Вы находитесь на странице: 1из 14

Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования

«Национальный исследовательский Томский государственный университет»

Научно-исследовательский институт онкологии


Федерального государственного бюджетного научного учреждения 
«Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук»

ВЫПУСКНАЯ КВАЛИФИКАЦИОННАЯ РАБОТА БАКАЛАВРА

ИЗУЧЕНИЕ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ ХИМИОРЕЗИСТЕНТНОСТИ В ОПУХОЛИ


ЛЁГКОГО В ПРОЦЕССЕ НЕОАДЪЮВАНТНОЙ ХИМИОТЕРАПИИ

Выполнила:
студентка 4 курса БИ
группа 01601
Гаптулбарова К.А

Научный руководитель:
к.б.н, с.н.с. лаборатории онковирусологии
Томского НИМЦ
М.М. Цыганов
Томск - 2020
АКТУАЛЬНОСТЬ
Рак лёгкого (РЛ) - одно из самых распространенных злокачественных заболеваний. Ежегодно в
мире диагностируются примерно 1,2 миллиона случаев рака легкого, причём более 1 миллиона
погибают от данного злокачественного новообразования (ЗНО).

НЕОАДЪЮВАНТНАЯ АДЪЮВАНТНАЯ
ПАЦИЕНТ ОПЕРАЦИЯ
ХИМИОТЕРАПИЯ ХИМИОТЕРАПИЯ

ABCB1 Опухолевая клетка


ЭФФЕКТИВНОСТЬ ABCC1
0-50% ABCC2 АТФ АДФ
(ПОЛНАЯ/ЧАСТИЧНАЯ ABCC5
РЕГРЕССИЯ) ABCG1 Р-gp
ABCG2 Химиопрепарат
Осуществляется выброс 90-95%
химиопрепаратов из всех известных
2
ЦЕЛЬ РАБОТЫ:
Исследование экспрессии генов АВС–транспортеров в нормальной и опухолевой ткани у больных
немелкоклеточным раком легкого.

ЗАДАЧИ:
1. Оценить уровень экспрессии исследуемых генов ABC-транспортеров в биопсийном и
операционном материале нормальной и опухолевой ткани легкого.

2. Провести анализ связи экспрессии генов АВС-транспортеров с основными клинико-


патологическими параметрами пациентов.

3. Провести анализ связи экспрессии генов АВС-транспортеров с эффективностью неоадъювантной


химиотерапии.

4. Оценить прогностическую значимость экспрессии генов ABC-транспортеров у больных


немелкоклеточным раком легкого.
3
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Были проанализированы результаты лечения 69 пациентов в возрасте от 41 до 60 лет. В исследование включены
больные немелкоклеточным раком легкого II и III стадии, центральной или периферической локализации с
морфологически верифицированным диагнозом. Исследование проходило в соответствии с Хельсинкской
Декларацией 1964 г. (исправленной в 2013 г.) и с разрешения локального этического комитета института, все
пациенты подписали информированное согласие на исследование.

НЕОАДЪЮВАНТНАЯ
ХИМИОТЕРАПИЯ АДЪЮВАНТНАЯ
(2 курса по схеме ОПЕРАЦИЯ ХИМИОТЕРАПИЯ
винорельбин- (по показаниям)
карбоплатин)

Операционный
Операционный Операционный материал
Биопсия Биопсия материал материал опухолевой
нормальной опухолевой нормальной нормальной ткани легкого
ткани легкого до ткани легкого до ткани легкого ткани бронхов после лечения
лечения лечения после лечения после лечения
4
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
В качестве материала были использованы биопсийные образцы нормальной и опухолевой ткани легкого до
лечения и операционные образцы нормальной ткани легкого и бронхов и опухолевой ткани легкого после НХТ .

  ( 𝐸 𝑡𝑎𝑟𝑔𝑒𝑡 )∆ 𝐶𝑡 ,𝑡𝑎𝑟𝑔𝑒𝑡 ( 𝑐𝑎𝑙𝑖𝑏𝑟𝑎𝑡𝑜𝑟 − 𝑡𝑒𝑠𝑡 )


Ratio= ∆ 𝐶𝑡 ,𝑟𝑒𝑓 (𝑐𝑎𝑙𝑖𝑏𝑟𝑎𝑡𝑜𝑟 − 𝑡𝑒𝑠𝑡)
( 𝐸𝑟𝑒𝑓 )
Е – эффективность реакции,
Ct – пороговый цикл генов мишеней (target) и
гена-рефери (ref);
∆Ct, target(calibrator – test) = Ct гена мишени в
калибраторе минус Ct гена мишени в опытном
образце;
∆Ct, ref(calibrator – test) = Ct гена-рефери в
калибраторе минус Ct гена-рефери в опытном
образце.
Экспрессия исследуемых генов оценивалась по отношению к
гену-рефери GAPDH и калибратору нормальной ткани легкого.

Статистическая обработка данных проводилась с использованием пакета прикладных программ «Statistica 8.0»
(StatSoft Inc., USA).
5
РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Оценка уровня экспрессии исследуемых генов ABC-транспортеров.

У р о вень экспр ессии


У р о вень экспр ессии

А)

Б)
14 14
12 12
10 10
8 8
6 6
4 4
2 2
0 0
1 6 11 16 21 26 31 36 41 46 51 56 61 66 1 6 11 16 21 26 31 36 41 46 51 56 61 66
Номер пациента Номер пациента

ABCB1 ABCC1 ABCC2 ABCC5 ABCG1 ABCG2 ABCB1 ABCC1 ABCC2 ABCC5 ABCG1 ABCG2

Рисунок 1 – Уровень экспрессии генов АВС-транспортёров в опухолевой ткани легкого до лечения (А) и
после проведения НХТ (Б).
6
РЕЗУЛЬТАТЫ
Экспрессия исследуемых генов в бронхах на каждого пациента.

