Tema 5

Ligamiento
Ligamiento yy mapas
mapas genéticos
genéticos
Dr. Antonio Barbadilla
Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 1

1
Objetivos
Objetivos tema
tema 5:
5:
Ligamiento
Ligamiento yy cartografía
cartografía genética
genética (mapas)
(mapas)
Deberán quedar bien claros los siguientes puntos
•Los conceptos de ligamiento, recombinación y

entrecruzamiento
•Cómo calcular las frecuencias de recombinación en loci ligados
•Construcción de mapas genéticos a partir de cruzamientos
pruebas de 2 y 3 factores (puntos)
•Interferencia y coeficiente de coincidencia
•Demostración citológica del entrecruzamiento
•Análisis de tétradas en hongos ascomicetos
•Recombinación mitótica
•Cartografía genética en humanos
•Ligamiento y recombinación en bacterias y virus

2
Ligamiento:
Ligamiento: Asociación
Asociación de
de genes
genes en
en el
el
mismo
mismo cromosoma
cromosoma formando
formando grupos
grupos de
de
ligamientos
ligamientos
Ligamiento total
A B
A B
A
A B
B
a b
a b
a a
b
b
Gametos (100% gametos
Genotipo F1
parentales)
50 % AB
AB / ab 50 % ab
3
Segregación independiente (no ligamiento,
2a ley de Mendel) gametos
Genotipos F1 A B
AB A
A B B
-- --
a b b
A
Ab
A b 50%
A B recom-
A binan-
B a B tes
a b aB
a
a B
b
a b
ab a
b
Proporción 1:1:1:1
4
Mensaje:
La frecuencia de gametos
recombinantes (FR) debe estar
entre el ligamiento total (0%) y
la segregación independiente
(50%)
0%  FR  50%

5
Ligamiento:
•Descubrimiento del ligamiento
(Morgan con mutantes de Drosophila
melanogater)

6
Mutantes de Drosophila melanogater
Estudio del ligamiento con
mutantes
+: salvaje Cy: Curly sd: scalloped
+: salvaje w: white
ap: aptera vg: vestigial dp: dumpy
sepia Bar
D: Dichaete c: curved Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 7

7
Ligamiento:
•Simbolismo del ligamiento
Configuración en acoplamiento o cis -> AB/ab

Configuración en repulsión o trans -> Ab/aB
•Prueba de ligamiento: desviación de la

proporción 1:1:1:1 en un cruzamiento prueba de
un dihíbrido

8
Grupos de
ligamiento en
Drosophila

9
Ligamiento a nivel del DNA
Haplotipo

10
Cruzamiento prueba:
Genotipos P AA BB aa bb
Gametos P AB ab
Cruza-
F1 Aa Bb X aa bb miento
prueba
Gametos ab
AB Aa Bb A- B-
Ab Aa bb A- bb
aB aa Bb aa B-
Dr. Antonio Barbadilla ab aa bb aa bb
11 Genotipos Fenotipos
Mensaje:
El cruzamiento prueba
permite inferir las
proporciones de los
gametos que se forman
en el doble
heterocigoto

12
Recombinación: la generación durante la
meiosis de genotipos haploides distintos de
los genotipos parentales
Gametos P AB ab
F1 Aa Bb
AB Gametos parentales
Gametos ab
Ab
Gametos recombinantes
Dr. Antonio Barbadilla aB
13
Recombinación:
•Recombinación intercromosómica: genes (loci)
en diferentes cromosomas (leyes de Mendel)
A B
Genotipos F1 AB A
B
A B
-- -- b
A
a b Ab A 50%
b
A B recom-
A binan-
B a B tes
a b aB a
a B
b
a b
ab a
b
Proporción 1:1:1:1
•Recombinación intracromosómica: genes

situados en el mismo cromosoma --->

14
Entrecruzamiento (Crossover): El
intercambio de cromátidas no hermanas entre
cromosomas homólogos durante la meiosis por un
proceso de rotura y reunión del DNA
Cromosomas en la meiosis Productos meióticos
Meiosis A B A B
sin
A B A B
entrecru
zamiento a b a b
entre los
a b a b
genes
Meiosis A B A B
con b
A B A
entrecru Recombi-
zamiento a b a B nantes
entre los
a b a b
genes Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 15
15
Meiosis
Meiosis yy entrecruzamiento
entrecruzamiento

