Вы находитесь на странице: 1из 13

Методы выделения нуклеиновых

кислот на основе магнитной сепарации


Выполнила
студентка Х-480007: Алексеева В.Э.

Преподаватель
Доцент, к.х.н.: Токарева М.И.
Введение
 Выделение ДНК и РНК — важный шаг подготовки проб перед биохимическими и
диагностическими процессами. Многие приложения, такие как амплификация,
проведение обратной транскрипции, детектирование накопления продуктов
амплификации методом ПЦР в реальном времени, клонирование, секвенс, гибридизация,
синтез ДНК и т. д., не могут быть выполнены непосредственно на биологических
образцах без предварительной очистки нуклеиновых кислот.
Методы выделения нуклеиновых кислот
 Жидкофазные методы  Твердофазные методы

 Классические методы  Метод выделения НК на


выделения стекле
 Методы, позволяющие  Метод на основе магнитной
выделить ДНК и РНК сепарации
одновременно
Твердофазные методы
 В твердофазных методах выделения нуклеиновых кислот используются
следующие процессы и принципы:
 а) водородные связи с немодифицированной гидрофильной матрицей,
обычно кварцем, в хаотропных условиях;
 б) ионообмен в водном растворе, обычно с использованием
анионообменников;
 в) аффинность;
 г) механизмы исключения по размеру.
Магнитная сепарация
 Магнитная сепарация — технология разделения материалов на основе
различия их магнитных свойств (магнитной восприимчивости) и
различного поведения материалов в зоне действия магнитного поля,
изменяющего гравитационную траекторию материалов.
  Осу­ще­ст­в­ля­ет­ся в маг­нит­ных се­па­ра­то­рах, в ко­то­рых маг­нит­ные или силь­
но­маг­нит­ные ма­те­риа­лы под дей­ст­ви­ем маг­нит­но­го по­ля вы­де­ля­ют­ся в маг­
нит­ную фрак­цию, а не­маг­нит­ные или сла­бо­маг­нит­ные ма­те­риа­лы– в не­маг­
нит­ную. 
Метод магнитной сепарации
 Для выделения НК широко используется модификация предложенного Р. Бумом метода,
основанная на адсорбции НК на поверхности адсорбента, входящего в состав магнитного
нанокомпозита.
 Валовые ДНК и РНК выделяются с помощью одних и тех же магнитных частиц. Чтобы
отделить РНК от ДНК, РНК уничтожается до стадии сепарации ДНК. Наилучшим
вариантом является добавление РНКазы или щелочи. Наоборот, РНК может быть выделена
при разрушении ДНК дезоксирибонуклеазой (ДНКазой).
 При воздействии магнитным полем частицы с сорбированными НК быстро и полно
отделяются от маточного раствора. В ходе последующих отмывок отделяют белки и другие
примеси, после чего, действуя элюирующим раствором, проводят десорбцию НК. Принцип
магнитной сепарации лежит в основе работы современных высокопроизводительных
станций, значительно упрощающих рутинное выделение и очистку НК.
Выделение
 К лизированному образцу добавляют магнитные частицы и перемешивают для
связывания НК с ними. После этого пробирку ставят в магнитный штатив или подносят к
магниту, фиксируя таким образом твердую фазу. После отбора супернатанта нуклеиновые
кислоты на частицах промывают и элюируют.
Этапы проведения магнитной сепарации нуклеиновых кислот
Магнитные сорбенты
 Функционализированные магнитные частицы на основе оксидов железа широко
применяют в качестве магнитных сорбентов для сепарации биомолекул.
 Y-Fe2О3/SiО2 - нанокмпозит, использующийся в магнитной сепарации
 Доступны различные магнитные частицы с оптимизированными буферами. Обычно к
магнитным носителям прилагаются связывающие растворы, с помощью которых
осуществляется селективное связывание нуклеиновых кислот. Например, для связывания
вирусных нуклеиновых кислот можно использовать как вирусные белки, так и
комплементарные ДНК- или РНК-последовательности
Некоторые магнитные частицы, используемые для выделения
матричной РНК
Продукт Диаметр (мкм) Полимерный Площадь Производитель
состав / поверхности (м 2
модификация г –1 )
поверхности
BcMag® mRNA 1,5 Силанизация Н.д. Bioclone, США
оксида железа
BioMag® 1 Силанизация 100 Bangs Lab., Fisher,
oligo(dT)20 оксида железа США, или
Polysciences, США
Dynabeads® 1,05, 2.8 Полистирол 1-10 Dynal, Норвегия
oligo(dT)25 (переименована в
Invitrogen)
μMACS oligodT 0,05 Декстран Пористая Miltenyi Biotech,
Германия
MagaCell™ 1-10 Целлюлоза Не пористая Сortex Biochem,
оligodT30 США
Автоматического выделение и применение
 Для автоматического выделения нуклеиновых кислот используются магнитные частицы
со стеклянным покрытием. Нуклеиновая кислота связывается со стеклянной
поверхностью, затем связанная с частицами она проходит те же стадии экстракционного
процесса, что и в предыдущей методике: после серии отмывок в пробе остается
нуклеиновая кислота, сорбированная на носителе, с которого она легко снимается с
помощью элюирующего буфера.
 Таким способом можно отделять компоненты клеточного лизата, которые ингибируют
ДНК-полимеразу и ПЦР-реакцию, например полисахариды, фенольные компоненты,
гумус. Метод удобен, технологичен и пригоден для подготовки образца к амплификации.
Однако возможны потери продукта вследствие необратимой сорбции на носителе, а
также в процессе многочисленных отмывок.
Express Magnetic
Particle Processors -
 прибор для выделения
нуклеиновых кислот на
магнитных частицах

Автоматическая система для


выделения нуклеиновых
кислот и белков Maxwell 16
производства Promega
 Спасибо за внимание!

Вам также может понравиться