Taller 2 Bioqumica

Enzimas Cintica Enzimtica

Carola Maldonado Vera

Alteran las velocidades de reaccin no los equilibrios

(A) S
(B) E + S ES EP

P
E+P

Factores del centro activo que contribuyen a la eficacia de los enzimas:

Microambiente Concentracin de grupos reactivos Potenciacin de la reactividad Distorsin Tensin de enlaces Rotacin de enlaces

Orientacin Entre sustratos Con respecto al sitio cataltico

Catlisis cido-base Especfica (H+/OH-) General (resduos)

Proximidad Entre sustratos Al sitio cataltico

Catlisis covalente Ataque nucleoflico Ataque electroflico

velocidad de reaccin
Una ecuacin de velocidad describe el progreso de una reaccin, aparicin de producto o desaparicin de reactante, en funcin del tiempo.

V= -d[S] = d[P] dt dt

Concentracin de sustrato y velocidad de reaccin catalizada por enzimas

Ecuacin de la velocidad de una reaccin enzimtica

MODELO CINTICO DE MICHAELIS-MENTEN

Vmx s v Km s

La representacin grfica de la ecuacin es una hiprbola. La Vmax corresponde al valor mximo al que tiende la curva experimental, y la KM corresponde a la concentracin de sustrato a la cual la velocidad de la reaccin es la mitad de la Vmax.

Cul de los siguientes enunciados, acerca de las reacciones catalizadas por enzimas, NO es cierto?

Las enzimas:

A. B. C. D. E.

Estn compuestas esencialmente de polipptidos, que son polmeros de aminocidos. Pueden unir grupos prostticos tales como iones metlicos que participan en las reacciones enzimticas. Tienen estructuras definidas. Unen sus sutratos en el centro activo. Todos los enunciados son ciertos.

Cul de los siguientes enunciados, acerca de las reacciones catalizadas por enzimas, NO es cierto?

A. B. C. D. E.

Las enzimas forman complejos con sus sustratos. Las enzimas rebajan la energa de activacin de las reacciones qumicas. Las enzimas cambian la K de equilibrio de las reacciones qumicas. Muchas enzimas cambian de forma ligeramente cuando unen al sustrato. Las reacciones ocurren en el centro activo de las enzimas, donde una orientacin espacial precisa de los aminocidos es una cuestin muy importante para la catlisis.

Las enzimas son catalizadores biolgicos. Los catalizadores rebajan la energa de activacin de las reacciones. La rebaja de la EA de una reaccin, hace que la velocidad de la reaccin aumente. Asi, las enzimas aceleran las reacciones, rebajando la energa de activacin. Muchas enzimas cambian de forma cuando sus sustratos se unen a ellas. Este efecto se llama "acoplamiento inducido", significando que se requiere la orientacin y colocacin precisa de la enzima para que su actividad cataltica sea inducida por la unin del sustrato. Las enzimas tienen centros activos. El centro activo de la enzima es la localizacin sobre la superficie de la enzima donde se une el sustrato y donde tiene lugar la reaccin qumica catalizada por la enzima. Se produce una interaccin muy precisa del sustrato en el centro activo estabilizada por numerosas interacciones dbiles (puentes de hidrgeno, interacciones electrostticas, contctos hidrofbicos y fuerzas de van der Waals). Las enzimas forman complejos con sus sustratos. La unin de un sustrato con su enzima en el centro activo se llama "complejo enzima-sustrato". Una ecuacin genrica para la formacin del complejo puede formularse:

Las enzimas no cambian la constante de equilibrio de una reaccin. Keq depende slo de la diferencia entre los niveles de energa de los reactivos y los productos (DG). Las enzimas convierten una reaccin no espontnea en una reaccin espontnea.

La energa de activacin es: A. La energa que debe ser aadida al comienzo de la reaccin y que es recuperada cuando la reaccin finaliza B. C. D. E. La diferencia entre las energas de los reactivos y la de los productos La energa que es perdida como calor La energa libre

Es igual al producto de la entropa por la temperatura absoluta.

La energa debe ser suministrada a los reactivos para sobrepasar la barrera energtica, que es recuperada cuando los productos se han formado. La barrera energtica se conoce como Ea, energa de activacin. La energa de activacin es distinta de la DG, o incremento de energa libre entre los reactivos y los productos.

Cual de los siguientes enunciados acerca de la velocidad de reaccin NO es cierto?

A. B. C.
D. E.

La velocidad de reaccin es la velocidad a la que la reaccin procede hacia el equilibrio. La velocidad de reaccin esta gobernada por la barrera de energa entre los reactivos y los productos. Las enzimas pueden acelerar la velocidad de reaccin.
Las velocidades de reaccin no son sensibles a la temperatura. Ninguno de estos.

