Экпрессия генов

ДНК мРНК Белок

рРНК

тРНК
 Этапы экспрессии генов II класса
ДНК P E I E I E I E T

Транскрипция
Про-мРНК

Процессинг
мРНК 7Me
Gppp AAAAAAAAAAAAA ..........

Перенос RNP в цитоплазму

Трансляция
7Me
Gppp AAAAAAAAAAAAA..........

Белок Конформация белка

 Этапы экспрессии генов I класса
ДНК P +1 18S 5,8S 28S T

Транскрипция
Про-рРНК

Процессинг

18S 5,8S 28S

рРНК
Образование RNP 40S и 60S

18S + 33 белка = 40S 28S + 5,8S + 5S + 49 белка = 60S

Этапы экспрессии генов III класса (тРНК)
+1
T
ДНК

A B
Транскрипция
Про-тРНК

Процессинг тРНК
тРНК

Перенос тРНК в цитоплазму

Аминоацил-тРНК Образование аминоацил-тРНК

План лекции
1. Общая характеристика процесса транскрипции.
2. Аппарат транскрипции.
3. Этапы транскрипции.
4. Процессинг РНК.
5. Особенности траскрипции у прокариот и
эукариот.
6. Регуляция активности генов на уровне
транскрипции.
Транскрипция – это молекулярный
процесс копирования генетической
информации с ДНК на РНК.
Общая характеристика транскрипции
Транскрипция происходит:

- в ядре (98%) и митохондриях (2%),

- в интерфазе, особенно активно в G1фазе,
- по принципу комплементарности,
- в направлении 5‘- 3‘,
- при участии ферментов и белковых
факторов транскрипции,
- только на одной цепи ДНК (3´→5´ -
некодогенной).
5’-ATTGCATGATTACCATGTA-3’ Кодогенная цепь
3’-TAACGTACTAATGGTACAT-5’ Некодогенная цепь

5’-AUUGCAUGAUUACCAUGUA-3’ RNA

*** Принципы транскрипции:

! Матричный синтез
! Комплементарный синтез
! Антипараллельный синтез
! Однонаправленный синтез
 Аппарат транскрипции

 Ген (участок ДНК)

 Ферменты (РНК-полимераза I,II,III)

 Мономеры – NTP

 Факторы транскрипции
Мономеры синтеза РНК
 РНК-полимераза
прокариот эукариот
 РНК-полимераза I
РНК -полимераза  РНК-полимераза II
 РНК-полимераза III
 РНК-полимеразы эукариот
РНК-полимераза I транскрибирует гены класса I: это
гены 28S рРНК, 18S рРНК и 5,8S рРНК.

РНК-полимераза II транскрибирует гены класса II: это

гены, кодирующие белки. Кроме того, РНК-полимераза II
синтезирует малые ядерные РНК (мяРНК) (U1-U5).

 РНК-полимераза III транскрибирует гены класса III, т.е.

осуществляет синтез тРНК, 5S рРНК, U6 (это одна из
мяРНК).

РНК-полимераза IV транскрибирует все виды РНК

митохондрий, по строению сходна с прокариотической.
Эукариотические РНК полимеразы не
способны сами по себе инициировать
транскрипцию.

Для этого им необходимы вспомогательные

белки - факторы инициации, формирующие
совместно с полимеразами преинициаторные
комплексы.
 Факторы транскрипции

• это сайт-специфические белки, которые

связываются с промотором
• известно около 1000 факторов транскрипции
(1999),
• кодируются регуляторными генами,
• различают 3 класса факторов транскрипции
3 класса факторов транскрипции
Общие (основные)
 обеспечивают основной (неспецифический)
уровень транскрипции
функционируют во всех клетках

Тканеспецифические
 специфически взаимодействуют со
определенными последовательностями ДНК
обеспечивают экспрессию отдельных генов

Кофакторы транскрипции
 действуют согласованно с общими и
тканеспецифическими факторами
обеспечивают тонкую регуляцию
транскрипции
 Транскрипционные факторы: Механизмы
действия
1. ТФ стимулируют формирование комплекса преинициации на TATA- боксе -
инициаторном элементе

2. Некоторые ТФ вызывают изменения структуры хроматина, делая его более

доступным для РНК-полимераз .

3. Другие ТФ являются вспомогательными, создавая оптимальную

конформацию ДНК для действия других ТФ.

