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EVALUACION DEL USO DE LA MEDICION DE PROTOPORFIRINA ERITROCITARIA LIBRE LIGADA AL ZINC COMO PRUEBA DE SCRENING PARA LA INTOXICACION POR PLOMO.
Tesis de Grado para optar por el Ttulo profesional de Bioqumico Clnico Autor, Juan Pablo Meja Tutor, Dra. Beatriz Vargas Quito, julio del 2010
FORMULACIN DEL PROBLEMA El presente estudio se enmarca en correlacionar la protoporfirina libre ligada al Zinc (ZPP) con el plomo medidos en una poblacin con un potencial riesgo de exposicin al mismo (empresa metalrgica), de frente a las concentraciones de zinc-protoporfirina medida por Hematofluorometra, tambin queremos observar si los ndices hematimtricos se ven afectados cuando existe intoxicacin con este metal.
Adems de tener la necesidad de recurrir a nuevos mtodos como lo es la voltametra andica para medir el plomo, cuya metodologa ya est aprobada por la FDA por tener una excelente correlacin con su gold estndar (espectrofotometra de absorcin atmica)el cual segn estudios es: 0.995
OBJETIVOS
Objetivo general Determinar la relacin entre los niveles de plomo srico y zinc protoporfirina en un grupo poblacional expuesto a contaminacin ambiental por plomo en una empresa metalrgica de la ciudad de Quito
OBJETIVOS
Objetivos especficos Determinar la concentracin de plomo en sangre por voltametra andica en una empresa metalrgica de la ciudad de Quito Determinar los niveles de zinc protoporfirina por hematofluorometra en una empresa metalrgica de la ciudad de Quito. Correlacionar la concentracin de plomo sanguneo con la concentracin de protoporfirinaZn
Trabajador expuesto
Se considera expuesto al riesgo de plomo a todo trabajador que durante ms de 30 das al ao ejerce su actividad laboral en un ambiente con una concentracin ambiental de plomo (Pb) superior o igual a 40 mg/m3 de aire, referido a 8 horas diarias y 40 semanales; en relacin al nivel de plumbemia, aqul que presenta un valor de plomo en sangre (Pb-B) mayor o igual a 40 mg/100 ml de sangre en el caso de los hombres y 30 mg/100 ml de sangre en el caso de las mujeres en periodo frtil.
Con respecto a las deficiencias nutricionales, las dietas pobres en hierro y calcio y ricas en lpidos favorecen la absorcin. 2) la va respiratoria es la principal en el ambiente laboral. El plomo del aire se absorbe aproximadamente en 90%.
DISTRIBUCIN
El plomo llega a la sangre donde se combina con los fosfatos plasmticos circulando como fosfato plumboso soluble, luego pasa a fosfato plmbico menos soluble y se deposita, en el hgado, pulmn, encfalo y huesos. La distribucin se produce en dos compartimientos: el primero es el sistema esqueltico, que contiene 80 a 95% de la carga corporal de plomo, siendo la vida media en el hueso de 20 a 30 aos. En los nios se deposita en la metfisis de los huesos largos. El segundo compartimiento est en los tejidos blandos como el rin, cerebro e hgado, siendo en stos la vida media de 20 a 30 das. En la sangre se encuentra en los eritrocitos, siendo ste el principal compartimiento responsable de la toxicidad por plomo. Un dato destacable es que el plomo atraviesa la placenta, conteniendo la sangre fetal 80 a 100% de la plombemia.
FISIOPATOLOGIA
FISIOPATOLOGIA
El plomo bloquea varias enzimas necesarias para la sntesis del grupo Hem de la hemoglobina: delta-ALA-deshidratasa (ALA-D), coproporfiringeno III, decarboxilasa y ferroquelatasa. Por otro lado, la actividad de la enzima ALAsintetasa ser estimulada por un mecanismo feed-back como consecuencia del dficit de Hem, producindose tambin un aumento del ALA. Las consecuencias biolgicas de esta accin de inhibicin son: Aumento de la tasa de ALA en sangre y en orina (ALAB, ALA-U). Aumento de la concentracin de coproporfiringeno III en los hemates y de coproporfirina III en orina (CPU). Aumento de la tasa de protoporfirina IX en los hemates.
FISIOPATOLOGIA
La toxicidad del plomo es consecuencia de la afinidad que tiene ste por el grupo sulfihidrilo (SH) de las protenas, unindose en forma irreversible y alterando completamente su funcin. El sistema hematopoytico es el ms sensible a los efectos de la exposicin aun en dosis mnimas, siendo la biosntesis del grupo hem la ms afectada. La enzima delta aminolevulnico deshidratasa resulta inhibida progresivamente por el plomo en forma exponencial. Dicha inhibicin determina la acumulacin del cido aminolevulnico que es neurotxico.
