Study of the Biological and

Physiochemical Properties of
Copper Nanoparticles'
Associates
Dr. Vladimir B. Borodulin, Full Professor &
Head, Biochemistry Department,
Saratov State Medical University, Russia
Nanoparticles
What is a nanoparticle?
 Радиус меди в ангстремах:
Атомный - 1.278 (0.1278 нм)
Ковалентный - 1.17 (0.117 нм)
Ион меди (+1) - 0.96 (0.096 нм)
Ион меди (+2) - 0.72 (0.072 нм)

1 нм = 10 ангстремам
1 ангстрем = 0.1 нм

1 наночастица = 10 – 1000 ангстремов или 1-100

нанометров
1наночастица = 10 -1000 атомов хим.эл.

John Emsly, “The Elements”,Oxford,1991

 Физико-химические свойства некоторых ультрадисперсных порошков,
синтезируемых на плазменных установках комплекса.

Средний Удельная Насыпная

размер поверхность S, плотность, Цвет Примечания
Материал
частиц, А м2/г г/см3
Темно-
Cu 400–1000 6–15 0,5–1,0 Пирофорен
коричневый
Fe 300–700 10–25 0,4–0,6 Черный Пирофорен
Ni 400–1000 6–15 0,4–0,6 Черный Пирофорен
Zr 700–800 10–15 0,3–0,5 Черный Пирофорен
Ti 400–800 15–25 0,1–0,2 Черный Пирофорен
Светло-
Si – 50–100 0,04–0,06 Пирофорен
коричневый
Zn 800–1000 10–15 0,2–0,4 Серый Пирофорен
Mn 700–1000 15–30 0,3–0,5 Темно-серый Пирофорен

Al2O3 200–800 20–50 0,2–0,5 Белый

 Fe2O3 300–450 30–60 0,4–0,8 Темно-красный
ZrO2 150–500 15–25 0,4–0,7 Белый
На воздухе
AlN 700–1000 15–25 0,15–0,2 Светло-серый
нестабилен
SiC – 15–30 0,3–0,35 Светло-серый Стабилен
Fe*C – 75–150 Черный Стабилен
Cu*Ni 400–1000 6–15 Пирофорен
Cu*Sn 400–1000 6–16 Пирофорен
Al
B
BN
Mg
Zr

мечания:
1. Уровень примесей зависит в основном от хим. состава используемого сырья.
2. Форма частиц – сферическая (кроме SiC).
3. В таблице не приведены более сложные сплавы, а также порошки, легированные различными элемент
 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Нанопорошок меди получают из меди марки ПМС1 ГОСТ 4960 – 75 с
помощью плазменной технологии, основанной на испарении сырья
(крупнодисперсного порошка или прутка) до ультрадисперсных частиц
требуемого размера в плазменном потоке с температурой 5000-60000 К
и конденсации пара.

НЧ меди были синтезиро­ваны на Саратовском плазмохимическом ком

плексе ФГУП РФ ГНЦ ГНИИХТЭОС.

Оптические методы исследования были реализованы на

спектрофотометре «Lambda 950» и флюориметре LS-55 «Perkin
Elmer». ФГБУ НИЦ КИ ПИЯФ, Гатчина

Состав и точные размеры отдельных частиц определены при

помощи электронного микроскопа «Tescan Mira II LMU». ФГБУУП
НИЦ КИ — ЦНИИ КМ "Прометей", Санкт-Петербург

Проведен анализ фазового состава НЧ меди методом рентгеновской

дифрактометрии с использованием многофункционального
Электронная микроскопия
наночастиц меди
Трёхмерная картина поверхности приклеенных к стеклу наночастиц
меди с использованием установки для атомно-силовой микроскопии
«NTEGRA Specta» (ЗАО «НТ-МДТ», Россия
 Intensity (cps)

0
0
0
0

50
50
50

100
100
100
200
400
600
800
1000
1200
1400
1600
1800

20
20
(1 1 0) Cu2 O, (1 1 0)
Cu O,
(1 1 1) CuCu2
O, O, (1 1 1)

