Université de karman

Faculté des science

Département de SNV LMD
1er master reproduction animale

Intérêt de dosage de GnRH

Présentée par :
 Henni imene
 Elkhdim djihad
 PLAN:
I. Introduction
II. Hormone de libération des
gonadotrophines hypophysaire
III.Le dosage hormonale
IV.Techniques de dosage
V. Applications d’immunologique
[RIA et ELISA]
VI.Conclusion
 Introduction
• Les secrétions de l’antéhypophyse sont multiples et
interviennent dans la majorité des systèmes endocriniens :
fonctions gonadotrope, thyréotrope, corticotrope,
somatotrope et prolactine.
• Les secrétions hypophysaires font partie d’un
ensemble : elles sont soumises à l’action de
l’hypothalamus dont le système neuro-secrétoire dirige
leur activité (hormone de libération hypothalamique)

•A chacune des secrétions hypophysaires correspond un

facteur de libération ou d’inhibition hypothalamique.
 Hormone de libération des
gonadotrophines hypophysaires:
• Les fonctions de reproduction dépendent de régulations complexes
impliquant les deux grands systèmes de communication de
l'organisme : les systèmes hormonal et nerveux. Le système nerveux
central intervient essentiellement par l'intermédiaire d'une hormone
(GnRH).
•L'hormone de libération des gonadotrophines hypophysaires
appelée aussi parfois lulibérine gonadolibérine GnRH ,(ou LHRH)
est une hormone peptidique responsable de la synthèse et de la
sécrétion de la FSH et de la LH par l’anté-hypophyse. C’est une
neurohormone, car ce sont des neurones de l’hypothalamus qui la
synthétisent.
• Les neurones a GnRH prédominent dans le noyau arqué de
l’hypothalamus . Ils naissent dans la placode olfactive et migre
vers l’hypothalamus et l’aire préoptique pendant la vie fœtale.
A) Structure de GnRH:
• C’est un peptide de 10 acides aminés. Deux
acides aminés sont essentiels a l’activité
biologique la His et le Trp . Tandis que les acides
aminés N et C terminaux sont responsables de la
reconnaissance du récepteur.
pyroGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly
CONH2
•le clivage protéolytique de GnRH est responsable
de sa très courte durée de vie. Cette demi-vie brève
est nécessaire a la pulsatilité de sa sécrétion.
B) demi-vie:
• La demi-vie de la GnRH est de l’ordre de 4 a 7 minutes
C) Sécrétion pulsatile variable en fréquence et en
amplitude au cours du cycle menstruel:
– début de phase folliculaire : 1 à 2 pulses par heure
– Fréquence augmentée en fin de phase folliculaire et en période
pré-ovulatoire
– Ralentissement en phase lutéale (action de la Prog) 1 pulse/4h

 Les modifications (physiologiques ou pathologiques) de la

fréquence des pulses de GnRH influence :
 Variations de FSH et LH
 Répercussions sur le fonctionnement ovarien et tissus cibles
Au niveau hypophysaire:
• La GnRH se lie sur les récepteurs membranaires des cellules
gonadotropes.
• La présence de GnRH est nécessaire à la sécrétion et à la
biosynthèse de la sous-unité α et des sous-unités ß des
gonadotrophines, qui forment la LH et la FSH.

D)MODE D ’ACTION ET ACTIVITÉ

BIOLOGIQUE DE LA GNRH:
• La GnRH stimule la synthèse des chaînes α et β de la LH et FSH,
leur glycosylation et leur sécrétion.
• La GnRH régule ses propres récepteurs
 La sécrétion continue de GnRH diminue le nombre de
récepteurs Effet down-regulation
 La sécrétion pulsatile de la GnRH induit la synthèse de
ses propres récepteurs Effet up-regulation
 MODE D ’ACTION ET ACTIVITÉ
BIOLOGIQUE DE LA GNRH

Désensibilisation hypophysaire par la GnRH en continu

E)RÉGULATION DE LA SÉCRÉTION DE
LA GNRH
Rétrocontrôle par les hormones stéroïdes :
• Inhibent la transcription des gènes des ss -u α et β :
-Si taux bas d’E2 : augmentation de FSH et LH
-Si taux élevé d’E2 : baisse de FSH et LH
Régulation par les neuropeptides :
-neuropeptide Y (NPY) et acide glutamique ont une action
stimulatrice
-la dopamine et la mélatonine ont une action inhibitrice
Activité:
•L'activité de la GnRH est très faible chez l'enfant. Elle
apparait au moment de la puberté pour installer le
développement des fonctions reproductives.
•Quoi que synthétisée en continu, elle est sécrétée de
façon pulsatile (avec une décharge toutes les 60 à 90
minutes).

