Los elementos genéticos móviles son elementos

capaces de trasladarse de un lugar a otro insertándose

dentro del DNA.

 Hay cinco maneras diferentes en que el DNA

foráneo (portador de información) pueda
introducirse a una célula bacteriana:
 Transformación: Es la captación de fragmentos
de DNA desde el medio circundante.
 Conjugación: Es la transferencia directa de DNA
de una célula a otra.
 Infección viral: Se realiza mediante la inyección
del ácido nucleico viral. Todos estos mecanismos se
conocen como trasferencia
 Transducción: Es la transferencia del material horizontal de genes. Las
genético no viral de una célula a otra por medio bacterias portadoras
transmitirán plásmidos,
de un virus. transposones o profagos
adquiridos a las células
 Transposición: Es la inserción de material hijas durante la división
genético en forma de transposones celular por trasferencia
vertical.
 Los plásmidos son moléculas
de ADN extracromosómico circular o lineal
que se replican y transcriben
independientes del ADN cromosómico.
 Están presentes normalmente en bacterias, y
en ocasiones en organismos eucariotas como
las levaduras.
 Su tamaño varía desde 1 a 250 kb.
 El número de plásmidos puede variar,
dependiendo de su tipo, desde una sola
copia hasta algunos cientos por célula
 Las moléculas de ADN plásmidico, adoptan
una conformación tipo doble hélice al igual
que el ADN de los cromosomas, aunque, por
definición, se encuentran fuera de los
mismos.
 A diferencia del ADN cromosomal, los
plásmidos no tienen proteínas asociadas.
Son unidades de información genética extra cromosómicos que codifican información no esencial para la viabilidad
de la bacteria y que se replica de forma independiente del cromosoma.

Son DNA de doble cadena, circular, superenrollado.

Los plásmidos se caracterizan por; su replicación autonoma, aportar genes para el metabolismo,virulencia, resistencia
a antibiótico.

Algunos pueden incluirse en el genoma bacteriano (episoma).

Muchas cualidades portadas por plásmidos tienen interés clínico

La resistencia a antibióticos,la producción de toxinas,la síntesis de estructuras necesarias para la adhesión o

colonización.

Algunos plásmidos determinan resistencia antibiótica, se les deniminado"plásmidos R".


Un epísoma es un plásmido que
puede integrarse por sí mismo
al ADN cromosomal del
organismo huésped.
Este término no se usa más en
plásmidos, debido a que ahora
está claro que una región
homóloga con
el cromosoma elabora un
plásmido dentro de un epísoma.
puede mantenerse en contacto
por un largo tiempo, ser
duplicado en cada división
celular del huésped y volverse
parte básica de su mapa genético.
Epísomas
Los plásmidos usados en
ingeniería genética son llamados
“vectores”. Estos son usados para
transferir genes desde un
organismo a otro y contienen un
marcador genético confiriendo un
fenotipo el cual puede ser
seleccionado a favor o en contra.

La mayoría también contienen un

polivinculador o sitio de clonado
múltiple ,el cual es una pequeña
región que contiene los sitios de
restricción más comúnmente
usados, permitiendo una fácil
inserción de fragmentos de ADN
en ese lugar.
 TIPOS
 Según:
1) Por su habilidad de transferirse a otra bacteria

Plásmidos conjugativos: contienen “tra-genes”, los cuales ejecutan

complejos procesos de conjugación, como la transferencia sexual de
plásmidos a otra bacteria.

Plásmidos no-conjugativos: son incapaces de iniciar una conjugación, de

allí que ellos pueden transferirse únicamente con la asistencia de los
plásmidos conjugativos y lo hacen “por accidente”.

“Mobilizables” los cuales llevan solo un subtipo de genes requeridos

para la transferencia. Ellos pueden “parasitar” un plásmido conjugativo,
transfiriéndose a una alta frecuencia solo en su presencia.
2) Por su función:

Plásmidos de resistencia: Col-plásmidos:

Plásmidos de fertilidad:
Los cuales contienen tra-
genes, ellos son capaces de
conjugarse.
Los cuales contienen genes Los cuales contienen genes
que pueden constituir que codifican (determinan
resistencia contra la producción de) colinas y
antibióticos o venenos. proteínas que pueden matar
Conocidos como Factores R. a otra bacteria.