La otra enzima que se inhibe es la ferroquelasa, que cataliza la insercin del hierro dentro del anillo de protoporfirina IX. El resultado es la acumulacin de protoporfirina libre en los eritrocitos. El plomo interfiere con la bomba Na-K ATPasa de la membrana del glbulo rojo, lo que determina un aumento de la fragilidad y disminucin de la sobrevida. Otro factor que se suma a la produccin de la anemia es la prdida de eritropoyetina por el tbulo renal, por lo que la produccin de anemia es multifactorial.
FISIOPATOLOGIA
A nivel gastrointestinal, afecta el msculo liso produciendo contracciones no propulsivas que determinan estreimiento y dolores abdominales, siendo la manifestacin mxima el clico saturnino. En el sistema nervioso central, el plomo atraviesa la barrera hematoenceflica ms fcilmente en nios que en adultos, las consecuencias de la neurotoxicidad van desde retardo mental, alteraciones del comportamiento, dficit intelectual, hiperactividad y retardo escolar.
Alteracin morfolgica de los precursores de los glbulos rojos En una puncin esternal pueden ser observados megaloblastos, eritroblastos poliploides y punteado basfilo en los eritroblastos. Este hecho permite clasificar la anemia saturnina entre las anemias hemolticas
Zinc-Protoporfirina-eritrocitaria (ZPP) En exposicin estable, la ZPP comienza a aumentar cuando el nivel de Pb-B es de 35-40 g/100 ml. En las mujeres el aumento comienza a concentraciones ms bajas (Pb-B de 25-35 g/100 ml). La relacin entre Pb-B y ZPP puede verse afectada tambin por la exactitud y precisin de los mtodos de medida. La protoporfirina acumulada en los eritrocitos queda en su interior durante toda la vida de los mismos en el caso de exposicin al plomo. La ZPP permite una prediccin aproximada de la cantidad de plomo quelable.
DEFINICIN DE VARIABLES
De inclusin:
Personal que labore en el rea de galvanizado de la empresa metalrgica seleccionada. Quienes brinden su consentimiento informado para participar en el estudio
De exclusin:
Quienes no cumplan los criterios de inclusin Quienes no den su consentimiento informado para participar en el estudio.
METODOLOGA
TIPO DE INVESTIGACIN
Se realizar un estudio epidemiolgico analtico transversal, con la finalidad de determinar la relacin entre los niveles de plomo medidos empleando voltametra andica y su relacin con la concentracin de zinc-protoporfirina circulante.
POBLACIN Y MUESTRA
El universo del presente estudio estar conformado por la totalidad de trabajadores de una empresa metalrgica de la ciudad de Quito y que se encuentran trabajando en el rea de galvanizado de la misma (n=47). Adems, se seleccionar propositivamente a 20 trabajadores de la empresa que laboren en reas administrativas con separacin fsica y laboral efectiva del rea de galvanizado, quienes junto con 12 personas que habiten cerca de esta empresa.
DISEO EXPERIMENTAL
La informacin para anlisis del presente estudio ser recolectada en un formulario especfico creado para el efecto (Anexo 3), a partir del cual se crear una base de datos en en Microsoft Excell 2007, para su posterior limpieza y anlisis en Epi-Info 6.04b (CDC Atlanta). Las variables cuantitativas sern expresadas en promedios y desviaciones estndar, en tanto que las cualitativas en frecuencias simples y porcentajes. Para la evaluacin entre los niveles de plomo medidos por voltametra andica, de frente a la concentraciones de protoporfirina eritrocitaria libre ligada al zinc, se realizar un anlisis de correlacin de Pearson. La prevalencia de intoxicacin por plomo ser expresada en porcentaje, acompaada de su respectivo intervalo de confianza al 95%.
La existencia de forma natural de las porfirinas ha sido conocido desde principios de 1940 gracias al trabajo pionero de Heinrich Klver el cual observ que en los animales numerosos espectros de fluorescencia de la sustancia blanca del sistema nervioso central le revel una banda de emisin definida en 630 a 620 nm la hematofluorometra mide los niveles de protoporfirina zinc mediante la exposicin de una muestra de sangre obtenida, la intensidad de la fluorescencia resultante es proporcional a la presencia de ZPP
PRINCIPIO DE LA HEMATOFLUOROMETRA El Hematofluormetro realiza una medicin de la superficie frontal de la fluorescencia de la sangre. La medicin debe realizarse sobre la superficie debido a la densidad ptica muy alta de la sangre. En Los Seres Humanos la protoporfirina libre espontneamente se une con el zinc libre.
Por lo Tanto, sin hay un aumento de la fluorescencia de la sangre es una Indicacin de envenenamiento por plomo o anemia.