16
Entrecruzamiento visto mediante
microscopía electrónica

17
Entrecruzamiento visto mediante
microscopía electrónica

18
Entrecruzamiento
en el nivel del
DNA

19
Migración ramal

20
Cartografía genética:
La cartografía genética asigna el lugar

cromosómico de un gen (o locus) y su relación de
distancia con otros genes (o loci) en un cromosoma
dado
A. Sturtevant (1913). La distribución y

el orden lineal de los genes se pueden
establecer experimentalmente
mediante el análisis genético

21
Supuesto: las frecuencias de
entrecruzamiento, y por tanto la
frecuencia de recombinación, depende de la
distancia entre genes
A B C
Unidad de distancia: La unidad de mapa (u.m.) o el

centimorgan (cM) --> La distancia entre genes (loci) en los
que 22
la frecuencia de recombinación
Temaes del 1%
5: Ligamiento y mapas genéticos 22
Meiosis A C B C
4

23
•Mayor distancia entre loci --> Mayor número de
entrecruzamientos
•Más Entrecruzamientos ---> Más Recombinación
A mayor frecuencia de recombinación

mayor la distancia entre loci
El número de etrecruzamientos por meiosis y por
cromosoma se puede representar por una distribución
aleatoria de Poisson, con media 
1
e   i FR  (1  e  )
f (i )  2
i!    ln(1  2 FR )
24
Mapa a partir de cruzamientos prueba de
dos puntos (dos loci en el mismo
cromosomas)
Se determina la distancia 2 a 2 entre loci y éstas

se suman para estimar la distancia genética total
de un cromosoma
A B

25
Ejemplo:
Experimento de Morgan
pr = Ojos Púrpura
vg = Alas vestigiales
Ambos alelos son recesivos respecto al salvaje
P pr+ pr+ vg+ vg+ X pr pr vg vg
F1 pr+ pr vg+ vg X pr pr vg vg
Fenotipos F 2
pr+ vg+ 1339

pr vg 1195
pr+ vg 151
pr vg+ 154
Dr. Antonio Barbadilla ____
26
2839 Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 26
Metodología
•Normalmente heterocigoto X homocigoto recesivo
(cruzamiento prueba) -> AB/ab X ab/ab
•No se observa en la F2 la proporción fenotípica 1:1:1:1, y
la proporción no es predecible a priori porque depende de
la distancia entre los genes estudiados
•Las dos clases mayoritarias corresponden a los gametos
no recombinantes (parentales), y las minoritarias a los
recombinantes (no parentales)
•La frecuencia de recombinación (recombinantes/total X
100) refleja la distancia genética entre los dos genes. Una
unidad de mapa o centimorgan (1cM) = 1% de
recombinantes
•Se ordernan tres genes cuyas distancias se han medido
dos a dos

27
Fenotipos F 2
pr+ vg+ 1339

pr vg 1195
pr+ vg 151 305
pr vg+ 154
____
2839
Proporción no 1:1:1:1. Un test de 2 es muy significativo
FR = 305/2839 = 0,107 = 10,7 cM
pr vg
10,7 cM Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 28

28
Orden de los genes
Se han estudias tres pares de genes y estas son las
distancias entre ellos:
distancia A-B = 12;
distancia B-C = 7; y
distancia A-C = 5
¿Cuál es el orden de los genes? Las distancias deben ser

aditivas y consistentes entre sí
Supongamos las tres ordenaciones posibles

29
Orden de los genes
Ordenaciones posibles
Caso 1: Marcador A está en el medio:
B A A C
12 5
B C
7
Caso 2: Marcador B está en el medio:
A B B C
12 7
A C
5
Caso 3: Marcador C está en el medio:
A B
12
A C Aditividad
5 7
C B Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 30
30
Las distancias de mapa no son completamente
aditivas
A B C
FR = x FR = y
A C
FR < x + y
La mejor estima distancia,
25,4
suma (b-pr) + (pr-c)
b 5,9 pr 19,5 c
31
23,7 Distancia experimento dos puntos
b-c
Relación entre frecuencia de recombinación y
entrecruzamiento (o distancia real de mapa)
Las distancias de mapa no son completamente aditivas porque los

dobles recombinantes entre dos marcadores A y C no se detectan
en un cruce de dos puntos, subestimándose la distancia A y C
A B C A B C
A b C
a B c
a b c a b c
•La relación entre la distancia real de mapa (número de
entrecruzamientos) y la frecuencia de recombinación entre dos
marcadores o loci no es lineal. Cuanto más lejos están los marcadores
peor es la estima
•La frecuencia de recombinación (FR) entre dos marcadores no puede
superar el 50%
FR  0,5