Plásmidos degradativos:
Los cuales habilitan la Plásmidos virulentos:
digestión de sustancias Los cuales convierten la
inusuales como tolueno o bacteria en un patógeno.
ácido salicílico.
 ESTRUCTURA DE LOS PLÁSMIDOS

Las formas de ADN

 se encuentran principalmente en forma

superenrollada en las bacterias.
 Las formas de ADN pueden visualizarse
como círculos relajados o superenrollados.

 Pueden identificarse por electroforesis o por

centrifugación.
 En estos casos, la estructura compactada del
ADN superenrollado aumenta su migración
electroforética y su velocidad de
sedimentación, lo cual permite diferenciarlo
del ADN circular relajado o del ADN lineal.
 Las topoisomerasa I y II
 La topoisomerasa II tiene la propiedad de
transformar un ADN circular relajado en
superenrollado.
 Este proceso implica pasar de una forma sin
almacenamiento de energía a una forma con
alto contenido energético, y por lo tanto es
necesaria la presencia de (ATP).
 Por el contrario, la transformación de ADN
superenrollado en relajado con subsecuente
liberación de energía es catalizada
directamente por la topoisomerasa I sin
necesidad de ATP.
 La ADN girasa es una de las topoisomerasas I.
La ADN girasa
 La ADN girasa, tiene una función muy
importante en la modulación del
estado topológico del ADN, pues
regula su estructura superhelicoidal.
 A diferencia de la topoisomerasa 1, la
ADN girasa, corta las dos cadenas de
la doble hélice del ADN; y actúa en la
replicación del ADN.
 Mientras, la topoisomerasa 1 corta una
cadena del ADN para aliviar el
superenrrollamiento, y actúa durante
la transcripción del ADN.
 El ADN plásmido puede aparecer en uno de cinco conformaciones, las
cuales (para un tamaño dado) corren a diferentes velocidades en un gel
durante electroforesis. Las conformaciones se muestran abajo en orden
de movilidad electroforética (velocidad para un voltaje dado), del más
lento al más rápido:

•Mellado abierto circular: el ADN tiene un solo corte filamentario.

•Lineal: ADN tiene terminales libres, ya sea porque los filamentos fueron cortados o porque el
ADN era linear in vivo.
•Circular relajado: ADN que interactúa completamente con ambos filamentos sin cortar, pero
que ha sido enzimáticamente “relajado”. Se puede modelar este dejando un cordón relajado
y luego conectándolo a sí mismo.
•Superespiral desnaturalizado:
ADN como el ADN superespiral
o superenrollado, pero que tiene
regiones sin unir que lo hacen
ligeramente menos compacto;
esto resulta de una excesiva
alcalinidad durante la
preparación del plásmido.
•ADN superespiral: Es un ADN
totalmente intacto con los
filamentos sin cortar, y con forma
de remolino, resultando en una
forma compacta.
 La clonación del ADN

Técnica fundamental para la obtención de grandes

cantidades de un fragmento de ADN concreto.

Este fragmento primero debe ser unido a un ADN vector

antes de ser clonado.

El ADN vector es un vehículo que se utiliza para transportar

ADN extraño a una célula huésped, el vector contiene
secuencias que le permiten duplicarse dentro de esta célula
huésped.

En una técnica el segmento de ADN que va a ser clonado es

introducido a un plásmido y luego unido a una célula
bacteriana, en ese momento la bacteria capta el plásmido
del medio.
 Genética
Son comúnmente usados para multiplicar (hacer muchas
copias de) o como genes particulares expresos.

El gen a ser replicado se inserta en copias de un plásmido el cual

contiene genes que hacen células resistentes a un antibiótico en
particular.

En el paso siguiente el plásmido es insertado en la bacteria por medio

de un proceso llamado transformación.

Luego, la bacteria es expuesta a un antibiótico particular.