Hasta hoy se han empleado tres mtodos para medir las ZnPP en muestras biolgicas: 1) Extraccin del ZnPP con solvente etil/actico, ms extraccin en cido clorhdrico diluido (HCl), y medicin con fluorometra o absorbancias 2) Extraccin del ZnPP con solvente orgnico acidificado dbil o neutro, separacin con HPLC y medicin con fluorometra; 3) Medicin directa de ZnPP en sangre total o en eritrocitos lavados por hematofluorometra
Procedimiento
Cada metal depositado sobre el nodo volver a oxidarse a sus formas inicas respectivas
Los metales con menores potenciales de oxidacin se redisuelven primero; es decir cada metal se redisuelve del nodo en el orden de potencial de oxidacin, que se registra como el potencial a mitad de onda, que es una constante para un metal dado. La corriente total asociada con la redisolucin de cada metal es proporcional a la concentracin del mismo.
Previa limpieza y esterilizacin del dedo recolectamos la sangre en un capilar hasta la seal del mismo.
LISIS DE ROJOS FASE Y MIX Dispensamos la sangre en un tubo de tratamiento con lisis de glbulos rojos y mezclamos.
LECTURA EN EL INTRUMENTO LEADCARE II Coloque una gota de la muestra en sensor. Lea los resultados de la pantalla en slo 3 minutos El rango de medicin de este instrumento va de 3.3 a 65 ug / dL.
INTERPRETACIN DE RESULTADOS Con la finalidad de establecer la prevalencia de intoxicacin por plomo en una empresa metalrgica de la ciudad de Quito, se estudiaron a un total de 79 personas, de los cuales 47 son personas que trabajan en reas de exposicin directa a plomo; en el proceso de galvanizado el 59,4%, 20 personas que trabajan en el area administrativa en dicha empresa representando un 25,3% y 12 personas que habitan por los alrededores de dicha fbrica 15,2%.
La edad promedio de la muestra general fue de 42.2 10.1 aos (Rango: 23 58 aos), siendo para el grupo expuesto al riesgo de 44.4 10 aos y para el de menor 7.9 aos exposicin de 36.2 (p<0.05). En cuanto a la distribucin por gnero, el 98.7% (n= 78) de los trabajadores estudiados fueron de sexo masculino.
PERFIL DE HIERRO
En los datos estadsticos obtuvimos el estatus del hierro e indicadores hematimtricos esto se lo realizo ya que esperbamos tambin una correlacin entre estos ndices y la intoxicacin por plomo y los resultados son los que se indican en la siguiente tabla
* p>0.05 No diferencia estadsticamente significativa entre grupos. (Student T test) p>0.05 No diferencia estadsticamente significativa entre grupos. (Mann Whitney Test)
A LOS TRABAJADORES EXPUESTOS QUE PARTICIPARON EN EL ESTUDIO SE LES HIZO DETERMINACIN DE PPZ EN SANGRE, Y SE ENCONTR UN RANGO DE 1 A 14.0 G/G HB Y A LA POBLACIN NO EXPUESTA SE ENCONTR UN RANGO DE PPZ 1 A 13.0 G/G HB SOLO EL 1 % DE ESTA POBLACIN PRESENTO NIVELES DE PPZ MAYORES A 10 G/G HB
Al normalizar el comportamiento de las concentraciones de protoporfirina eritrocitaria libre en base a su logaritmo de base 10, el coeficiente de correlacin observado fue de 0.39 Ya que el R Sq linear fue de 0.159; = 0.39
Considerando que en el anlisis previo se incluyeron a sujetos con concentraciones de plomo inferiores a 3 ug/dL y aquellos con niveles de protoporfirina por debajo de 0.1 ug/g deHb, se procede a excluirlos, obtenindose un coeficiente de correlacin de 0.398
CONCLUSIONES
La concentracin de plomo que obtuvimos por el mtodo de voltametra andica en la poblacin laboral que mantena contacto con dicho metal fue de 6.37 3.7 ug/dL , en la poblacin no expuesta fue de 4.8 2.6 ug/dL concluyendo que no existe intoxicacin con dicho metal en estas poblaciones ya que los valores permitidos segn el criterio OSHAS personas no expuestas : < 10 ug/dL. Lmite mximo en personas expuestas: 40 ug/dL.
CONCLUSIONES
Los niveles de protoporfirina libre ligada al zinc en la poblacin expuesta fue de 4.8 3.0 ug/g Hb y en la poblacin no expuesta fue de 3.7 2.9 ug/g Hb, en la poblacin expuesta se podra hablar de una ligera intoxicacin ya que los niveles de protoporfirina libre ligada al zinc permitidos son hasta 4.5 ug/g Hb.
