Qu es un Gen? Un gen es un segmento corto de ADN, que le dice al cuerpo cmo producir una protena especifica.

Hay aproximadamente 30.000 genes en cada clula del cuerpo humano y la combinacin de todos los genes constituye el material hereditario para el cuerpo humano y sus funciones.

Expresin de Genes o Expresin Gnica

La expresin gnica es el proceso por medio del cual todos los organismos procariotas y eucariotas transforman la informacin codificada en los cidos nucleicos en las protenas necesarias para su desarrollo y funcionamiento

En todos los organismos, el contenido del ADN de todas sus clulas es idntico. Esto quiere decir que contienen la informacin necesaria para la sntesis de protenas.

Pero no todos los genes se expresan al mismo tiempo ni en todas las clulas. Hay slo un grupo de genes que se expresan en todas las clulas del organismo y codifican protenas que son esenciales para el funcionamiento general de las clulas y son conocidos como "housekeeping genes".

El resto de los genes se expresan o no en los diferentes tipos de clulas, dependiendo de la funcin de la clula en un tejido particular.

Tambin existe especificidad temporal, esto quiere decir que los diferentes genes en una clula se encienden o se apagan en diferentes momentos de la vida de un organismo. Adems, la regulacin de los genes vara segn las funciones de stos.

Transcripcin La transcripcin es el primer proceso de la expresin gnica, mediante el cul se transfiere la informacin contenida en la secuencia del DNA hacia la secuencia de protena utilizando diversos RNA como intermediarios.

Durante la transcripcin gentica, las secuencias de ADN son copiadas a ARN mediante una enzima llamada ARN polimerasa que sintetiza un ARN mensajero que mantiene la informacin de la secuencia del ADN.

De esta manera, la transcripcin del ADN tambin podra llamarse sntesis del ARN mensajero.

Este ARN es complementario a los nucletidos de ADN que se transcriben, es decir, si hay una T en el DNA: una A se aadir al RNA. Sin embargo, en el RNA que contiene nitrgeno en la base (para uracilo), en lugar de timina se inserta uracilo, siempre que haya una adenina en la cadena de DNA. Por lo tanto, el RNAm de complemento de una lectura de la cadena de DNA "TAC" se transcribe como "AUG".

A T

En el caso de las clulas eucariotas, se realiza en el ncleo, algo similar al de las procariotas.

Diferentes RNA transcriben distintos tipos de genes. La RNApII transcribe los pre-RNAm, mientras que la RNApI y RNApIII transcriben los RNA-ribosomales y RNAt, respectivamente. Los RNAs transcritos son modificados posteriormente.

El pre-ARNm, por ejemplo, sufre un proceso de maduracin que tras cortes sucesivos elimina ciertos segmentos del ADN llamados intrones para producir el ARNm final.

Los potenciadores (en ingls: "enhancers"), que incrementan mucho (100 veces) la actividad de transcripcin de un gen, y no depende de la ubicacin de stos en el gen, ni la direccin de la lectura.

Durante este proceso de maduracin se puede dar lugar a diferentes molculas de ARN, en funcin de diversos reguladores. As pues, un mismo gen o secuencia de ADN, puede dar lugar a diferentes molculas de ARNm y por tanto, producir diferentes protenas.

Etapas de la transcripcin
Clsicamente se divide el proceso de la transcripcin en 3 etapas principales (iniciacin, elongacin y terminacin), pero realmente se pueden diferenciar 5 etapas :
    

Terminacin Elongacin Disgregacin del promotor Iniciacin Preiniciacin

Preiniciacin
Al contrario de la replicacin de ADN, durante el inicio de la transcripcin no se requiere la presencia de un cebador para sintetizar la nueva cadena, de ARN en este caso. Antes del inicio de la transcripcin se necesitan toda una serie de factores de transcripcin que ejercen los factores de iniciacin. Estos se unen a secuencias especficas de ADN para reconocer el sitio donde la transcripcin ha de comenzar y se sintetice el ARN cebador. Esta secuencia de ADN en la que se ensamblan los complejos de transcripcin se llama promotor.