Solo la bacteria que toma copias del plásmido sobrevive al antibiótico

debido a que el plásmido lo hace resistente.

En particular, los genes protectores son expresados (usados para hacer

proteína) y la proteína expresada evita la acción del antibiótico.

De esta forma, los antibióticos actúan como un filtro que seleccionan

únicamente la bacteria modificada.

Ahora, estas bacterias pueden ser cultivadas en largas cantidades,

cosechadas y el plásmido de interés puede ser aislado.
Fabricar grandes cantidades de proteínas

Se deja crecer la bacteria que contiene el

plásmido que encierra al gen de interés.

Solo como la bacteria produce la proteína

que le confiere si resistencia a los
antibióticos, este también puede ser usado
para producir proteínas en grandes
cantidades desde el gen insertado.

Esta es una forma barata y fácil de producir

genes o proteínas que este codifica de
forma masiva, como por ejemplo insulina, o
inclusive antibióticos
 Los plásmidos son usados para purificar una secuencia
específica, ya que ellos pueden ser fácilmente
purificados del resto del genoma. Para su uso como
vectores y como clonadores moleculares, a menudo los
plásmidos necesitan ser aislados.

 Hay muchos métodos de aislar ADN plasmídico de una bacteria,

los arquetipos de los cuales son el miniprep y el maxiprep
 Miniprep
 Suele usarse desde una
perspectiva analítica.
 El resultado es una cantidad de
ADN plasmídico (10-30μg), el cual
es suficiente para análisis usando
digestión restrictiva, para
secuenciación o para algunas
técnicas de ingeniería genética.
Maxiprep
 Se cultivan volúmenes mucho más
grandes de bacterias en suspensión.
 Esencialmente este es un escalado de la
preparación mini-prep, el cual es
seguido por una purificación adicional.
 Esto resulta en una cantidad
relativamente grande (0,5 -1 mg) de
ADN plásmido muy puro.
 Los cósmidos son vectores de
clonación, que han sido
ampliamente usados en la
elaboración de genotecas de
DNA genómicos de gran
tamaño, ya que permiten la
introducción de insertos de
DNA de hasta 45 kb, el doble
que los vectores derivados de
la eliminación de parte del
genoma del fago λ, los
fagémidos.
 Realmente un cósmido
consiste en un plásmido al
cual se le han adicionado
unos segmentos del genoma
de un bacteriófago, el fago λ.
Combinan características útiles de plásmidos y del bacteriografo λ

Permite la clonación de fragmentos más largos

Moléculas de ADN pequeñas ( 5000 a 7000 pb)

Origen de replicación plasmídico

Uno o más marcadores seleccionables

Un número de sitios de restricción únicos donde se puede insertar el ADN foraneo

Un sitio cos, no contiene ningún gen más del bacteriografo

 Del plásmido, el ori C y un
gen de resistencia a un
antibiótico, esto depende del
tipo de plásmido del cual
derive y, por tanto puede
contener más segmentos
como por ejemplo el gen
LacZ, que permite la selección
blanco/azul de las colonias.
 Del fago λ, los extremos COS,
extremos complementarios
del genoma del fago y que se
emplean para la
recircularización del mismo.
 Estos vectores facilitan el trabajo
porque permiten el empaquetamiento
in vitro de las secuencias entre dos
extremos COS y usar los fagos
empaquetados para transfectar cepas
de E. coli, consiguiendo un plásmido en
la bacteria, ya que el cósmido se
recirculariza al entrar gracias a los
extremos COS.
También tiene genes de
resistencia a antibióticos de
origen plasmídico, que ayudan
en la identificación de células
huéspedes que contienen los
cósmicos recombinantes.

Después de insertar
fragmentos de dna, los
cósmidos recombinantes se
empaquetan en la cápside
proteica de λ para formar
partículas fágicas infectivas.
Una vez que en la célula
huésped, el cósmido se replica
como plásmido.
 a) Según los sitios de múltiple clonamiento (MSC)
o los sitios de restricción, se digiere el cósmido
con la enzima de restricción correspondiente a
la estrategia experimental, cortando al cósmido
por los extremos cos, linealizándolo.
b) Se trata con una fosforilasa, que hidroliza los
grupos P de los extremos 5’, con el fin de evitar
que el inserto se agregue a un extremo.
c) Se trata nuestra muestra de ADN y el cósmido
con enzimas de restricción compatibles.
d) Se mezcla la muestra con el cósmido y se añade
ADN ligasa.