32
Función de mapa
Es una función que permite estimar la distancia de mapa mejor que
empleando solamente la frecuencia de recombinación, pues corrige
los intercambios (entrecruzamientos) no detectados
50
FR 40
observada 1 
(%)
30 FR  (1  e )
20
2
10
=1 =2 =3 =4

Número medio de entrecruzamientos por meiosis
50 100 150 200
Zona de33 linealidad Unidades de mapa
Tema 5: reales
Ligamiento y mapas genéticos 33
¿Por qué la frecuencia de recombinación (FR)
entre dos marcadores no puede superar el 50%?
Demostración 1: Muchos entrecruzamientos entre a y b
Es igual de probable cualquier combinación,

++,
ab,
a+,
+b,
es como si segregaran independientemente ambos
loci. Luego, la FR máxima es 50%

34
¿Por qué la frecuencia de recombinación (FR)
entre dos marcadores no puede superar el 50%?
Demostración 2: caso completo para 1 ó 2 entrecruzamientos
FR promedio de un doble
entrecruzamiento = 8/16 = 50%

35
Mapa a partir de cruzamientos prueba de tres
puntos (tres loci en el mismo cromosomas)
Metodología A B C
•Triple heterocigoto X homocigoto recesivo
(cruzamiento prueba) -> ABC/abc X abc/abc
•Si hay ligamiento, no se observa en la F2 la
proporción fenotípica 1/8 para cada tipo de gameto
•Se agrupan las clases recíprocas (aquellas
que tienen un fenotipo mutante en el par recíproco, como el par de
fenotipos fenotipos ABC-abc ó Abc-aBC. Las clases recíprocas deben
ser de frecuencia parecida
•Orden de los genes:
•Los fenotipos no recombinantes (parentales) son los más
frecuentes
•Los fenotipos menos frecuentes resultan de un doble
entrecruzamiento
•Al comparar los fenotipos no recombinantes con los doble
entrecruzados, el gen del medio es el que está cambiado
•Distancias de mapa: a la distancia entre genes consecutivos debe

sumarse36 las frecuencias de los dobles entrecruzamientos
Ejemplo:
Tres mutantes marcadores
b = Cuerpo negro; pr = Ojos Púrpura; c = curved, alas
curvadas
Los tres alelos son recesivos respecto al salvaje
P b+ b+ pr+ pr+ c+ c+ X bb prpr cc
F1 b+b pr+ pr c+ c X bb pr pr vg vg
Si no están ligados Si están ligados
1/8 bb prpr cc 1/2 bb prpr cc

1/8 bb prpr c+c 1/2 b+b pr+pr c+c
F2
1/8 bb pr+pr cc
1/8 bb pr+pr c+c
1/8 b+b prpr cc
1/8 b+b prpr c+c
1/8 b+b pr+pr cc
37 1/8 b+b pr+pr c+c
Resultados del cruzamiento prueba, F2
Fenotipo Genotipo Número Número de

recombinantes entre
b-pr pr-c b-c
Salvaje b+b pr+pr c+c 5701

Black, purp, cur bb prpr cc 5617
Purp,curved b+b prpr cc 388 388 388
Black bb pr+pr c+c 367 367 367
Curved b+b pr+pr cc 1412 1412 1412
Black,purp bb prpr c+c 1383 1383 1383
Purp b+b prpr c+c 60 60 60
Black,curved bb pr+pr cc 72 72 72
Total 15 000 887 2927 3550
Porcentaje 5,9% 19,5% 23,7%

El gen pr está en el medio
38
Tetrada meiótica Gametos
Entrecruzamiento entre b y pr
b pr c b pr c
b pr c b pr+ c+
b+ pr+ c+ b+ pr c
b+ pr+ c+ b+ pr+ c+
Doble entrecruzamiento en la región b-pr-c
b pr c b pr c
b pr c b pr+ c
b+ pr+ c+ b+ pr c+
b+ pr+ c+ b+ pr+ c+

39
Mapa genético de los marcadores
La mejor estima distancia

entre los extremos es la
25,4 suma (b-pr) + (pr-c)
b 5,9 pr 19,5 c
23,7 Distancia b-csin considerar los

dobles recombinantes

40
Coeficiente de coincidencia: mide si los
entrecruzamientos son independientes entre sí
•Si los múltiples entrecruzamientos suceden

independiemente los unos de los otros, la frecuencia de
los dobles entrecruzamientos será al producto de la
frecuencia de los intercambios sencillos
•Coeficiente coincidencia (CC) = (número de dobles

entrecruzamientos observados)/(número de dobles
entrecruzamientos esperados)
•Si CC < 1, dobles disminuidos
•Si CC > 1, dobles incrementados
•Interferencia: 1 - CC