40
40
Cu O,
(2 0 0) (1 1 1) Cu2 O, (2 0 0) Cu, (1 1 1)

(2 0 0) Cu O, Cu, (2 0 0)
(2 1 1) Cu2 O, (2 1 1)
Cu O,
CuO,

60
60

Cu O,

2-theta (deg)
(2 2 0) Cu
Cu2O,O, (2 2 0)
образца

(2 2 1) Cu2 O, (2 2 1)
Cu O,
(3 1 0) Cu O,
Cu2 O, (3 1 0)
Cu

(3 1 1) Cu
Cu2O, (3 1 1)
(2 2 0) Cu,O,
(2 2 0)
Tenorite

Cu O,
(2 2 2) Cu2 O, (2 2 2)
Cuprite, syn

80
80

Cu O,
Cu O,
(3 2 1) Cu2 O, (3 2 1)
Cu O,
(3 1 1) CuCu,
O, (3 1 1)
(4 0 0) Cu2 O, (4 0 0)
(2 2 2) Cu (2 2 2)
Cu,O,
(3 2 2) Cu2 O, (3 2 2)
100
100

(3
(4 31 0)
1) Cu O,
Cu2 O, (4 1 1)(3 3 0)
Meas. data:2_Cu_o_2018-03-15/Data 1

(3 3 1) Cu O,
Cu2 O, (3 3 1)
Дифрактограмма исследованного

(4 2 0) Cu O,
Cu2 O, (4 2 0)
Cu O,
(4 2 1) Cu2 O, (4 2 1)
(3 3 2) Cu2 O, (3 3 2)
(4 0 0) Cu, (4 0 0)
120
120

Tenorite
Cuprite, syn
Cu

Cu O,
Выявлены отражения, указывающие
на присутствие в пробе :

- металлической меди-Cu

- куприта Cu2O

- тенорита CuO.
 Спектр В стат. O C Cu Итог
1 Да 12.42 5.58 82.00 100.00

2 Да 11.65 3.97 84.38 100.00

3 Да 14.64 5.40 79.95 100.00

 
Среднее 12.91 4.98 82.11 100.00
Станд.
1.55 0.89 2.22
отклонение
Макс. 14.64 5.58 84.38
NBIC-technology

N – nano
B – bio
I – information
C – cognitive brain function
 Способы введения наночастиц
Fe + магнитное поле
Fe + СВЧ
Si + ультразвук
Гамма-излучение
Рентгеновское излучение
10 1 7 4
 
5 𝐵 + 𝑛→ 𝐿𝑖 + 𝐻𝑒
0 3 2
27 1 24 4
 
13 𝐴𝑙 + 𝑛 → 𝑁𝑎+ 𝐻𝑒
0 11 2
56 1 56 1
 
26 0𝐹𝑒 + 𝑛 → 𝑀𝑛 + 𝑝
25 1
  𝑀𝑛 → 56 𝐹𝑒 + 0 𝑒 + ~
56
𝜈 1. Per os
25 26 −1
2. Аэрозоль
63 3. Внутривенно
 
29 𝐶𝑢+ 11 𝑝 → 63
30 𝑍𝑛 + 1
0𝑛 4. Внутримышечно
63
 
29 𝐶𝑢+ 11 𝑝 → 62
30 𝑍𝑛 +2 1
0𝑛
5. Внутрибрюшинно
63 6. Подкожно
 
29 𝐶𝑢+ 11 𝑝 → 62
29 𝐶𝑢 + 1
0 𝑛 + 1
1𝑝 7. В опухоль
 Nanoparticles
в фосфолипидной,
без оболочки липопротеидной,
полисахаридной или
белковой оболочке
Liver