Si seleccionamos aquellos cósmidos que hayan quedado

con un tamaño apropiado, podemos encapsidarlos en el
fago lambda. Después infectamos y seleccionamos las
bacterias gracias a que el cósmido lleva un gen de
resistencia a ampicilina.
 ELEMENTOS GENÉTICOS MÓVILES

* Ocasionalmente desplazan o reordenan secuencias de ADN

vecinas del genoma de la célula huésped

* Su translocación da lugar a mutaciones espontaneas

• Reacciones que cortan los extremos de los segmentos de ADN móviles
• Unión de dichos extremos a uno de los lugares no
homólogos del ADN diana
 *Pueden insertarse en
 muchos lugares
 distintos de DNA

 *Se desplazan raramente

 y no se sabe porque
 TRASPOSASA  Actúa directo sobre una secuencia específica del DNA
 TRANSPOSONES DE DNA

 RETROTRANSPOSONES RETROVÍRICOS

 RETROTRANSPOSONES NO RETROVÍRICOS
 TRANSPOSONES DEL DNA

Se desplazan:
sitio donador sitio diana

Mediante :
transposición de cortar y pegar
 1.- Transposones de DNA se reconocen en los cromosomas
 2.- La transposasa une las dos secuencias de DNA invertidas (formando un lazo)
 3.- Inserción en el cromosoma diana, se coloca en un lugar al azar mediante la
formación de roturas escalonadas
 Los retrotransposones son elementos que se transponen mediante ARN, donde
participa la TRANSCRIPTASA INVERSA.
 Son elementos móviles que se desplazan de un sitio a otro del genoma, donde se
sitúan más o menos aleatoriamente y que si se insertan en regiones codificantes
pueden causar mutaciones e incrementar la variabilidad genética, siendo
auténticos motores de la evolución y la principal fuente de polimorfismo vigente
en la naturaleza.
 Seleccione las opciones correctas:
 1. Características de los Plásmidos
 1) Tienen proteínas asociadas
 2) Son DNA de doble cadena, circular, superenrollado
 3) síntesis de estructuras necesarias para la adhesión o colonización.
 4) Codifican información no esencial para la viabilidad de la bacteria
 5) El número de plásmidos puede variar, dependiendo de su tipo

Opciones
 A) Todas son correctas
 B) 1,2,3,5 son correctas
 C)2,3,5 son correctas
 D)2,3,4 son correctas
 2) Aplicación de los plásmidos
 1) Produccion de proteínas
 2) Transferencia
 3)Intercambio de bases
 4)Genetica
 5) Clonación
OPCIONES:
A) Ninguna es correcta
B) Todas son correctas
C) 5 Y 1 son correctas
D) 2, 1 y 5 son correctas
E) 1,4 y 5 son correctas
1. Combina caracteristicas utiles de plasmidos y bacteriografo
2. Permite la clonación de fragmentos más largos
3. Son Moleculas de arn grandes
4. Constituyen proteínas transportadoras
5. Tiene un sitio cos

 1,2,5 son correctas

 2,3,4 son correctas
 1,2,5 son incorrectas
Seleccione la opción correcta:

- Caracteristica de un transposón
a) Elemento genético transponible es una secuencia de ADN que puede moverse
de manera autosuficiente a diferentes partes del genoma de una célula
b) Codifican información no esencial para la viabilidad de la bacteria
c) Estan presentes en el tejido epitelial para protegerlo de daños externos
d) Todas las anteriores

- ¿Cómo se clasifican los transposones según su contenido?

a) Transposones simples y compuestos
b) Transposones DNA y retrotransposones
c) Transposones positivos y negativos
d) Transposones conservativos y no conservativos