FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS

PROGRAMA MICROBIOLOGÍA
BIOLOGÍA MOLECULAR
TRANSFERENCIA HORIZONTAL DE GENES
PROFESORA ALBA RICARDO
PhD MICROBIOLOGÍA
HGT: CONJUGACIÓN
HGT: CONJUGACIÓN
HGT: CONJUGACIÓN
 HGT: CONJUGACIÓN
La conjugación tiene lugar cuando el material
genético pasa directamente de una bacteria a otra. En
la conjugación, dos bacterias se encuentran muy
juntas y una conexión se forma entre ellas. Una parte
del cromosoma bacteriano o un plásmido pasa de una
célula (la donante) a la otra (la receptora).
 HGT: CONJUGACIÓN
Posterior a la conjugación, una recombinación puede
ocurrir entre secuencias homólogas en el ADN
transferido y el cromosoma de la célula receptora. En
la conjugación, el ADN se transfiere sólo del donante
hasta el receptor, sin intercambio recíproco de
material genético.
 HGT: CONJUGACIÓN
La conjugación, es la transferencia de ADN entre
bacterias esto implica un contacto directo, depende
de la presencia de una pieza "extra" de ADN circular
conocida como plásmido. Los plásmidos desempeñan
numerosos e importantes papeles en la vida de las
bacterias.
 HGT: CONJUGACIÓN
También han demostrado ser muy valiosos para
microbiólogos y genetistas moleculares en la
construcción y transferencia de nuevas
combinaciones genéticas y en la clonación de genes.

pUC18
plásmido
comercial,
diseñado en
laboratorios.
 HGT: CONJUGACIÓN
Los plásmidos son pequeñas moléculas de ADN de
doble cadena, generalmente circular, que pueden
existir independientemente del cromosoma huésped
y están presentes en muchas bacterias (también están
presentes en algunas levaduras y hongos).

¿Hay
plásmidos
lineales?
 HGT: CONJUGACIÓN
Ellos tienen sus propios orígenes de replicación y se
replican de manera autónoma. Un replicón es una
molécula de ADN o una secuencia que tiene un origen
de replicación y es capaz de ser replicado.
HGT: CONJUGACIÓN
 HGT: CONJUGACIÓN
Plásmidos y cromosomas bacterianas son replicones
independientes. Los plásmidos tienen relativamente
pocos genes, generalmente menos de 30. Su
información genética no es esencial para el anfitrión,
y las bacterias que carecen de ellos por lo general
funcionan normalmente.
 HGT: CONJUGACIÓN
Los plásmidos de copia única producen sólo una
copia por célula huésped. Los plásmidos multicopia
pueden estar presentes en concentraciones de 40 o
más por célula.
 HGT: CONJUGACIÓN
Característicamente, los plásmidos pueden ser
eliminados desde la célula huésped en un proceso
conocido como curado. El curado puede ocurrir
espontáneamente o ser inducidas por tratamientos
que inhiben la replicación del plásmido mientras que
no afecta la reproducción de la célula huésped.
 HGT: CONJUGACIÓN
Los plásmidos inhibidos se diluyen lentamente de la
población de bacterias en crecimiento. Algunos
tratamientos de curado son: mutágenos como la
acridina, radiación ultravioleta e ionizante,
“starvación” de timina y el uso de temperaturas por
encima de las óptimas.
 HGT: CONJUGACIÓN
Los plásmidos pueden ser clasificados en términos de
su modo de existencia y propagación. Un episoma es
un plásmido que puede existir ya sea con o sin ser
integrado en el cromosoma del huésped.
Algunos plásmidos, como los plásmidos de
conjugación, tienen genes para el pili y puede
transferir copias de sí mismos a otras bacterias
durante la conjugación.
 HGT: CONJUGACIÓN
Factor de fertilidad
Un plásmido llamado de fertilidad o factor F
desempeña un papel importante en la conjugación en
E. coli y fue el primero en ser descubierto. El factor F
tiene unas 100 kilobases y lleva los genes
responsables de la unión celular y la transferencia del
plásmido entre cepas bacterianas específicas durante
la conjugación.
HGT: CONJUGACIÓN
 HGT: CONJUGACIÓN
Factor de fertilidad
La mayor parte de la información requerido para la
transferencia del plásmido se encuentra en el operón
tra, contiene al menos 28 genes. Muchos de estos
dirigen la formación del pili sexual que une la célula
F+ (la célula donante que contiene un plásmido F) a
una célula F-.
 HGT: CONJUGACIÓN
Factor de fertilidad
 HGT: CONJUGACIÓN
Factor de fertilidad
El factor F también tiene varios segmentos llamados
secuencias de inserción que ayudan a la integración
del plásmido en el cromosoma de la célula huésped.
Por lo tanto el factor F es un episoma que puede
existir fuera del cromosoma bacteriano o ser
integrado en ella.
 HGT: CONJUGACIÓN
Factor de fertilidad
 HGT: CONJUGACIÓN
Factor de fertilidad

