
- фторхинолоны
- котрикомоксазол
 Профилактика гонореи
- Неспецифическая (индивидуальная или общая)
- Профилактика гонококковой офтальмии у
новорожденных проводится путем
интраконъюнктивального закапывания 1%
раствора нитрата Ag