Tcnicas de laboratorio para el diagnstico de Influenza

C . P . Anguizola Tecnologa Mdica UNAC Chiriqu , Panam

drift

Indicaciones
Se tomar muestra para aislamiento de virus a todo caso sospechoso de influenza de subtipo pandmico de la Fase 1 a la Fase 4 (como pas afectado). Durante las Fases 5 y 6 (como pas afectado) se tomar muestra slo en los sitios centinelas, a casos ndices de brotes y casos priorizados. La serologa no esta indicada de rutina para vigilancia ni epidemiolgica ni virolgica, ser solicitada en casos especiales por Virologa y Epidemiologa. Las muestras deben ser obtenidas por el personal de salud que realiza la atencin del caso. No se aceptarn muestras sin el formulario que haya sido llenado completamente, segn lo normado. Las muestras a ser obtenidas son las siguientes:
Plan estratgico integrado MINSA-MIDA-ANAM ante las amenazas de la influenza aviar y la pandemia de influenza Panam, Repblica de Panam, Febrero de 2007

Aislamiento Viral: Hisopado nasal y farngeo. Tejidos. Serologa: Sangre

Tipos de tcnicas
Directas
Identificacin del virus Virus (viables o no viables) Antgenos Virales cido Nucleico viral

Pruebas de laboratorio
Identificacin de la respuesta inmune

Indirectas

Anticuerpos

Tipo de tcnica segn los das de evolucin

Anlisis virolgicos
Periodo de incubaci n PCR Deteccin Ag / Cultivo

Anlisis serolgicos
Deteccin Ac

Respuesta de anticuerpos

Virus

Das de evolucin

Distinguir determinantes antignicos

Tipos de inmunofluorescencia
l

Directa: Ac marcado con el fluorocromo se une al Ag presente en las clulas epiteliales

l
l IgG marcado con FITC l

Indirecta: el Ac que se une al Ag presente en las clulas epiteliales est sin marcar. El conjugado detecta el primer Ac

IgG no marcado

Anti-IgG marcado con FITC

Y A
g Clulas

Y A
g Clulas

Inmunofluorescencia viral

Ventajas:

Desventajas:

Rpido y verstil Diagnstico simultneo para mltiples virus respiratorios Mejor sensibilidad que las pruebas rpidas Detecta de virus viable y no-viable Resultado < 24 horas

No diferencia entre subtipos HA Requiere experiencia tcnica Requiere de microscopio de fluorescencia Costoso

Aislamiento del virus Influenza en huevos embrionados

RT-PCR tiempo real

Amplificacin de un segmento especfico de ADN Sondas y primers especficos para la deteccin de:

Influenza A Influenza A/H1 Influenza A/H3 Influenza A/H5a Influenza A/H5b Influenza B

RT-PCR tiempo real

Ventajas

Desventajas

Altamente sensible (una sla molcula puede ser detectada) y especfico Detecta virus viables y noviables Herramienta de estudios de alta complejidad identificacin de variabilidad gentica Procesamiento simultneo de muchas muestras e identificacin de diferentes virus Resultados en < 24 horas

Requiere experiencia tcnica Primers y sondas deben ser actualizados Estandarizacin interlaboratorial limitada reactivos y equipos Costoso

Factores que afectan la sensibilidad y especificidad de las tcnicas

l

Tiempo de recoleccin de muestra despus de aparicin de sntomas: > 3 das de evolucin Tipo de muestra Calidad de la muestra Manipulacin, almacenamiento y transporte Tipo de tcnica Errores tcnicos en procedimientos Poblacin en estudio: vacunacin

l l l

Redes de Laboratorio Internacional

Todos los virus de casos humanos de influenza se envan al laboratorio de referencia de la OMS (CDC Atlanta) para:

q Anlisis

de susceptibilidad antiviral

q Estudios

moleculares (ejemplo determinar sub-tipo) de vacunas

q Desarrollo

Gracias