Promotor
Localizados en los extremos 5'-terminales de los genes, antes del comienzo del gen; se les unen los factores de transcripcin mediante fuerzas de Van der Waals y enlaces de hidrgeno. Tienen secuencias reguladoras definidas, muy conservadas en cada especie; donde las ms conocidas son la Caja TATA, con la secuencia consenso TATA(A/T)A(A/T) o TATA-AAA; y la caja TTGACA (situada en el punto -35).

Despus, a ellos se unen otros factores de transcripcin especficos: TFII A, que estabiliza el complejo TFII D-ADN; los factores TFII B y TFII E se unen al ADN y el TFII F (una helicasa dependiente de ATP) y al final la ARN polimerasa. Todo ello forma un complejo que se llama complejo de preiniciacin cerrado.

Cuando la estructura se abre por mediacin del factor de transcripcin TFII H, da comienzo la iniciacin.

Iniciacin
La helicasa separa las hebras de ADN en las denominadas cajas TATA, una vez que la adenina y timina poseen un doble enlace, se unen los factores y las protenas de transcripcin (TBP, TF2D,TF2B) permitiendo, as, el acceso de la ARN polimerasa al molde de ADN de cadena simple, siendo esta la ultima en posicionarse.

Aunque la bsqueda del promotor por la ARN polimerasa es muy rpida, la formacin de la burbuja de transcripcin o apertura del ADN y la sntesis del cebador es muy lenta.

La burbuja de transcripcin es una apertura de ADN desnaturalizado de 18 pares de bases, donde empieza a sintetizarse el ARN cebador a partir del nucletido nmero 10 del ADN molde de la burbuja de transcripcin.

La burbuja de transcripcin se llama complejo abierto. La ARN polimerasa es una enzima formada por 5 subunidades: 2 subunidades , 1 subunidad , 1 subunidad ' y 1 subunidad que tiene como funcin la unin de ribonucletidos trifosfato.

Cuando se forma el complejo abierto, la ARN polimerasa comienza a unir ribonucletidos mediante enlaces fosfodister, y una vez que se forma el primer enlace fosfodister, acaba la etapa de iniciacin y comienza as comienza la siguiente etapa.

Disgregacin del promotor

Una vez sintetizado el primer enlace fosfodister, se debe deshacer el complejo del promotor para que quede limpio para volver a funcionar de nuevo. Durante esta fase hay una tendencia a desprenderse el transcrito inicial de ARN y producir transcritos truncados, dando lugar a una iniciacin abortada, comn tanto en procariontes como eucariontes. Una vez que la cadena transcrita alcanza una longitud de unos 23 nucletidos, el complejo ya no se desliza y da lugar a la siguiente fase, la elongacin. La disgregacin del promotor coincide con una fosforilacin de la serina 5 del dominio carboxilo terminal de la ARN polimerasa, que es fosforilado por el TFII H (que es una protena quinasa dependiente de ATP)

Elongaci n ARN polimerasa cataliza la elongacin de cadena del ARN. Una La

cadena de ARN se une por apareamiento de bases a la cadena de ADN, y para que se formen correctamente los enlaces de hidrgeno que determina el siguiente nucletido del molde de ADN, el centro activo de la ARN polimerasa reconoce a los ribonucletidos trifosfato entrantes.

Cuando el nucletido entrante forma los enlaces de hidrgeno idneos, entonces la ARN polimerasa cataliza la formacin del enlace fosfodister que corresponde. A esto se le llama elongacin, la segunda etapa de la transcripcin del ARN.

Terminacin
Al finalizar la sntesis de ARNm, esta molcula ya se ha separado completamente del ADN y tambin de la ARN polimerasa, terminando la transcripcin. La terminacin es otra etapa distinta de la transcripcin, porque justo cuando el complejo de transcripcin se ha ensamblado activamente debe desensamblarse una vez que la elongacin se ha completado. La terminacin est sealizada por la informacin contenida en sitios de la secuencia del ADN que se est transcribiendo, por lo que la ARN polimerasa se detiene al transcribir algunas secuencias especiales del ADN.

Estas secuencias son ricas en guanina y citosina, situadas en el extremo de los genes, seguidas de secuencias ricas en timina, formando secuencias palindrmicas, que cuando se transcriben el ARN recin sintetizado adopta una estructura en horquilla que desestabiliza el complejo ARN-ADN, obligando a separarse de la ARN polimerasa, renaturalizndose la burbuja de transcripcin.