Se inicia la transferencia cuando uno de los hebras de ADN en el

factor F se corta en un origen (oriT). Un extremo del ADN
mellado se separa del círculo y pasa a la célula receptora.
 HGT: CONJUGACIÓN
Factor de fertilidad
La replicación se lleva a cabo
en la hebra cortada,
procediendo alrededor del
plásmido circular y
sustituyendo la hebra
transferida. Porque el
plásmido en la célula F+ se
corta siempre en el sitio oriT,
este sitio siempre entra
primero en la célula
receptora, seguido por el
resto del plásmido. Por lo
tanto, la transferencia del
material genético tiene una
dirección definida. Dentro de
la célula receptora, la cadena
sencilla es replicada,
produciendo una copia
circular, de cadena doble del
plásmido F.
 HGT: CONJUGACIÓN
Factor de fertilidad

En las cepas Hfr (de alta frecuencia), el factor F+ es integrado en el cromosoma

bacteriano, las células Hfr se comportan como células F+, formando pili sexuales y
pueden llevar a cabo la conjugación con las células F-.
 HGT: CONJUGACIÓN
Factor de fertilidad
 HGT: CONJUGACIÓN
Factor de fertilidad
 HGT: CONJUGACIÓN
Factor de fertilidad

En un apareamiento de células Hfr x F-, la F- casi

nunca se convierte en F+ o Hfr, debido a que el
factor F se corta en el medio durante el inicio de
la transferencia. Para convertirse en F+ o Hfr, la
célula receptora debe recibir todo el factor F y
requiere que todo el cromosoma bacteriano se
transfiera. Este evento ocurre raramente, porque
la mayoría de las células de conjugación se
rompen antes de que la totalidad del cromosoma
haya sido transferido.
 HGT: CONJUGACIÓN
Factor de fertilidad
 HGT: CONJUGACIÓN
Factor de fertilidad
 HGT: CONJUGACIÓN
Factor de fertilidad
 HGT: CONJUGACIÓN
Factor de fertilidad
 CONJUGACIÓN: MECANISMOS MOLECULARES

La conjugación en bacterias Gram-negativas está mediada por el sistema de secreción Tipo IV (T4SS), un
gran complejo macromolecular implicado en el transporte de sustrato y la biogénesis del pili. Los T4SS
están implicados no solo en la conjugación bacteriana, sino también en la secreción de factores de
virulencia en células eucarióticas. Muchos efectores secretados por T4SS son factores de virulencia
implicados en enfermedades patógenas, como brucelosis, tos ferina, enfermedad por arañazo de gato,
neumonía o úlcera gástrica, causada por infección bacteriana por Brucella suis, Bordetella pertussis,
Bartonella henselae, Legionella pneumophila o Helicobacter pylori, respectivamente.
Conjugative T4SSs son esenciales para la formación de pares de apareamiento (MPF) y, por lo tanto, los
genes que codifican las proteínas T4SS se llaman genes MPF. Los plásmidos conjugativos codifican su
propio conjunto de genes MPF y son, por lo tanto, autotransmisibles. Otros plásmidos carecen de su
propio conjunto de genes MPF y dependen del sistema T4SS de un plásmido conjugativo para
movilizarse.
 CONJUGACIÓN: MECANISMOS MOLECULARES