La velocidad de reaccin es la velocidad a la que la reaccin procede hacia el equilibrio. Para una reaccin catalizada por una enzima, la velocidad es usualmente expresada como la cantidad de producto producido por minuto. La velocidad de reaccin est gobernada por la barrera de energa entre los reactivos y los productos. En general, la energa debe ser aadida a los reactivos para sobrepasar la barrera de energa. Esta energa adicionada se llama "energa de activacin", y es recuperada cuando los reactivos sobrepasan dicha barrera y desciende al nivel de la energa de los productos. Las enzimas pueden acelerar la velocidad de una reaccin. Las enzimas son catalizadores biolgicos. Los catalizadores aceleran la velocidad de las reacciones rebajando la barrera de la energa de activacin entre los reactivos y los productos. La temperatura puede tener un efecto importante sobre la actividad de las enzimas y las velocidades de reaccin. A bajas temperaturas, el aporte de calor usualmente aumenta la velocidad de una reaccin enzimtica, porque los reactivos tienen mayor energa y pueden alcanzar el nivel de la energa de activacin con mayor facilidad. Sin embargo, si la temperatura se eleva demasiado, es posible que se desnaturalice la enzima, provocando una desorganizacin de su estructura terciaria y la prdida de su actividad cataltica.

Con respecto a las reacciones catalizadas por enzimas indique si las afirmaciones son verdaderas o falsas.
a) Una enzima participa en la reaccin alterando la constante de equilibrio de la reaccin, sin alterar la barrera de activacin (Ea). b) El sustrato con menor valor de KM tiene la mayor afinidad aparente por la enzima. c) Una unidad de actividad enzimtica se define como la cantidad de enzima que cataliza la transformacin de un (1) micromol de sustrato por minuto bajo condiciones definidas. d) El nmero de recambio (kcat) es el nmero de moles de sustrato transformado por minuto por mol de centro activo.

e) La catlisis puede ser explicada por una unin tipo llave y cerradura entre el sustrato y la enzima. f) La velocidad inicial de una reaccin catalizada enzimticamente es independiente de la concentracin de sustrato. g) La velocidad inicial aumenta proporcionalmente a la concentracin de enzima. h) El KM equivale a la concentracin de sustrato a la cual la velocidad es la mitad de la mxima. i) El KM vara con la concentracin de enzima.

Stardate 7.012.10.4.00 Diario personal del Mdico militar del USS Hackerprise Al regresar de una misin en Europa, su compaero de tripulacin, Noslen, se pone muy enfermo. Explora a Noslen en bsqueda de seales de infeccin y descubre que est incubando un virus aliengena. Descubre que este virus porta cidos nucleicos, protenas y lpidos. Tambin averigua que este virus puede infectar a las clulas de E. coli, pudindose as analizar fcilmente en el laboratorio. i) Cultiva este virus con uno de los siguientes radioistopos: 32P, 3H , or 35S. Qu macromolcula viral ser marcada con 32P? Los cidos nucleicos Qu macromolcula viral ser marcada con 3H? Todas Qu macromolcula viral ser marcada con 35S? Las protenas

Cmo vara la velocidad de una reaccin catalizada enzimticamente al aumentar la concentracin de sustrato? Y al aumentar la concentracin de enzima?

CLCULO DE LA KM Y DE LA Vmax DE UN ENZIMA

Para determinar grficamente los valores de KM y Vmax es ms sencillo utilizar la representacin doble recproca (1/v0 frente a 1/[S]0), ya que es una lnea recta. Esta representacin doble recproca representacin de Lineweaver-Burk recibe el nombre de

Lineweaber-Burk o Dobles recprocos

ocupan temporalmente el centro activo por semejanza estructural con el sustrato original: inhibidor competitivo

KM aparente es mayor que KM real Vmx no se modifica

alteran la conformacin espacial del enzima, impidiendo su unin al sustrato: inhibidor no competitivo

Se unen al complejo E-S impidiendo la catlisis del sustrato: inhibidor acompetitivo

A partir de los siguientes datos obtenidos para una reaccin catalizada enzimticamente, calcular grficamente la Km y la Vmax de dicha enzima

0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45

0 25 40 48 55 60 62 63 64 64

70 60 50 40 30 20 10 0 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5

Km= 0.8 mM

Vmax= 64 moles/min

Una enzima cataliza una reaccin con una velocidad mxima de 5 moles por minuto, siendo su Km para el sustrato de 0,5 mM. Si la ponemos en presencia de una concentracin 500 mM de sustrato, Qu cantidad de sustrato se lograr transformar en 10 min?

5 moles/min x 10 min = 50 moles

En 10 minutos lograr transformar 50 moles de sustrato

La catalasa cataliza la descomposicin de 5x106 moles de H2O2 por minuto y por mol de enzima y posee cuatro sitios activos por molcula de enzima. Calcular la actividad por centro cataltico de dicho enzima.

Sol.: 1,25 x 106 min-1

Existen diferentes formas de linealizar la ecuacin de Michaelis-Menten: 1/v en funcin de 1/[S] (Lineweaver-Burk)

Cul es el significado de la pendiente, la interseccin con el eje de las y, y de la interseccin con el eje de las x para este grfico?

La deshidrogenasa de Spirulina mxima es capaz de oxidar el metilviolgeno reducido liberando hidrgeno, segn la ecuacin: Hidrogenasa Metilviolgeno --------------------------> colorante oxidado + H2 En presencia del in cianuro (CN-) a concentracin 2,5 10-4 M, se observa que la enzima mantiene invariable su Km, pero su velocidad mxima disminuye en un 20%. qu tipo de inhibicin ejerce el cianuro?

Inhibicin no competitiva Vmax diferente KM igual