4. Известны ТФ, которые подавляют транскрипцию, нарушая совместное

функционирование комплекса транскрипционных факторов внутри
регуляторной области гена ( промотора , энхансера ).
 Базальные факторы
Структура промотора эукариот

ТАТА – содержащие
ТАТА – не содержащие
 Базальные факторы
Инициация на ТАТА
TFII (Transcription Factors of
RNA polymerase II)
TFIID (TBP+TAFs)
 TBP (TATA Binding Protein)
 TAFs (TATA associated proteins)
TFIIA
TFIIB
TFIIF + RNA polym II
TFIIE – activates TFIIH
TFIIH – helicase + kinase
Модулирующие последовательности –
Enhancer Silencer
 содержат высоко повторяющиеся
последовательности,
 связывают белки, которые усиливают или
ослабляют скорость транскрипции
 Этапы
транскрипции

1. Инициация

2. Элонгация

3. Терминация
Инициация
 узнавание промотора
специальными белковыми
факторами;

 присоединение РНК-
полимеразы;

 денатурация участка ДНК;

 чтение и присоединение
первых двух нуклеотидов с
образование фосфорно-
диэфирной связи
Инициация транскрипции генов II класса

-40 -30 -20 -10 +1 +10 +20 +30

TAFs РНК-полимераза II
TFIID TFIIF
TFIIA TFIIE
TFIIB
 Элонгация
 изменение в комплексе
белковых факторов;
 удлинение цепи мРНК;
 поступление сигналов о
блокировке
 Терминация

 образование палиндромной
петли;
 остановка и освобождение
РНК-полимеразы;
 диссоциация
транскрипционного комплекса.
Процессинг мРНК
1. Кэппирование 5‘-конца:
 -начинается еще в ходе транскрипции,
 - заключается в присоединение метилированного
гуанина с образованием неспецифической связи 5‘-
5‘.

2. Полиаденилирование 3‘-конца:
 - добавление 100-200 остатков
полиадениловой кислоты к 3‘-концу.

3. Сплайсинг:
 - удаление интронов и соединение экзонов,
 - происходит при участии сплайсосомы.
 Процессинг мРНК у эукариот
E I E I E I E T
Про-мРНК

CAP-ирование
Gppp
7Me

Полиаденилирование

Gppp
7Me
AAAAAA..

Сплайсинг
мРНК
7Me
Gppp ..
AAAAAA
 CAP-ирование мРНК
* Присоединение
метилированного GTP
(7MeGTP)
* Осуществляется
гуанилат-трансферазой
* связь 5’ppp5’

CAP:
! Стабилизация 5’ конца
мРНК
! Является сайтом для
узнавания для рибосом
Молекулярный механизм
полиаденилирования
Сплайсинг
Типы сплайсинга
Конститутивный – все интроны удаляются, а
экзоны сшиваются в той же последовательности.

Альтернативный – интроны удаляются, а экзоны

соединяются выборочно.

Транс-сплайсинг – из нескольких пре-мРНК

образуется одна зрелая мРНК (у трепаносом,
нематод).
Типы сплайсинга мРНК
Электроннограмма процесса транскрипции
генов I класса в ядрышке
Процессинг РНК для генов I класса
• сначала переписывается
первичный транскрипт 45S,
который затем разрезается
на три рРНК при участии
ферментов,

• сайты расщепления
расположены в спейсерах.
 Процессинг тРНК

 Сначала переписывается полицистронный первичный

транскрипт;
 Затем отщепляется 5´лидерная последовательность и
происходит расщепление в межцистронных участках
при участии специального фермента РНК-азы Р;
 тРНК-нуклеотидилтрансфераза осуществляет
добавление последовательности ССА к 3´концу;
 Зрелая тРНК имеет форму клеверного листа и
состоит из 70-80 нуклеотидов.
 Особенности транскрипции у
прокариот
происходит на уровне оперонов;
мРНК имеет полицистронное строение,
быстро расщепляется;
один тип РНК-полимеразы, которая состоит из
нескольких функциональных единиц и
выполняет несколько функций;
транскрипция и трансляция не разделены ни
в пространстве, ни во времени.
 Строение оперона (транскриационной единицы у
прокариот)
Промотор Оператор Терминатор

5’ P O 1 2 3 T 3’

Структурные гены

РНК-полимераза

5’ P O 1 2 3 T 3’

Репрессор

5’ P O 1 2 3 T 3’

Индуктор
 Особенности транскрипции у
эукариот
 происходит в ядре;
требует участия сложного комплекса
белковых факторов;
три типа РНК-полимеразы (для генов каждого
класса свой тип);
трансрипционные единицы могут
перекрываться;
интроны одного гена могут быть экзонами
другого гена;
сопровождается процессингом РНК.
Транскрипция и трансляция
у эукариот

у прокариот
Транскрипция у прокариот и эукариот
Прокариотная и эукариотная мРНК
Посттранскрипционные изменения
мРНК (редактирование мРНК)
Посттранскрипционные изменения
мРНК
Продолжительность жизни мРНК
 Транскрипция у эукариот
Транскрипция у эукариот происходит в ядре с участием трех
разных РНК-полимераз.

Транскрипция и трансляции разделены во времени и

пространстве.

Ни одна из полимераз эукариот не способна самостоятельно

связываться с промоторами генов. Для присоединения есть
факторы транскрипции - TFI, TFII, TFIII соответственно.

Первичный РНК-транскрипт подвергается процессингу или

созреванию.
 Роджер Д. Корнберг
Нобелевская премия по
химии за 2006 год
присуждена Роджеру
Д. Корнбергу
“за фундаментальные
исследования
молекулярных основ
транскрипции у эукариот”.
Тема следующей лекции

Трансляция