41
Mapa de
ligamiento parcial
de los 4
cromosomas
de Drosophila
melanogaster

42
Mapas genéticos (de recombinación)
versus mapas físicos

43
Importancia mapas de recombinación
• Describir Ias tasas de recombinación a lo largo del

genoma
• Predecir la transmisión genética de un gameto
• Localización de genes que influyen el fenotipo (QTLs)
• Marco de referencia para cartografía física
• Marco de referencia para la cartografía de genes
asociados a enfermedades Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 44

44
Mapas genéticos versus mapas físicos
Frecuencia de recombinación por unidad de DNA
Especies Tamaño haploide Unidades de mapa Tamaño de la unidad mapa Distancia media
del genoma entrecruzamien-
tos consecutivos
Fago T4 1.6 x 105 pb 800 200 pb 1.0 x 10 4 pb

E. coli 4.2 x 106 pb 1750 2400 pb 1.2 x 10 5 pb
Levadura 2.0 x 107 pb 4200 5000 pb 2.5 x 10 5 pb
Hongo 2.7 x 107 pb 1000 27000 pb 1.3 x 10 6 pb
Nemátodo 8.0 x 107 pb 320 250000 pb 1.2 x 10 7 pb
Mosca de la
fruta 1.4 x 108 pb 280 500000 pb 2.5 x 10 7 pb
Ratón 3.0 x 109 pb 1700 1800000 pb 9.0 x 10 7 pb
Humanos
Varón 3.3 x 109 pb 2809 1200000 pb 6.0 x 10 7 pb
Mujer 3.3 x 109 pb 4782 700000 pb 3.5 x 10 7 pb

45
Análisis de tétradas
Los hongos
ascomicetos
retienen los cuatro
productos
haploides de cada
meiosis en un saco
denominado asca

46
Hongos ascomicetos
Estos organismos son únicos porque se puede analizar meiosis individuales,
permitiendo estudiar aspectos básicos de la genética de la meiosis (un proceso
central de la biología de los eucariotas)
•Cartografiar los centrómeros como si fuesen loci
•Investigar la posibilidad de interferencia de cromátida
•Examinar los mecanismos de entrecruzamiento
Ustigalo
Aspergillus hordei Neurospora
Coprinus nidulans (basidio crassa
Lagopus Ascobolus miceto)
(basidiomiceto) immersus
Saccharomyces
cerevisiae
Tétradas Octadas Tétradas Octadas

Patrones distintos de
ascosporas y ascas en
No ordenadas Lineales
Neurospora
47
Meiosis y mitosis postmeiótica en la tétrada lineal de Neurospora

48
Distancia de un locus al centrómero en
Neurospora
No recombinación entre el
locus y el centrómero
4:4

49
Recombinación entre el locus
y el centrómero
2:2:2:2

50
Distancia de un locus al centrómero: estímese el porcentaje de
tétradas que muestran patrones de segregación en la segunda división para
ese locus y divídase por 2
Patrones MII = 9 + 11 + 10 + 12 = 42 o sea 14%

Puesto que sólo la mitad de los cromosomas que sufren entrecruzamiento son
recombinantes, la distancia de mapa (medida como frecuencia de
recombinación) será 14/2 = 7 unidades de mapa Temaó5:cM

Ligamiento y mapas genéticos 51
51
Demostración citológica del entrecruzamiento
Técnica de cromosomas arlequinados
•Demuestra el intercambio de cromátidas

•Coincidencia entre quiasma y lugar de intercambio
•La existencia de recombinación mitótica

52
Retinoblastoma hereditario por
entrecruzamiento mitótico

53
Retinoblastoma hereditario por
entrecruzamiento mitótico
R
R
r
Mitosis
r
R
R R
r Célula normal R/R
R
r
r
Dr. Antonio Barbadilla Célula retinoblastoma r/r

54
Cartografía en humanos
Mapas genéticos (de Mapas físicos

recombinación)
•Métodos especiales de
•Herencia ligada al cultivo celular: hibridación de
cromosoma X células somáticas
•Marcadores polimórficos •Hibridación in situ de sondas
asignados a colecciones de de DNA en cromosomas
familias (CEPH). metafásicos
•alozimas •Secuenciación del DNA
•DNA (RFLPs,
microsatélites, RAPDs,...)
•La caza de genes asociados a
enfermedades

