RESISTENCIA BACTERIANA Y ANTIBIOGRAMA

Ivonne Gamboa Ramrez Bacteriloga Espidemiloga

Antecedentes histricos

Paul Ehrlich (1908): Cre el primer compuesto qumico sinttico (Salvarsan) que poda curar una infeccin, la sfilis (Treponema pallidum).

Estructura qumica del Salvarsan (La bala mgica)

Antecedentes histricos. Descubrimiento de los antibiticos

Alexander Fleming (1928): Observ que el hongo Penicillium notatum impeda el crecimiento de Staphylococcus aureus Florey y Chain (1939): aislaron Penicilina G

Penicillium notatum

Antecedentes histricos. Descubrimiento de los antibiticos

Foto original tomada por Fleming

Foto actual

El hongo Penicillium notatum impide el crecimiento de Staphylococcus aureus...

Actividad de los antimicrobianos

La actividad de los antimicrobianos se puede ver afectada por....

1. Tamao de la poblacin: ... un mayor nmero de microorganismos demoran ms en morir que un nmero menor de ellos. 2. Composicin de la poblacin: ... la efectividad de un agente vara de acuerdo de acuerdo a la naturaleza del organismo; los microorganismos varan mucho en sensibilidad. (bacteria, levadura, espora, etc.) 3. Concentracin o intensidad del agente antimicrobiano: ... generalmente un agente ms concentrado o ms intenso elimina ms rpido a los microorganismos. (no siempre...etanol 70% ms efectivo que etanol 95%)

Actividad de los antimicrobianos

La actividad de los antimicrobianos se puede ver afectada por....

4. Duracin de la exposicin: ... mientras ms tiempo este el microorganismo expuesto al agente, mayor ser el nmero de organismos eliminados. 5. Temperatura: ... un aumento de la temperatura en que se aplica el agente aumenta la efectividad de ste. 6. Medioambiente local: ... el medioambiente que rodea al microorganismo lo puede proteger de la accin del agente antimicrobiano. (la materia orgnica de la comida protege a las bacterias de la esterilizacin por calor) (todo el material quirrgico debe ser lavado antes de esterilizar)

Generalidades sobre antimicrobianos

Sustancia o Agente capaz de actuar sobre los microorganismos, ya sea inhibiendo su crecimiento o causando su muerte ANTIMICROBIANOS (a) Bacteriostticos Inhiben el crecimiento del microorganismo

(b) Bactericidas Matan a los microorganismos sin necesidad de destruirlos o lisarlos

(c) Bacteriolticos Matan a los microorganismos por lisis

Definiciones

Concentracin inhibitoria mnima (CIM) Corresponde a la menor concentracin de antimicrobiano que inhibe el crecimiento bacteriano luego de 18 a 24 horas de incubacin.

Concentracin bactericida mnima (CBM )

Corresponde a la menor concentracin capaz de matar un 99,9% la poblacin bacteriana.

Antibiograma por difusin (Tcnica de Kirby-Bauer)

Es el mtodo ms usado Es prctico y sencillo de realizar e implementar Permite analizar un gran nmero de antibiticos al mismo tiempo y bajo las mismas condiciones

Entrega un resultado cualitativo (bacteria sensible o resistente)

Antibiograma por difusin (Tcnica de Kirby-Bauer)

Anlisis de varios antibiticos en un mismo ensayo

Resistente (No hay halo de inhibicin)

Sensible (Presencia de halos de inhibicin)

Factores que afectan la actividad antibacteriana in vitro

pH del medio de cultivo: algunos antibiticos son activos a pH cido (nitrofurantona) y otros lo son a pH alcalino (aminoglucsidos). Componentes del medio de cultivo: pueden antagonizar al antibitico (extracto de levadura antagoniza a sulfonamidas). Estabilidad del medicamento: algunos antibiticos se inactivan a la temperatura de cultivo (clortetraciclina, en menor grado penicilina) Tamao del inculo: si hay muchas bacterias, la susceptibilidad es menor y pueden aparecer mutantes resistentes.

Tiempo de incubacin: si es muy breve los m.o. no mueren; si es muy largo, pueden aparecer mutantes resistentes o inactivarse el medicamento.

Antibiograma por dilucin

Tcnica de referencia en la mayora de los estudios clnicos de susceptibilidad a antimicrobianos. Entrega un resultado cuantitativo, ya que permite determinar la concentracin inhibitoria mnima (CIM). Se puede realizar en medio lquido (dilucin en caldo) o en medio slido (dilucin en agar). Mtodo complejo y de alto costo.

Lectura del CIM

Dilucin seriada en caldo

CIM

Actividad antimicrobiana in vivo

Es mucho ms compleja, ya que hay que considerar la relacin con el hospedero

HOSPEDERO

ANTIBITICO

MICROORGANISMO

Prontosil

Metabolizacin en el ratn Sulfanilamida (sulfa)

Gerhard Domagk (1939)

Factores que afectan la actividad antibacteriana in vivo

Estado de actividad metablica de los m.o.: puede ser muy diferente, generalmente menor, que en el laboratorio. Distribucin del medicamento en los diferentes tejidos y rganos: es muy variable, ej. algunos medicamentos no penetran al SNC. Localizacin de los microorganismos: pueden ser parsitos intracelulares, lo que dificulta la accin antimicrobiana. Sustancias que interfieren con el medicamento: el medicamento puede ser inactivado por condiciones ambientales dentro del organismo (ej. pH) o fijado por protenas sanguneas o tisulares.

Prueba de Optoquina

Test D

MECANISMOS DE RESISTENCIA

TIPOS DE RESISTENCIA
NATURAL: siempre ha estado presente en la bacteria y no es el producto de la introduccin del antibitico en el medio. Se denomina como resistencia salvaje. Se ve en todas las cepas de la misma especie: Ej: Proteus mirbilis: naturalmente resistente a Nitrofurantoina, Tetraciclina, Colistina

TIPOS DE RESISTENCIA
NATURAL: Su presencia es cromosmica y su trasmisin es vertical, no horizontal. Puede ser debida a impermeablilidad al a/ b Falta de transporte o diana Perdida de afinidad por la diana

TIPOS DE RESISTENCIA
ADQUIRIDA: la bacteria desarrolla uno o ms mecanismos de resistencia que la hace resistente a un antibitico para el cual es sensible el fenotipo salvaje de la misma Puede deberse a mutacin del cromosoma, o Debida a transferencia de material gentico

Transferencia de material gentico

plsmido

trasposn

Mutacin en los genes: 1.Espntanea 2.Estable 3.Vertical 4.No horizontal

Transposn 1.Estable 2.Trasmisin vertical y horizontal

Plsmidos 1. Inestable 2.Trasmisin vertical y horizontal (conjugacin)

MATERIALES PARA KB
MEDIO MULLER HINTOM CALDOS BHI ESCOBILLONES ESTRILES COLONIAS SEPARADAS O AISLAMIENTOS PUROS PATRN DE Mc.FARLAND 0,5

PROCEDIMIENTO
Inocular con 3-4 colonias en caldo BHI Incubar 2-4 horas Inocular caja de Petri con MH en 3 direcciones Dejar secar 10 minutos Colocar 5 sensidiscos Incubar por 18-24 horas Leer e interpretar

CONSULTAR
www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/Seminario Antibioticos.htm www.netropica.org/PDFs b medica/PSA.pdf