Algunas secuencias de ADN carecen de la secuencia de terminacin, sino que poseen otra secuencia a la que se unen una serie de protenas reguladoras especficas de la terminacin de la transcripcin como rho .

Traduccin
En la activacin, el aminocido (AA) correcto se une al ARN de transferencia (ARNt) correcto. Aunque tcnicamente esto no es un paso de la traduccin, es necesario para que se produzca la traduccin.

El AA se une por su grupo carboxilo con el OH 3' del ARNt mediante un enlace de tipo ster. Cuando el ARNt est enlazado con un aminocido, se dice que est "cargado".

La iniciacin supone que la subunidad pequea del ribosoma se enlaza con el extremo 5' del ARNm con la ayuda de factores de iniciacin (FI), otras protenas que asisten el proceso. La elongacin ocurre cuando el siguiente aminoacil-ARNt (el ARNt cargado) de la secuencia se enlaza con el ribosoma, un GTP y un factor de elongacin. La terminacin del polipptido sucede cuando la zona A del ribosoma se encuentra con un codn de parada (sin sentido), que son el UAA, UAG o UGA. Cuando esto sucede, ningn ARNt puede reconocerlo, pero el factor de liberacin puede reconocer los codones sin sentido y provoca la liberacin de la cadena polipeptdica.

Mecanismos bsicos
El ARNm porta informacin gentica codificada en forma de secuencia de ribonucletidos desde los cromosomas hasta los ribosomas. Los ribonucletidos son "ledos" por la maquinaria traductora en una secuencia de tripletes de nucletidos llamados codones. Cada uno de estos tripletes codifica un aminocido especfico. El ribosoma y las molculas de ARNt traducen este cdigo para producir protenas.

Mecanismo de Traduccin

El ribosoma es una estructura con varias subunidades que contiene ARNr y protenas. Es la "fbrica" en la que se montan los aminocidos para formar protenas. El ARNt son pequeas cadenas de ARN no codificador (de 74-93 nucletidos) que transportan aminocidos al ribosoma. Los ARNt tienen un lugar de anclaje al aminocido, y un lugar llamado anticodn.

El anticodn es un triplete de ARN complementario al triplete de ARNm que codifica a su aminocido. La aminoacil-ARNt sintetasa (una enzima) cataliza el enlace entre los ARNt especficos y los aminocidos que concuerdan con sus anticodones. El producto de esta reaccin es una molcula de aminoacil- ARNt.

Esta aminoacil-ARNt viaja al interior del ribosoma, donde se enfrentan los anticodones especficos de ambos mediante el emparejamiento de bases. Luego se utilizan los aminocidos que portan los ARNt para montar una protena.

La iniciacin de la traduccin en procariotas supone ensamblar los componentes del sistema de traduccin: dos subunidades ribosomales, el ARNm a traducir, el primer aminoacil-ARNt, GTP y factores de iniciacin que ayudan a ensamblar el sistema de iniciacin.

Procaritic a

Es el resultado de la asociacin de las subunidades pequea y grande del ribosoma y el acoplamiento del primer aminoacil-ARNt (fmet-ARNt) con el codn de iniciacin mediante el emparejamiento de bases anticodncodn.

El ribosoma consta de tres sitios: el sitio A, el sitio P y el sitio E. El sitio A es el punto de entrada para el aminoacilARNt. El sitio P es donde se forma el peptidil-ARNt. Y el sitio E es el sitio de salida del ARNt una vez descargado tras ofrecer su aminocido a la cadena peptdica en crecimiento.

Iniciaci n

La iniciacin de la traduccin en procariotas comienza con las subunidades 50s y 30s sin asociar.

El IF-1 (factor de iniciacin 1) bloquea el sitio A para asegurar que el fMet-ARNt slo se puede acoplar al sitio P. A durante la iniciacin, mientras que el IF-3 bloquea el sitio E y evita que las dos subunidades se asocien. El IF-2 es una GTPasa pequea que se asocia con el fmetARNt y le ayuda a acoplarse con la subunidad ribosmica pequea. El ARNr 16s de la subunidad ribosmica pequea 30S reconoce el sitio de acoplamiento ribosmico del ARNm.