55
Cartografía genética en humanos
Estudios familias
•Herencia ligada al cromosoma X
marcadores clásicos
•Autosómicos marcadores clásicos
•Cartografía marcador-enfermedad
•La caza de genes asociados a enfermedades
•Cartografía marcador-marcador
•Estudios marcadores polimórficos asignados a
colecciones de familias (CEPH).
DNA (Microsatélites, RFLPs, RAPDs,...)

56
Mapa genético
de alta
resolución del
Cromosoma 1
Homo sapiens.
The Cooperative
Human Linkage
Center
http://lpg.nci.nih.gov/CHLC/

57
Cartografía a través de la herencia ligada al cromosoma X
(359 loci se han asignado al X)
Xg Proteína grupo sanguíneo
Ictiosis (un efermedad de la piel)

Albinismo ocular
Angioqueratoma (crecto celular)

Centrómero
Fosfoglicerato-quinasa
Alfa-galactosidasa
Xm
Deutan (ceguera color rojo-verde)

G6PD
Protano (ceguera color rojo-verde)
Hemofilía A

58
Ligamiento
Ligamiento yy recombinación
recombinación en
en bacterias
bacterias yy
virus
virus
Procesos sexuales en bacterias y virus: Transformación,

conjugación, transducción y sexducción en bacterias y
recombinación vírica
•Conjugación
•Ciclo biológico de fagos

59
Procesos sexuales en bacterias y virus
Proceso sexual:
combinación del
Transformación material genético
de dos individuos
distintos
Conjugación
Recombinación
vírica
Transducción

Sexducción
60
Incorporación del material genético por transformación
Se requiere un doble entrecruzamiento para la transformación
Ejemplo del uso de la fecuencia de transformación para estimar distancias genéticas:

Una cepa his+ met+ se transforma con his- met-
34 hist- met+
28 hist+ met- Distancia entre ambos genes =
194 hist- met- (transformantes sencillos/total transformantes) =
Dr. Antonio Barbadilla (34 + 28 )/(34 + 28 + 194) = 0,24
61
Conjugación bacteriana

62
Cinética conjugación bacteriana

63
Conjugación, recombinación y mapas

64
Mapa
bacteriano por
conjugación.

Unidades en minutos
65
Virus bacteriófagos:
•Fase lítica o
infecciosa
•Fase lisogénica
(la bacteria o
huésped
lisogénico y el
fago
temperado)

66
Virus bacteriófagos:

67
Transducción:
•Especializada o
restringida
•Generalizada
Recombinación bacteriana por transducción


68

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Ligamiento

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 1

Deberán quedar bien claros los siguientes puntos

•Los conceptos de ligamiento, recombinación y

Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 2

Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 5

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 6

+: salvaje Cy: Curly sd: scalloped

ap: aptera vg: vestigial dp: dumpy

Dr. Antonio Barbadilla

D: Dichaete c: curved Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 7

•Simbolismo del ligamiento

Configuración en acoplamiento o cis -> AB/ab

•Prueba de ligamiento: desviación de la

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 8

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 9

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 10

Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 12

•Recombinación intracromosómica: genes

situados en el mismo cromosoma --->

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 16

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 17

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 18

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 19

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 20

La cartografía genética asigna el lugar

A. Sturtevant (1913). La distribución y

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 21

Unidad de distancia: La unidad de mapa (u.m.) o el

Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 23

•Más Entrecruzamientos ---> Más Recombinación

A mayor frecuencia de recombinación

Se determina la distancia 2 a 2 entre loci y éstas

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 25

P pr+ pr+ vg+ vg+ X pr pr vg vg

pr+ vg+ 1339

Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 27

pr+ vg+ 1339

FR = 305/2839 = 0,107 = 10,7 cM

Dr. Antonio Barbadilla

10,7 cM Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 28

¿Cuál es el orden de los genes? Las distancias deben ser

Supongamos las tres ordenaciones posibles

Dr. Antonio Barbadilla

Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 29

Dr. Antonio Barbadilla

Las distancias de mapa no son completamente aditivas porque los

Tema 5: Ligamiento y mapas genéticos 32

=1 =2 =3 =4

Es igual de probable cualquier combinación,

loci. Luego, la FR máxima es 50%