Algunos genes MPF también se han encontrado en Cyanobacteria, Firmicutes,

Bacteroides, Actinobacteria y Archaea, lo que sugiere que la conjugación es un proceso
antiguo que surgió muy temprano entre las Proteobacterias antiguas y luego se extendió a
todos los procariotas. Los genes que codifican estas proteínas se organizan en operones
bajo el control de diferentes promotores, con una clara distinción entre los que participan
en la formación del par de apareamiento (Mpf) y la replicación de la transferencia de ADN
(Dtr). La Figura 1 muestra la organización de estos genes en el plásmido R388, que junto
con los plásmidos F y Ti de A. tumefaciens son los sistemas conjugativos mejor
caracterizados. Esta arquitectura de genes está relativamente bien conservada en la
mayoría de los sistemas conjugativos, lo cual es una característica sorprendente ya que la
sintenia en genes es un rasgo evolutivo que se pierde rápidamente en la evolución.
 CONJUGACIÓN: MECANISMOS MOLECULARES

La conjugación ha evolucionado para mover un plásmido de manera eficiente a otras

células. Los genes conjugativos o de transferencia (tra) establecen un “mating pair” estable
y activan el transporte de ADN del donante a la célula receptora a través de un poro de
transferencia especializado. Otros genes aseguran la supervivencia del ADN en el ambiente
posiblemente hostil del nuevo huésped. Los pasos principales en la conjugación son:
primero, formación de un “mating pair” (Mpf); segundo, un evento de señalización de que
la transferencia puede ocurrir; y tercero, la transferencia de ADN (Dtr). La preparación del
ADN antes de la transferencia es similar entre los sistemas conjugativos, pero el
mecanismo de formación del par de apareamiento varía considerablemente.
 CONJUGACIÓN: MECANISMOS MOLECULARES

La arquitectura T4SS está relativamente bien conservada independientemente de su función biológica (conjugación bacteriana,
secreción de factores de virulencia en células eucariotas o absorción de ADN). Se pueden distinguir cuatro dominios de
proteína en T4SS: el pilus, el complejo del canal central, la plataforma de membrana interna y las ATPasas hexamérica en la
base del canal que suministran la energía para la biogénesis del pilus y el transporte del sustrato.
El componente principal del pilus T4SS es una proteína hidrofóbica llamada pilina o VirB2 (TrwL en el plásmido R388) . Los
plásmidos conjugativos y movilizables contienen una secuencia de ADN análoga, oriT, que se reconoce por factores auxiliares
específicos dentro del relaxosoma. El relaxosoma, llamado así por analogía con el nucleosoma, está formado por la relaxasa y
las proteínas auxiliares de transferencia unidas a un fragmento de ADN de varios cientos de pares de bases de longitud, que
contiene el origen de la transferencia (oriT). Las relaxasas son fosfodiesterasas específicas que escinden ADN en un sitio nic
dentro del oriT.
 HGT: CONJUGACIÓN-BASES MOLECULARES
El sistema conjugativo de tipo F (F) se muestra
localizado en las membranas interna y externa y se
extiende a través del periplasma. Las proteínas que
son específicas para los sistemas de tipo F se
muestran en rosa para el ensamblaje del pilus o en
verde para la estabilización del par de
apareamiento. La ATPasa que es característica de
los sistemas de tipo P (VirB11 en Ti) se muestra en
rojo. El pilus, que se compone de subunidades
repetitivas de TraA, se erige mediante sistemas de
secreción de tipo IV específicos de plásmido
(T4SS). La chaperona TraQ inserta pilina en la
membrana interna donde es acetilada por TraX.
Las proteínas características del tipo F incluyen
TraF y TrbB, que tienen pliegues similares a
tiorredoxina. Todos los sistemas conjugativos
conocidos tienen una "proteína de acoplamiento"
(llamada TraD en el plásmido F), que es una
proteína de membrana interna con un dominio
citoplásmico que une el T4SS al relaxosoma unido
al ADN durante la transferencia. Los relaxosomas
tienen una relaxasa (TraI) que corta el ADN en nic
dentro del origen de la transferencia (oriT); otros
mecanismos podrían funcionar en bacterias Gram-
positivas. Tras el corte, una tirosina conservada (Y)
de la relaxasa forma un enlace covalente con el 5
'fosfato (P) de la cadena de ADN (P-5'-Y).

