ANÁLISIS CUALITATIVO

Métodos de Detecçión Cualitativos

Métodos de detección que favorecen la información cualitativa sobre
los analitos eluídos:

Cromatografía Gaseosa con Detección

Espectrométrica de Masas (CG-EM)

Cromatografía Gaseosa con Detección

Espectrométrica por Emisión Atómica (CG-EA)

Cromatografía Gaseosa con Detección

Espectrométrica por Absorción Infrarroja (CG-EIR)
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Espectrometría de Masas

1 Moléculas de muestra son bombardeadas por electrones (electron impact

EI) o iones (chemical ionization CI):
ABCDE + e-  ABCDE.+ + 2 e-
2 El íon formado se fragmenta:
ABCDE.+  AB. + CDE+
ABCDE.+  AB+ + CDE.
ABCDE.+  A+ + BCDE.
3 Los fragmentos iónicos formados son separados magneticamente de
acuerdo con sus masas moleculares y contados:
ABUNDÂNCIA

El gráfico del número de iones

formados en función de la razón
Masa / Carga del ión es el
ESPECTRO DE MASA del analito

MASA / CARGA
 ANÁLISIS CUALITATIVO
Espectrómetro de Masas
1 3

2 4
1 Cámara de Ionización Electrones generados por un filamento calentado
bombardean la muestra. Los fragmentos ionizados (carga +1) son repelidos por el
electrodo positivo y conducidos a un separador magnético.

2 Salida de Vacío Todo el interior del EM debe estar en alto vacío (n atm).

3 Separador Magnético Aca el campo magnético separa los iones con

determinada razón Masa / Carga al atravesar esta área del equipo.

4 Detector Una válvula fotomultiplicadora o un fotodiodo genera una señal

eléctrica proporcional al número de iones que incide sobre el elemento detector.
 ANÁLISIS CUALITATIVO
Espectro de Masas

0 20 40 60 80 100 120
m/Z
- CO
m/Z = 80

m/Z = 118 m/Z = 79

- (CO + H)

m/Z = 90
 ANÁLISIS CUALITATIVO
Acoplamiento CG - EM
Interface cromatógrafo - espectrômetro:

Separador Molecular
CG EM El gas de arraste (He) difunde
más rápidamente que el analito
y tiende a ser drenado por el
vacío aplicado.
Vacío
Cámara
de Ionización
Interface Capilar Directa
Con columnas capilares una
baja velocidad del gas de
arrastre puede ser drenada por
el sistema de vacío.

Columna
Capilar
 ANÁLISIS CUALITATIVO
Acoplamiento CG - EM
Sistema de Control y Adquisición de Datos:

La metodología de los
sistemas CG-EM son
totalmente controlados por un
microcomputador.

Sistema de Control y Adquisición de Datos:

1 El programa monitorea y controla el funcionamento de los dos módulos
CG y EM.
2 Recolecta y archiva los espectros de masa en intervalos
regulares de tiempo y construye el cromatograma.
3 Después de la corrida, compara los espectros recolectados con la
bases de datos para identificación de los eluatos.
Requiere computadores rápidos com uma gran capacidad de
almacenamiento de datos
 ANÁLISIS CUALITATIVO
CG-EM: Generando un Cromatograma
Espectros de masas completos recolectados y archivados en
intervalos regulares de tiempo
Generación del cromatograma a partir de los espectros:
CROMATOGRAMA DE IONES TOTALES (TIC = Total Ion
Cromatograma)
Para cada espectro o número total de íones detectados se hace el barrido
de masas que es sumado y graficado en función del tiempo, generando
el cromatograma.
MONITOREO DEL ION SELECIONADO (SIM = Single Ion
Monitoring)
Se seleciona un fragmento resultante de la fragmentación de la especie de
interes. Se genera el cromatograma graficando el número del ión detectado
con la masa del fragmento en función del tiempo.

SIM
TIC Seletivo
Universal
Mayor Sensibilidad
 ANÁLISIS CUALITATIVO
CG-EM: TIC x SIM
Aroma de pulpa industrializada de café después de una extración

TIC
Aparecen los picos
correspondientes a todas
sustancias eluídas

SIM (m/z = 149)

Cromatograma construido a
partir los mismos datos
anteriores, pero ahora usando
fragmentos con masa = 149
(ftalatos: plastificante)
 ANÁLISIS CUALITATIVO
Identificación de Eluatos
1 Seleción manual o automática del espectro de masa
correspondiente a un eluato.

cuentas
MASA / CARGA
cuentas

TIEMPO

2 Interpretación manual del espectro y / o comparación automática con

biblioteca de espectros del propio equipo.
 ANÁLISIS CUALITATIVO
Identificación de Eluatos
Busca automática en bibliotecas de espectros: comparación estadística
(Probability Based Matching )
ESPECTRO
DESCONOCIDO
Lista conposíbles
PBM candidatos + porcentaje de
confiabilidad
BIBLIOTECA DE
ESPECTROS
# NOME FÓRM. %
1 1-dodeceno C12H24 99
2 1-dodecanol C12H26O 91
PBM de un eluato
3 ciclododecano C12H24 91
“desconocido” (1- 4 2-dodeceno C12H24 66
dodeceno) 5 1-undeceno C11H22 35
6 8-metil-3-undeceno C12H24 32

Identificación poco confiable de espectros muy

simples
Limitada por tamaño de base de datos (NIST =
LIMITACIONES: 66.000 espectros)
Diferencias entre espectros generados por diversos
EM
 ANÁLISIS CUALITATIVO
Emisión Atómica de Plasma
PRINCIPIO La muestra es fragmentada en un plasma, los fragmentos
son excitados y emiten luz al retornar a sus estados fundamentales.