CONCLUSIONES
Se obtuvo una correlacin baja entre la PPZ y el plomo; encontrndose un coeficiente de correlacin de 0.411, debemos tomar en cuenta el buen monitoreo biolgico que se lleva acabo en esta empresa y las buenas medidas de seguridad industrial realizadas, adems el factor tiempo por ejemplo en un cambio de tareas o de procedimientos en el trabajo o cambios a reas de mayor o menor exposicin, se reflejarn casi inmediatamente en la plumbemia, mientras que el cambio en la ZPP tardar en producirse.
CONCLUSIONES
Al normalizar el comportamiento de las concentraciones de protoporfirina eritrocitaria libre en base a su logaritmo de base 10, el coeficiente de correlacin observado fue de 0.39 Considerando que en el anlisis previo se incluyeron a sujetos con concentraciones de plomo inferiores a 3 ug/dL y aquellos con niveles de protoporfirina por debajo de 0.1 ug/g deHb, se procede a excluirlos, obtenindose un coeficiente de correlacin de 0.398 La PPz puede ser un buen indicador diagnstico de intoxicacin por plomo, y puede ser usada como prueba tamiz para apoyar los programas de vigilancia y seguimiento en el monitoreo biolgico en trabajadores expuestos a plomo, pero en base a nuestros datos que se trataron de pacientes bien monitorizados en cuestin de un buen uso de las herramienta de seguridad industrial no encontramos paciente intoxicados y esa es la razn de nuestro bajo ndice de correlacin.
CONCLUSIONES
La relacin entre Pb-B y ZPP puede verse afectada tambin por la exactitud y precisin de los mtodos de medida La sensibilidad y especificidad de este test ( ZPP ) son suficientes como para proponerlo como mtodo de vigilancia de los trabajadores expuestos al plomo. Por la facilidad de la determinacin actual de la ZPP, as como por el hecho de poder recogerse tanto en sangre capilar como venosa, y adems ser barato, es el parmetro actualmente indicado para la valoracin del dao biolgico del plomo sobre los trabajadores expuestos. Se realiz tambin un perfil de hierro en estos pacientes para ver si se confirma la relacin entre la intoxicacin por plomo y el exceso de hierro en la sangre, ya que como sabemos cuando hay intoxicacin con plomo, el zinc tiende a unirse a la protoporfirina desplazando al hierro y este se ve aumentado en los niveles sanguneos, y en este estudio no se pudo establecer dicha relacin ya que no obtuvimos pacientes con intoxicacin plmbica.
RECOMENDACIONES
El control ambiental de plomo ser efectuado con una periodicidad semestral. Esta frecuencia podr ser anual cuando, permaneciendo inalteradas las condiciones del puesto de trabajo, los resultados de las determinaciones efectuadas en dos controles consecutivos indiquen: Una concentracin de plomo en aire inferior a 100 g/ m3 Una cifra de plumbemia que no supere en ningn trabajador los 40 g/100 ml. Igual que en el caso de la plumbemia, debe establecerse el nivel base de ZPP de cada trabajador nuevo antes de la exposicin al plomo con el objeto de evaluar la sensiblidad individual al plomo.
RECOMENDACIONES
Las situaciones que podran modificar los niveles de ZPP, como la ferropenia o las alteraciones hepticas, difcilmente pueden escapar al control del mdico, conocedor del estado hematolgico, bioqumico y enzimtico del trabajado. La recogida de sangre venosa o directamente sobre sangre capilar y a la muestra se la debe conservarse en lugar oscuro y refrigerado.
RECOMENDACIONES
De ser exmenes mdicos inespecficos, cercanos a los clsicos chequeos o cribados de carcter preventivo general, deben pasar a ser peridicos, especficos frente a los riesgos derivados del trabajo, con el consentimiento informado del trabajador, y no deben ser utilizados con fines discriminatorios ni en perjuicio del trabajador. Adems de reconocer el derecho de todos los trabajadores a la vigilancia peridica de su salud, incluso prolongndola ms all de la finalizacin de la relacin laboral en algunos supuestos, la ley encomienda a las administraciones sanitarias la tarea de dar homogeneidad y coherencia a los objetivos y contenidos de la vigilancia de la salud, mediante la elaboracin de protocolos y guas de actuacin, con la mirada puesta en implantar un modelo de vigilancia de la salud en el trabajo que sea eficaz para la prevencin.
RECOMENDACIONES
La empresa est obligada a realizar, por s misma o por medio de servicios especializados, la evaluacin de las concentraciones ambientales de plomo en los puestos de trabajo en los que exista riesgo de exposicin. Las muestras sern necesariamente de tipo personal y sern efectuadas de manera que permitan la evaluacin de la exposicin mxima probable del trabajador o trabajadores, teniendo en cuenta el trabajo efectuado, las condiciones de trabajo y la duracin de la exposicin.
Gracias