•Chez la femme, sa sécrétion varie aussi de manière

cyclique, avec un pic qui entrainera l'ovulation. Lors
d'une grossesse, la synthèse et la sécrétion de GnRH
s'arrête, de même qu'en période d'allaitement (par un
rétrocontrôle négatif de la prolactine).
Contrôle de la FSH et de la LH
•La GnRH stimule la synthèse et la libération des
gonadotrophines FSH et LH, processus qui est contrôlé
par la fréquence et l'amplitude des oscillations de GnRH,
elles-mêmes contrôlées par la quantité d'
hormones sexuelles dans le sang (testostérone pour
l'homme ; œstrogène et progestérone pour la femme).

•Ainsi, une seule hormone, la GnRH, contrôle un

processus complexe permettant le développement d'un
follicule ovarien, l'ovulation, et le maintien du
corps lutéal (corps jaune) dans le cycle menstruel chez la
femme, mais contrôle aussi la spermatogénèse chez
l'homme.
 Profils de sécrétion de GnRH, LH et testostérone

Le graphique montre l'évolution de la concentration des

diverses hormones impliquées dans la reproduction chez les
mâles de mammifères
 F) Le dosage hormonale:
Quel est l’intérêt des dosages ?
Selon l’hormone dosée, il sera possible de savoir en cas de
troubles gynécologiques manifestement hormonaux, s’il
s’agit d’un mauvais fonctionnement de l’hypophyse qui ne
stimule pas correctement les ovaires, ou s’il s’agit plutôt
d’une hypophyse qui fabriquent correctement ses
hormones de commande mais qui n’obtient pas de
réponse par des ovaires fatigués.
• Dosages en base = exploration statique
– Ex : E2, T,
• Dosages après stimulation et/ou freination
 Exploration dynamique
 Test au GnRH,
 Test au TRH
 Tests de stimulation:
(Le test a la LH-RH (ou a la GnRH))
Principe:
ce test permet d’explorer la fonction gonadotrope hypophysaire .
Il test la capacité de réponse de l’hypophyse a un apport
exogène et ponctuel de GnRH

Protocole:
Après l’injection intraveineuse (I.V) de 100 μg de LH-RH chez une
femme cyclique ,le test doit être pratiqué en phase folliculaire
(entre J3 et J7), on étudie les variations de la FSH et de la LH
plasmatiques à t(-15), t0, t15, t30, t60, t90, t(120).
Résultat :
-La LH atteint son maximum entre la 15éme et la 30éme minute,
la FSH entre la 30éme et la 120éme minute.

-Une réponse est positive si le taux de base de FSH est multiplié

par 1,5 à 2 et le taux de LH par 3 à 5.

-La réponse est variable selon sexe et l’âge : avant la puberté chez
le garçon, l’élévation est très limitée pour les deux
gonadotrophines. Chez la fille, une réponse de la FSH est
observée, celle de la LH n’apparaît qu’à la puberté. Chez la femme
réglée, la réponse de la FSH est faible en phase folliculaire ; celle
de la LH est très marquée pendant la période ovulatoire
immédiate, elle se réduit en période post-ovulatoire.
-La valeur des hormones gonadotropes doit toujours être
confrontée aux valeurs correspondantes des hormones cibles
(œstradiol, progestérone, testostérone).

-La mesure du taux de base de FSH et LH permet, lorsque le

taux est très élevé et que les stéroïdes correspondants sont
bas, de s’orienter vers un déficit des glandes cibles (dysgénésie
gonadique, ménopause précoce).

-Des taux bas d’estradiol chez la femme ou de testostérone

chez l’homme en présence de gonadotrophines non élevées
(normales ou basses) sont le témoin d’une insuffisance
gonadotrope. Toutefois, le taux de testostérone peut fluctuer et
plusieurs dosages sont parfois nécessaires pour poser le
diagnostic d’insuffisance gonadotrope.

-Le test à la GnRH permet d’apprécier le caractère partiel ou

complet de cette insuffisance.
Dosage de la concentration plasmatique de GnRH dans le sang
de la tige hypophysaire (qui relie l'hypophyse à l'hypothalamus)
pendant 16 heures.
Techniques de dosage
TECHNIQUES
IMMUNOLOGIQUES
 Classification des méthodes de dosage
immunologiques
Traceur Dosage avec Dosage sans
compétition compétition
(anticorps limitant) (anticorps en excès)
Radiomarqué Radioimmunoassay Immunoradiometric
(RIA) assay (IRMA)
Enzyme Enzymoimmunoassay Enzyme-labeled
(EIA) immunosorbent assay
(ELISA)
Fluorescent Fluoroimmunoassay Immunofluorometric
(FIA) assay (IFMA)
Luminescent Luminoimmunoassay Immunoluminometric
(LIA) assay (IFLA)
Radioimmunologie (RIA) :
(Radio
Immuno Assay)
 Définition:
-La méthode de dosages radio-immunologiques ou
immuno-isotopique est une technique de
médecine nucléaire in vitro qui utilise des composés
radioactifs (iode, tritium ……) associés à des antigènes.