Stomach
- pepsin

Lymphatic Pancreas
duct - lipase
Pinocytosis - phospholipase
Phagocytosis A, B, C, D
- chymotrypsin
Hylomicrones ~ 1 mkm
- trypsin
Nanoparticles – 30-100 nm - amylase
Fgregates ~ 1 mkm Intestine
- lactase
- maltase
- sucrase
- isomaltase
 Биологическая активность
наночастиц меди
На клетки прокариотов
Антибактериальная активность
Антибактериальная активность в сочетании с пептидами

На раковые клетки эукариотов

Аденокарцинома легкого человека А 549
Раковые клетки HeLa

На многоклеточные организмы
rats with fibrosarcoma C-45
rats with Pliss lymphosarcoma
генотоксическая активность (Studies were performed on white
outbred mice.)
биохимическая активность (Studies were performed on white
outbred mice.)
 Антибактериальное
действие наночастиц меди
Антибактериальное действие
наночастиц меди
антибиотикорезистентные штаммы
бактерий выделенных от пациентов
травматолого-ортопедического
стационара:
E.coli
P.aeruginosa
S.epidermidis
St. Aureus
B.tuberculosis
 Антибактериальное действие пептидов на клетки
St. aureus в сочетании с наночастицами меди
2000
1800
1600
Контроль
1400
Количество КОЕ

Наночастицы меди
1200
Наночастицы меди + пептид 1
1000
Наночастицы меди + пептид 4
800
600
400
200
0
0 30 60 90 120
Время воздействия, мин
 Антибактериальная активность наночастиц меди по
отношению к антибиотикорезистентным штаммам E. coli
100
Количество микробных клеток, %

90
0,01 мг/мл
80
0,05 мг/мл
70
0,1 мг/мл
60
1 мг/мл
50
40
30
20
10
0
0 30 60 90 120
Время воздействия, мин
 Антибактериальная активность наночастиц меди по
отношению к антибиотикорезистентным штаммам
P.aeruginosa
100
Количество микробных клеток, %

90
0,01 мг/мл
80
0,1 мг/мл
70
0,5 мг/мл
60
1 мг/мл
50
40
30
20
10
0
0 30 60 90 120
Время воздействия, мин
 Антибактериальная активность наночастиц меди по
отношению к антибиотикорезистентным штаммам
S.epidermidis
100
90
0,01 мг/мл
80
Microbial cells count, %

0,05 мг/мл
70
0,1 мг/мл
60
50
40
30
20
10
0
0 30 60 90 120
Time since exposure, min
 Подавление роста клеток
туберкулеза с использованием
наночастиц меди
Клеточная линия А549
(рак легкого человека -
аденокарцинома)
+
наночастицы Cu.
Паспорт клеточной линии
А549
Коллекции: НИИ вирусологии РАМН; ATCC CCL 185

Происхождение: человек, карцинома легкого.

Морфология: эпителиоподобная

Способ культивирования: монослойный

Сыворотка – эмбриональная бычья 10 %

Оптимальная плотность :2.0-4.0 x 104 клеток/см2

Криоконсервация– ростовая среда (5-10% DMSO или глицерина),

1.0 – 1.5 x106 клеток/мл в ампуле.

Жизнеспособность после криоконсервации: 97% (окраска трипановым синим)

Изменение метаболической
активности монослойной
клеточной линии А 549
 Противоопухолевая активность
наночастиц меди при действии на клетки
аденокарциномы легкого человека
клеточной лини А549
 Определение дыхательной активности
проводили по способности клеток
восстанавливать нитротетразолевый синий
([3-(4.5-dimethylthiazol-2yl) ]-2.5
diphenyltetrazoliumbromide) до формазана
по общепринятому методу
Bernas T., Dobrucki J.W. The role of plasma
membrane in bioreduction of two tetrazolium
salts, MTT, and CTC // Arch. Biochem.
Biophys. 2000. V. 380. P. 108-116.
Окрашивание живых клеток
клеточной линии А 549 при
исследовании препарата
наночастиц меди.
А- 500 мкг/мл, Б- 50 мкг/мл,
В- 5 мкг/мл.
Окрашивание живых клеток клеточной линии А 549
при исследовании препарата наночастиц меди.
А- 500 мкг/мл, Б- 50 мкг/мл, В- 5 мкг/мл.
 Жизнеспособность культур
оценивали с помощью окрашивания
пропидиум иодидом и бисбензимидом
(Hoechst 33342) по методу
предложенному
Tissue Antigens 1978. 11: 279.
Цитотоксичность наночастиц меди
А - 500 мкг\мл и Б - 50 мкг\мл
 Культуру HeLa (рак шейки матки человека)
выращивали на покровных стеклах, где она
формирует монослой, в течение 24 часов в
термостате при 37оС в присутствии 5% СО2,
следующие 24 часа ее инкубировали с взвесью НЧ
металлов (концентрации НЧ 1 и 0,01 мкг/мл) в
объеме 10 мкл на 200 мкл среды.
Окраска по Романовскому-Гимза
 Раковые клетки HeLa
Раковые клетки (контроль)