Esto ayuda a posicionar correctamente el ribosoma sobre el ARNm para que el sitio P est directamente sobre el codn de iniciacin AUG. El IF-3 ayuda a posicionar el fmet-ARNt en el sitio P, de manera que el fmet-ARNt interacta mediante el emparejamiento de bases con el codn de iniciacin del ARNm (AUG).

La iniciacin termina cuando la subunidad ribosmica grande se une al sistema provocando el desacoplamiento de los factores de iniciacin. Hay que tener en cuenta que las procariotas pueden distinguir entre un codn normal AUG y un codn de iniciacin AUG .

Elong acin

La elongacin de la cadena polipeptdica consiste en la adicin de aminocidos al extremo carboxilo de la cadena. La elongacin comienza cuando el fmet-ARNt entra en el sitio P, causando un cambio de conformacin que abre el sitio A para que el nuevo aminoacil-ARNt se acople. El factor de elongacin Tu (EF-Tu), una pequea GTPasa, facilita este acoplamiento. Ahora el sitio P contiene el comienzo de la cadena peptdica de la protena a codificar y el sitio A tiene el siguiente aminocido que debe aadirse a la cadena peptdica. El polipptido creciente que est conectado al ARNt en el sitio P se desacopla del ARNt y se forma un enlace peptdico entre el ltimo de los aminocidos del polipptido y el aminocido que est acoplado al ARNt en el sitio A.

Este proceso, conocido como formacin del enlace peptdico, est catalizado por una ribozima, la peptidil-transferasa, una actividad intrnseca al ARNr 23s de la unidad ribosmica 50s. En este punto, el sitio A ha formado un nuevo pptido, mientras que el sitio P tiene un ARNt descargado (ARNt sin aminocido). En la fase final de la elongacin, el ribosoma se mueve 3 nucletidos hacia el extremo 3' del ARNm. Como los ARNt estn enlazados al ARNm por emparejamiento codn-anticodn, los ARNt se mueven respecto al ribosoma recibiendo el polipptido naciente del sitio A al sitio P y moviendo el ARNt descargado al sitio E de salida. El ribosoma contina trasladando los codones restantes del ARNm mientras siguen acoplndose ms aminoacil-ARNt al sitio A, hasta que el ribosoma alcanza un codn de parada en el ARNm (UAA, UGA o UAG).

Termina cin
La terminacin ocurre cuando uno de los tres codones de terminacin entra en el sitio A. Estos codones no son reconocidos por ningn ARNt. En cambio, son reconocidos por unas protenas llamadas factores de liberacin, concretamente la RF-1 (que reconoce los codones de parada UAA y UAG) o la RF-2 (que reconoce al UAA y al UGA). Un tercer factor de liberacin, el RF3, cataliza la liberacin producida por el RF-1 y el RF-2 al final del proceso de terminacin. Estos factores disparan la hidrlisis del enlace ster de la peptidil-ARNt y la liberacin del ribosoma de la protena recin sintetizada. O fin de la fase.

Reciclaje
El sistema de post-terminacin formado al final de la terminacin consiste en el ARNm con el codn de terminacin en el sitio A, los ARNt y el ribosoma. La fase de reciclaje del ribosoma es responsable del desmantelamiento del sistema ribosmico posterior a la terminacin. Una vez que la protena nueva es liberada durante la terminacin, el factor de reciclaje del ribosoma y el factor de elongacin G (EF-G) se ponen en funcionamiento para liberar el ARNm y los ARNt de los ribosomas y desligar los ribosomas 70s en las subunidades 30s y 50s. El IF-3 tambin ayuda al proceso de reciclaje del ribosoma convirtiendo a las subunidades transitorias desacopladas en subinidades estables, enlazndose con las subunidades 30s. Esto "recicla" los ribosomas para posteriores rondas de traduccin.