La mayoría de los sistemas conjugativos incluyen una relaxasa que mella el ADN para dar un sustrato
monocatenario que es adecuado para la transferencia. Esta mella se produce de una manera específica y
específica del sitio en un sitio nic, permitiendo que los sistemas autotransmisibles y movilizables se
clasifiquen por sus secuencias relaxase y nic. DOI: 10.1038/nrmicro1235 · Source: PubMed
 CONJUGACIÓN: MECANISMOS MOLECULARES

TraY and its

orthologues, such
as TrwA in R388,
are structurally
related to DNA-
binding proteins
with ribbon-helix-
helix (RHH) motifs.
An additional
auxiliary factor IHF
(integration
host factor) binds
to the DNA
inducing a bending
in the oriT region
that helps to bring
TraY to the nic site.

Transporte de nucleoproteína por T4SS. Paso 1: las células donantes se ponen en contacto con las
células receptoras. El contacto de célula a célula, mediado por el pilus, podría ser desencadenado por factores
específicos en el receptor. En esta etapa, los factores auxiliares TrwA e IHF se unen al origen de la región de
transferencia (oriT) del ADN plasmídico y la relaxasa lo escinde en el sitio nic. Paso 2: Tras el contacto
celular, la retracción del pilus extracelular facilita la interacción entre las membranas de las células donantes
y receptoras, lo que da como resultado un proceso de fusión de la membrana. Simultáneamente, o antes de
esta fusión de la membrana, la proteína de acoplamiento conduce al relaxosoma hacia el canal de secreción.
 CONJUGACIÓN: MECANISMOS MOLECULARES

Paso 3: el sustrato de nucleoproteína se transfiere a TrwD / VrB11. La relaxasa se

despliega y se transloca a través del canal unido covalentemente al ADN. Paso 4 -
TrwK / VirB4 se desplaza en la base del canal de secreción por la proteína de
acoplamiento, lo que ayuda a la translocación del ADN en dirección 5’-3’.
CONJUGACIÓN: MECANISMOS MOLECULARES
CONJUGACIÓN: MECANISMOS MOLECULARES
CONJUGACIÓN: MECANISMOS MOLECULARES
 HGT-CONJUGACIÓN
CONSULTAR:

Describa cada uno de los siguientes plásmidos y su importancia:

1. Factor R, plásmido Col, plásmidos de virulencia y plásmidos
metabólicos.

*Es imposible para

plásmidos con el mismo mecanismo de replicación coexistir
en la misma célula, un fenómeno denominado 'incompatible‘ (Inc).
2. Explique este mecanismo y dé ejemplo de la Inc de plásmidos
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HGT: CONJUGACIÓN
HGT: CONJUGACIÓN
¡GRACIAS POR SU ATENCIÓN!
ANEXOS
CONJUGACIÓN: MECANISMOS MOLECULARES
CONJUGACIÓN: MECANISMOS MOLECULARES-Gram (+)
CONJUGACIÓN: MECANISMOS MOLECULARES-Gram (+)
CONJUGACIÓN: MECANISMOS MOLECULARES-Gram (+)