Наночастицы меди –
0.01 мкг/мл

Наночастицы меди
– 1 мкг/мл
Саркома 45. Окраска по Браше, ув. х 400.
Рост

Частичная
регрессия

Полная
регрессия
 Саркома 45.
Окраска по Браше, ув. х 400.

Рост Частичная Полная

регрессия регрессия
 Лимфосаркома Плисса.
Окраска по Браше, ув. х 400.
Рост

Частичная
регрессия

Полная
регрессия
 Лимфосаркома Плисса.
Окраска по Браше, ув. х 400.

Рост Частичная Полная

регрессия регрессия
Животные с частичной регрессией лимфосаркомы Плисса

Животные с полной регрессией лимфосаркомы Плисса

 Изменение биохимических
показателей сыворотки крови
мышей под влиянием
наночастиц меди
 30 1.2

25 1
Концентрация, ммоль/л

20 0.8

15 0.6

10 0.4

5 0.2

0 0
Глюкоза Лактат Пируват

контроль 0,05 мг/кг 1,25 мг/кг

2,5 мг/кг 5,0 мг/кг
 250

200
Концентрация, г/л

150

100

50

0
Общий белок Альбумин

контроль 0,05 мг/кг 1,25 мг/кг 2,5 мг/кг 5,0 мг/кг

 10 450

9 400

8 350

Концентрация, мкмоль/л
Концентрация, ммоль/л

7 300
6
250
5
200
4
150
3
100
2

1 50

0 0
Мочевина Холестерин Креатинин

контроль 0,05 мг/кг 1,25 мг/кг

2,5 мг/кг 5,0 мг/кг
 4.5

3.5

3
Концентрация, мг/дл

2.5

1.5

0.5

0
общий билирубин прямой билирубин непрямой
билирубин

контроль 0,05 мг/кг 1,25 мг/кг 2,5 мг/кг 5,0 мг/кг

 250

200
Активность, МЕ

150

100

50

0
АсАТ АлАТ ГГТ

контроль 0,05 мг/кг 1,25 мг/кг 2,5 мг/кг 5,0 мг/кг

 3500

3000

2500
Активность, МЕ

2000

1500

1000

500

0
ЛДГ КФК Амилаза ЩФ

контроль 0,05 мг/кг 1,25 мг/кг 2,5 мг/кг 5,0 мг/кг

 Морфологические
изменения в органах мышей
при пероральном введении
наночастиц меди
 Морфологические изменения в органах мышей
при пероральном введении наночастиц меди

Изменение морфологии печени

Морфология почек Морфология селезенки Морфология легких

 Оценка генотоксичности наночастиц меди
8 микроядра
в клетках 7
7
печени
Количество микроядер, ед.