Eucari tica
La iniciacin de la traduccin supone la interaccin de varias protenas con una marca especial ligada al extremo 5' de las molculas de ARNm. Los factores protenicos se asocian a la subunidad ribosmica pequea. La subunidad, acompaada de algunos de esos factores protenicos, se mueve a lo largo de la cadena de ARNm hacia su extremo 3' buscando el codn de 'comienzo' (normalmente el AUG), que indica en qu punto se empieza a codificar la protena. Luego el ribosoma traduce la secuencia que hay entre los codones de 'comienzo' y 'parada' en una secuencia de aminocidos, sintetizndose una protena.

En los eucariontes y las archaea, el aminocido codificado por el codn de inicio es la metionina. El ARNt iniciador cargado con metionina forma parte del sistema ribosmico, y por tanto todas las protenas empiezan por este aminocido (a menos que lo extirpe una proteasa en algn paso posterior).

El ejemplo mejor estudiado de traduccin independiente de caperuza en las eucariotas es el IRES, el Sitio Interno de Entrada al Ribosoma. Lo que distingue a la traduccin independiente de caperuza de la dependiente de caperuza es que la primera no necesita que el ribosoma empiece a recorrer el ARNm desde el extremo 5' hasta el codn de comienzo. Los ITAF (IRES trans-acting factor) pueden colocar al ribosoma en el sitio de inicio, evitando la necesidad de recorrer el ARNm desde el extremo 5' de la regin sin traducir del ARNm. Este mtodo de traduccin ha sido descubierto recientemente, junto con su importancia en condiciones que requieren la traduccin de ARNm especficos a pesar del estrs celular o la incapacidad de traducir la mayora de los ARNm. Ejemplos incluyen a los factores que responden a la apoptosis.

La transmisin de la informacin gentica entre generaciones y la expresin en forma de protenas de dicha informacin gentica no son suficientes para permitir que el programa de desarrollo de un organismo se lleve a cabo correctamente.

Es necesario, asegurar que los genes que constituyen la informacin gentica transmitida se expresen en momentos adecuados desde el punto de vista cronolgico o espacial (procesos de desarrollo) o bien como respuesta a cambios en las condiciones ambientales en las que se encuentra la clula o el individuo. Por otra parte, las respuestas al ambiente o los procesos de desarrollo no suelen producirse como consecuencia de la activacin de un nico gen en un momento, sitio o condicin determinado, sino que suele ser necesaria la expresin coordinada de un conjunto de ellos para que tenga lugar el efecto.

Estos dos hechos hacen que el control de la expresin gnica sea central en el proceso de la biologa molecular de los seres vivos. El modelo ms coherente de regulacin de la expresin gnica se conoce con el nombre de Modelo del Opern que explica, como veremos, la expresin coordinada de genes. Modelo del opern: La expresin de un grupo de secuencias codificantes de diferentes pptidos cuya presencia debe ser coordinada se logra colocando todas las secuencias bajo el control de un mismo promotor.

La transcripcin de todas estas secuencias darn lugar a un ARN mensajero de gran tamao que codifica todos los genes contenidos en el opern (ARN policistrnico) de forma que siempre se podrn traducir coordinadamente las diferentes protenas del opern.

Regulacin de la expresin gnica

Entre el promotor del opern y el inicio del primer gen estructural del fragmento policistrnico existe una secuencia de ADN denominada Operador. A esta secuencia se puede unir una protena denominada Regulador de forma que cuando se encuentra unido el regulador a la secuencia del operador impide el paso de la ARN polimerasa en su trayecto de transcripcin del ADN para sintetizar el ARN policistrnico. Por con siguiente, la regulacin de la expresin se logra mediante un impedimento fsico de la actividad de la ARN polimerasa causado por la unin de una protena al ADN.

Un Opern es grupo de genes estructurales cuya expresin est regulada por los mismos elementos de control (promotor y operador) y genes reguladores.

Los principales elementos que constituyen un Opern

Los genes estructurales: llevan

informacin para polipptidos. Se trata de los genes cuya expresin est regulada.

El promotor (P): se trata de un

elemento de control que es una regin del ADN con una secuencia que es reconocida por la ARN polimerasa para comenzar la transcripcin.

El operador (O): se trata de otro

elemento de control que es una regin del ADN con una secuencia que es reconocida por la protena reguladora. El operador se sita entre la regin promotora y los genes estructurales.