1 La muestra es fragmentada al colisionar con moléculas excitadas del gas

de soporte del plasma.
ABCD + Hem  A+ + B + CD + He + e-

2 Fragmentos son excitados electrónicamente.

A+ + B + CD + Hem  A+* + B* + CD* + He

3 Al retornar a sus estados fundamentales los fragmentos excitados emiten

luz de longitud de onda característicos.
A+*  A+ + hn1
B*  B + hn2
CD*  CD + hn3

O El monitoreo de la emisión de longitudes de onda característica de cada

fragmento genera cromatogramas específicos
 ANÁLISIS CUALITATIVO
Esquema Típico de un CG-EEA

1 Cromatógrafo Gaseoso
2 Alimentación de Gas de Soporte del Plasma (He)
3 Línea de Transferencia (acoplamiento CG - EEA)
4 Cavidad Resonante (generación del plasma)
5 Lente de Focalización
6 Monocromador / Policromador
7 Detector de Luz (fotomultiplicador / arreglo de diodos)
8 Amplificación / Digitalización de la Señal
9 Computador
•En términos generales, moléculas diversas tienen masas diversas, hecho utilizado por un
espectrómetro de masas para determinar qué moléculas están presentes en una muestra. Por
ejemplo, se vaporiza sal de mesa (NaCl) y se analizan los iones en la primera parte del
espectrómetro de masa. Esto produce iones del sodio e iones del cloro que tienen pesos
moleculares específicos. Estos iones también tienen una carga, que significa que debido a ella
tendrán movimiento bajo influencia de un determinado campo eléctrico.
•Estos iones se envían a un compartimiento de aceleración y se pasan a través de una lámina
metálica. Se aplica un campo magnético a un lado del compartimiento que atrae a cada uno
de los iones con la misma fuerza (suponiendo carga idéntica) y se los desvía sobre un
detector. Naturalmente, los iones más ligeros se desviarán más que los iones pesados porque
la fuerza aplicada a cada ión es igual pero los iones ligeros tienen menos masa. El detector
mide exactamente cuán lejos se ha desviado cada ión y, a partir de ese dato se calcula el
"cuociente masa por unidad de carga". Con esta información es posible determinar con un alto
nivel de certeza cuál es la composición química de la muestra original.
•Hay muchos tipos de espectrómetros de masas que no solamente analizan los iones, sino
que también producen diversos tipos de iones. Sin embargo, todos utilizan campos eléctricos
y magnéticos para cambiar la trayectoria iónica de determinada manera.
•Actualmente existen diferentes métodos para "filtrar" los iones respecto a su relación
Masa/carga. El más comúnmente usado es el denominado cuadrupolo. Se compone de 4
barras alargadas en formación cuadrada, conectadas eléctricamente entre sí en pares
opuestos. A dichos pares (polos) se les aplica una tensión de radiofrecuencia variable que
sintoniza con un determinado ión. Cuando existe sintonía entre el ión que está pasando por
ellas y la frecuencia aplicada, dicho ion continúa su camino desviándose todos los demás
no sintonizados fuera del cuadrupolo y de esta manera no impactan en el detector.
•La configuración de los actuales espectrómetros de masa pasa por disponer de uno, dos y
hasta tres cuadrupolos en serie (triplecuadrupolo). Existen también configuraciones no
cuadripolares, como pueden ser los hexapolos, aunque su funcionamiento es análogo al
cuadripolo.
•El analizador se puede utilizar para seleccionar una gama estrecha de m/z's o para
explorar a través de una gama de m/z's para catalogar los iones presentes:
•Quizás el más fácil de entender es el analizador del Tiempo-de-vuelo (TOF) que se
integra típicamente con fuentes del ion de MALDI. Alza los iones a la misma energía
cinética por el paso a través de un campo eléctrico y mide los tiempos que toman para
alcanzar el detector. Aunque la energía cinética es igual, la velocidad es diferente, así que el
ion más altamente cargado del alumbrador alcanzará el detector primero.
•Los analizadores totales cuadrupole y los campos eléctricos oscilantes del ion del uso
cuadrupole de las trampas [ QIT ] estabilizan selectivamente o desestabilizan los iones que
caen dentro de una ventana estrecha de los valores de m/z. Fourier transforma medidas del
espectrometría de masa que se forma detectando la corriente de la imagen producida por
los iones ciclotronándolos en presencia de un campo magnético. Poder escoger el
analizador más adecuado para un experimento depende del tipo de información que se
obtiene del experimento.
Espectrómetro de Masa.

Sistema acoplado de cromatografía de gases/espectrometría de masa con trampa iónica Varian Saturno 2000,
que realiza barridos de masa usando ionización interna por impacto electrónico (EI) y/o ionización
química positiva líquida gaseosa (IQ) con un modulo multiple para tres reactivos y experimento EM/EM en
modos IQ y/o EI en el intervalo de masa de 10 a 650 m/z. El cromatógrafo de gases Varian modelo CP-3800
contiene dos inyectores modelos 1177 y 1079, ambos split/splitles. Este último se adapta para introducir
muestas en forma directa (chromatoprobe) con temperatura programable sin alterar el vacío del
espectrómetro de masa y de modos IQ y EI. Los espectros son comparados con bibliotecas estandar
(Library Nist).