6
5
5
4
4
3 3 3
3
2 2 2 2 2 2
2
1 1 1
1
0 0 0 0 0
0
легкие печень почки селезенка

контроль 0,05 мг/кг 1,25 мг/кг 2,5 мг/кг 5,0 мг/кг

 Содержание метаболитов в плазме крови экспериментальных
животных –крыс-(в процентах от значений в контрольной группе,
принятых за 100%)
160
140
120
100

% 80
60
40
20
0
холестерин ЛПНП конъюгированный билирубин

контрольная группа группа с введением наночастиц меди

группа с введением соли меди
Фуллерены
Исследуемые соединения

Фуллерен С60
(Соединение 1)
 Исследуемые соединения

N-метил-1-[4-диметиламинофенил] N-метил-1-[4-нитрофенил]
фуллерено С60 [1,9с]-пирролидин фуллерено С60 [1,9с]-пирролидин
(Соединение 2) (Соединение 3)
 гуанин цитозин

Виток
34 нм спирали
0.7 ДНК
нм

аденин тимин

спираль ДНК
Блокирование Ловушка антигенов, токсинов,
роста клеток ксенобиотиков, ядов и т.д.

Блокирование Управление движением частицы

гормонального магнитным полем
сигнала

Меn+
Раковая клетка

Магнитное поле
V.B. Borodulina, M.D. Matasovb , I.A. Goroshinskayad,
P.S. Kachesovad, I.S. Okunevb, S.V. Petrovc, N.F.
Drozdovac, E.V.Bobylevaa, O.E. Loseva, E.G.
Chebotarevaa, N.G. Maltsevae, E.V. Borodulinaa

a
Razumovsky State Medical University, Saratov, Russia
b
Petersburg Nuclear Physics Institute, Gatchina, Russia
c
Central Research Institute of Structural Materials "PROMETEY",
Saint-Petersburg, Russia
d
Rostov Research Institute of Oncology, Rostov-on-Don, Russia
e
National Research Saratov State University, Saratov, Russia
Благодарю за внимание !
 Регенеративное действие наночастиц
металлов на экспериментальные гнойные и
условно-асептические раны
Экспериментальная рана животного опытной группы (а)
и группы сравнения (б) на 7-е сутки исследования.
Внешний вид экспериментальной раны на 14-е сутки у животного
опытной группы (а) и группы сравнения (б).
Изменение площади гнойной раны под влиянием суспензии
наночастиц меди (0,01 мг/мл), мм2
Изменение площади раневой поверхности у экспериментальных
животных

Площади гнойной раны у экспериментальных

животных (М±m, мм2)
Сутки Суспензия наночастиц
Группа сравнения, n=30 меди
n =30
1-е 396,9±5,7 416,3±5,1**
367,5±7,7 325,7±9,7***
3-и
р<0,001
328,4±19,1 115,3±4,1***
5-е
р<0,001
286,9±19,8 56,5 ±3,8***
7-е
р<0,001
234,4±24,2 6,6±1,9***
10-е
р<0,001
194,2±22,7 0,0±0,0***
14-е
р<0,001
 Модель гнойной раны была получена
следующим образом
После предварительной обработки кожи, в асептических условиях, под
наркозом, на выбритом от шерсти участке в межлопаточной области у крыс
иссекалась кожа с подкожной клетчаткой в виде квадрата 2 2 см (400 мм 2) по
контуру, предварительно нанесенным трафаретом. Края и дно раны
раздавливали зажимом Кохера.
В рану вносили взвесь суточной культуры золотистого стафилококка в дозе 2
млрд. микробных тел в 0,5 мл физиологического раствора или клинического
штамма Ps.aeruginosa в дозе 1 млрд. микробных тел. Оптическая плотность
микробной взвеси определялась на нефелометре. Рану закрывали
влагонепроницаемой повязкой.
На 2-е сутки в межлопаточной области у животных формировалась рана со
всеми характерными признаками гнойного воспаления. Отмечался отек и
гиперемия кожи в области нанесения раны, припухлость, у некоторых животных
выделялся гной. Гнойные раны у крыс формировались спустя 48 часов и имели
классические признаки воспаления. Края раны с участками некроза,
незначительно гиперемированные, пастозны. Дно ран было влажным, имело
цвет от желто-зеленого и бордово-синюшного до черно-некротического с
участками некроза ранее травмированных мышц и наложениями фибрина.