-Elle sert à
doser de manière très précise des substances biologique
s
tels que les anticorps, les hormones, les enzymes, ou les
stéroïdes.

-Elle a été mise au point dans les années 1950 par les
américains Solomon Berson et Rosalyn Yalow.
 Principe :
La RIA classique repose sur le principe d'une liaison
compétitive mettons en présence une certaine
quantité d'anticorps spécifique d'un antigène
donnée et cette même antigène préalablement
marqué par radio isotope .Un complexe anticorps
antigène se forme selon l'équation suivante :
 Méthodes radio-immunologiques:
L’application des méthodes radio-immunologiques
nécessite des réactifs et doit respecter certaines étapes à
suivre:

•Les réactifs:
1. l’anticorps non marqué
2. l’anticorps marqué
3. l’antigène marqué par un radionucléide
4. l’antigène en solution standard
5. le réactif de séparation du complexe
•Étapes à suivre:
1. Le réactif de capture est fixé sur un polymère solide
(bille, surface plane, etc..)
2. Incubation avec le liquide contenant la molécule à
doser
3. Lavage pour éliminer ce qui n’est pas fixé
4. Incubation avec le réactif marqué
5. Lavage
6. Mesure du signal du marqueur proportionnel au
produit à doser
l'aspect typique d'un étalonnage en
radio immunologie.
 Dosages avec réactif limitant :
méthodes par compétition ou méthodes
indirectes
L'antigène à doser entre en compétition avec
l'antigène marqué pour la liaison à l'anticorps ;
la totalité des sites anticorps disponibles est
liée. On peut procéder en phase liquide
homogène ou en phase solide hétérogène ;
dans ce dernier cas, la séparation des
fractions libre et liée est facilitée.
 Anticorps

Antigène Antigène marqué

marqué + échantillon
La Séparation des phases lié et libre:
 On mesure la fraction liée qui diminue
exponentiellement avec la concentration
en Ag à doser
 Compteur radioactif permettant de quantifier le
nombre de complexe formé par désintégration d’atome
radioactif
 Avantages:
Méthode analytique combinant la sensibilité des
mesures radioactives et la spécificité réactions
antigènes-anticorps.

Méthodes très sensible: possibilité de doser des

substances à de très faible concentrations.

Signale d’émission directe et spontané

 Inconvénients:
 Effet crochet pour les concentrations élevées
 Intoxication par les composés radioactifs
 Absence d'Ag froid :grande quantité de traceur
(nombreux complexes Ag*- Ac).
L'immunisation est plus difficile à obtenir pour des
substances de faible poids moléculaire.
 Plus il y a d'Ag dans l'échantillon, moins les Ag*
peuvent lier l'Ac.
 La plage de mesure est restreinte
 la réalisation du blanc est parfois difficile
Application de la technique radio
immunologique
La technique de dosage radio-immunologique a
révolutionné la pratique de la recherche et clinique dans
de nombreux domaines, par exemple:

_ banques de sang
_ diagnostic d'allergies
_ endocrinologie
 Applications d’ immunologique [RIA et
ELISA]
Analyse des hormones, des vitamines, des métabolites,
des marqueurs diagnostiques Par exemple:
ACTH, FSH, T3, T4, le glucagon, l'insuline, la
testostérone, la vitamine B12, des prostaglandines, des
glucocorticoïdes.

Suivi des concentrations thérapeutiques:

Barbituriques, la morphine, la digoxine,

Procédures de diagnostic pour détecter une infection:

VIH, l'hépatite A, B, etc.
 CONCLUSION
 La gonadolibérine (GnRH) a été isolé à partir
d’hypothalamus comme une hormone
hypothalamique peptide qui régule le système
reproducteur en stimulant la libération des
gonadotrophines par l’hypophyse antérieure.

Les dosages hormonaux présentent un intérêt

certain s’ils sont prescrits à bon escient et couplés
à un interrogatoire et un examen clinique
minutieux
Les dosages doivent être effectués dans de
bonnes conditions de base pour les
gonadotrophines jamais en cours de prise de
pilule ou après J5 si la femme est réglée
RIA est une méthode efficace, exacte et
précise de quantifier les concentrations d'un
antigène.
Ne nécessite l'approbation et de la formation
pour travailler avec des matières radioactives.
Modification d'un procédé de dosage peut être
difficile et prend du temps