24
22
20
18
Уровень экспресии 16
14
12
10
8
6
4
2
0
1 6 11 16 21 26 31 36 41 46 51 56 61 66
Номер пациента

ABCB1 ABCC1 ABCC2 ABCC5 ABCG1 ABCG2

Рисунок 2 – Уровень экспрессии генов АВС-транспортёров в нормальной ткани бронхов.


7
РЕЗУЛЬТАТЫ
Связь экспрессии исследуемых генов с основными клинико-патологическими параметрами пациентов.

ЛИМФОГЕННОЕ
ABCB1 до лечения
МЕТАСТАЗИРОВАНИ
Е (p=0,02)

ГИСТОЛОГИЧЕСКИЙ ABCB1 и ABCC2 после НХТ


ТИП ОПУХОЛИ (p=0,04 и p=0,01)

РАЗМЕР ОПУХОЛИ ABCC5 после НХТ


(p= 0,04)

ВОЗРАСТ ABCG2 до лечения


(p= 0,03)

8
РЕЗУЛЬТАТЫ
2. Связь экспрессии генов ABC-транспортеров с эффективностью НХТ.
У р о вень экспр ессии

У р о в ен ь э ксп р есси и
2.1
1.4
1.8
1.2
1.5
1.0
1.2 0.8
0.9 0.6
0.6 0.4
0.3 0.2

0.0 0.0
ABCB1 ABCC1 ABCC2 ABCC5 ABCG1 ABCG2 ABCB1 ABCC1 ABCC2 ABCC5 ABCG1 ABCG2

Полная и частичная регрессия Стабилизация Полная и частичная регрессия Стабилизация

Рисунок 3 – Связь начального уровня Рисунок 4 –Связь экспрессии генов ABC-


экспрессии генов ABC-транспортеров с транспортеров после НХТ с эффектом
эффектом НХТ. лечения.
9
РЕЗУЛЬТАТЫ
3. Оценка прогностической значимости экспрессии генов ABC-транспортеров.

Рисунок 5 – Безметастатическая выживаемость больных немелкоклеточным раком легкого в зависимости


от послеоперационного уровня экспрессии гена ABCB1 (log rank test p=0,003).
10
РЕЗУЛЬТАТЫ
3. Оценка прогностической значимости экспрессии генов ABC-транспортеров.

Рисунок 6 – Безметастатическая выживаемость больных немелкоклеточным раком легкого в зависимости


от послеоперационного уровня экспрессии генов ABCG1 и ABCG2 (log rank test p=0,001, p=0,03
соответственно).
11
РЕЗУЛЬТАТЫ
4. Оценка предиктивной значимости изменения экспрессии генов ABC-транспортеров у больных
немелкоклеточным раком легкого
Таблица 1 – Частота изменение экспрессии генов исследуемых генов ABC в опухоли легкого в
зависимости от эффекта НХТ.
ПР+ЧР СТ
Гены p-value
Частота повышения/снижения Частота повышения/снижения

ABCB1 7/17 (29%/71%) 33/12 (73%/27%) 0,0007


ABCC1 10/14 (42%/58%) 19/26 (42%/58%) 0,80
ABCC2 14/10 (58%/42%) 30/15 (67%/33%) 0,60
ABCC5 5/19 (21%/79%) 10/35 (22%/78%) 1
ABCG1 14/10 (58%/42%) 33/12 (73%/27%) 0,27
ABCG2 10/14 (42%/58%) 19/26 (42%/58%) 0,80

Примечание: ПР+ЧР - полная и частичная регрессия; СТ - стабилизация


12
РЕЗУЛЬТАТЫ
Изменение экспрессии генов ABCB1 и ABCG1 сопряжено с безметастатической выживаемостью больных НМРЛ.

А) Б)

Рисунок 7 – Безметастатическая выживаемость больных немелкоклеточным раком легкого в


зависимости от изменения уровня экспрессии генов ABCB1 (А) и ABCG1 (Б).
12
ВЫВОДЫ
1. Произвели сравнение экспрессии генов ABC-транспортеров в биопсийном и операционном
материале опухоли легкого, а так же в материале нормальной ткани бронхов.

2. Установлена связь с возрастом для гена ABCG2 в биопсийном материале, с размером опухоли для
гена ABCC5 в операционном материале, с лимфогенным метастазированием для гена ABCB1 в
биопсийном материале и с гистологическим типом опухоли для генов ABCB1 и ABCC2 в
операционном материале.

3. Начальный уровень экспрессии генов ABC-транспортеров до лечения никак не влияет на эффект


неоадъювантной химиотерапии. Оценка уровня экспрессии генов МЛУ после проведения НХТ в
опухолевой ткани у больных с частичной регрессией и стабилизацией не показала статистически
значимых различий.

4. Установлено, что при гипоэкспрессии генов ABCB1, ABCG1, ABCG2 после проведения лечения
показатель безметастатической выживаемости выше, чем при гиперэкспресии.

5. При оценке предиктивной значимости изменения экспрессии генов ABC-транспортеров у больных


немелкоклеточным раком легкого было установлено, что изменение экспрессии ABCB1 сопряжено c
эффектом неоадъювантной химиотерапии. Снижение уровня экспрессии ABCB1 в 71% случаев
коррелирует с положительным ответом на химиотерапию. 13