El gen regulador (i): secuencia

de ADN que codifica para la protena reguladora que reconoce la secuencia de la regin del operador. El gen regulador est cerca de los genes estructurales del opern pero no est inmediatamente al lado.

Protena reguladora:
protena codificada por el gen regulador. Est protena se une a la regin del operador.

Inductor: sustrato o
compuesto cuya presencia induce la expresin de los genes.

Existen dos clases de operones segn sea su respuesta a las condiciones ambientales: los operones inducibles y los operones represibles.

Operon inducible: es el que en condiciones normales no se

expresa, se activa en respuesta a un agente inductor que funciona como Activador, en el momento que el inductor se une al operador, se activa el promotor y comienza la transcripcin de los genes estructurales.
El modelo clsico de este tipo de opern es el operon lactosa. Otros ejemplos de operones inducibles son aquellos que codifican para enzimas que participan en el metabolismo de sustratos como operon maltosa, arabinosa, etc. Suelen ser operones que participan en rutas catablicas, para la obtencin de metabolitos energticos.

Los g

s stru tur l s

l oper

tos son los siguientes:

El gen z+: codifica para la b-galactosidasa que cataliza la hidrolisis de la lactosa en glucosa ms galactosa. El gen y+: codifica para la galactsido permeasa que transporta bgalactsidos al interior de la clula bacteriana. El gen a+: codifica para la tiogalactsido transacetilasa que cataliza la transferencia del grupo acetil del acetil Coenzima A al 6-OH de un aceptor tiogalatsido. Este gen no est relacionado con el metabolismo de la lactosa.

Operon reprimible o Represible en condiciones normales s expresa las protenas Es el que

estructurales an en ausencia de inductor, en respuesta a un agente represor se activan. El inductor funciona como represor y se une al operador, inhibiendo el funcionamiento del promotor y la transcripcin de los genes estructurales.

Ejemplos de este tipo de operon: Son los operones que codifican para la sntesis de aminocidos, como opern trp, his, etc. Suelen ser operones que participan en rutas anablicas, para la obtencin de monmeros de macromolculas.

El opern triptfano (opern trp) es un sistema de tipo represible, ya que el aminocido triptfano (Correpresor) impide la expresin de los genes necesarios para su propia sntesis cuando hay niveles elevados de triptfano. Sin embargo, en ausencia de triptfano o a niveles muy bajos se transcriben los genes del opern trp.

Genes estructurales: existen

cinco genes estructurales en el siguiente orden trpE-trpD-trpCtrpB-trpA.

Elementos

de

control:

Gen regulador (trpR): codifica

para la protena reguladora. Este gen se encuentra en otra regin del cromosoma bacteriano aunque no muy lejos del opern.

Correpresor: triptfano.

promotor (P) y operador (O). El promotor y el operador estn al lado de los genes estructurales y en el siguiente orden: P O trpE-trpD-trpC-trpB-trpA. Curiosamente, las enzimas codificadas por estos cinco genes estructurales actan en la ruta metablica de sntesis del triptfano en el mismo orden en el que se encuentran los genes en el cromosoma.

Operon triptofano: en ausencia de triptofano

En presencia de triptfano, el triptfano se une a la protena reguladora o represora cambiando su conformacin, de manera que ahora si puede unirse a la regin operadora y como consecuencia la ARN-polimerasa no puede unirse a la regin promotora y no se transcriben los genes estructurales del opern trp.

La expresin de la informacin gentica de un organismo y su transmisin entre generaciones es un proceso complejo en el que interviene un gran nmero de protenas y de mecanismos.

Estos mecanismos aseguran la fidelidad de la copia de la informacin desde el ADN al ARN para asegurar la expresin, y del ADN a una nueva molcula de ADN para asegurar la transmisin. Sin embargo, adems de la traduccin del ARN por los ribosomas, para que se produzca una correcta expresin del mensaje gentico ha de estar controlado el momento del dicha expresin, ha de asegurarse que el mensaje (protena) adquiera la conformacin correcta para su funcionamiento y se coloque en el lugar celular correspondiente.

Desde el punto de vista biotecnolgico, todos estos procesos son manipulables para poder conseguir la expresin artificial de protenas de inters industrial en procesos llevados a cabo por microorganismos.