ENZIMAS: catalizadores biolgicos

Dr: Carlos. R Gonzlez

ENZIMAS
1.

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Conceptos generales Clasificacin Cintica enzimtica Inhibicin enzimtica Enzimas alostricas Catlisis enzimtica Efectos de temperatura, pH y cofactores Regulacin enzimtica

Conceptos generales
Son catalizadores tpicos: aceleran la velocidad de una

reaccin sin ser consumidas en el proceso Son estructuralmente reciclables Incrementan las velocidades de las reacciones en un orden de 108 a 1014 veces Son catalizadores biolgicos Algunas requieren cofactores o grupos prostticos La actividad enzimtica es regulable Con excepcin de un pequeo grupo de molculas de ARN, todas las enzimas son protenas.

Conceptos generales
Algunas poseen isoenzimas, enzimas que catalizan la

misma reaccin pero presentan diferencias en 1 o ms aminocidos de su estructura primaria. En una reaccin catalizada por una enzima: La sustancia sobre la que acta la enzima se llama sustrato. El sustrato se une a una regin concreta de la enzima, llamada centro activo. Una vez formados los productos la enzima puede comenzar un nuevo ciclo de reaccin

ESPECIFICIDAD DE LAS ENZIMAS

Especificidad ptica: actan sobre un

determinado ismero. Ejem: serie L (AA) o serie D (H de C)

Especificidad de grupo: algunas actan sobre un

grupo determinado de molculas. Ejem: enzimas que digieren las protenas.

Clasificacin
En funcin de su accin cataltica especfica, las enzimas se clasifican en 6 grandes grupos o clases: Clase 1: OXIDORREDUCTASAS Clase 2: TRANSFERASAS Clase 3: HIDROLASAS Clase 4: LIASAS Clase 5: ISOMERASAS Clase 6: LIGASAS

Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
Reacciones de oxidacin- reduccin . Ejem:

oxidasas, deshidrogenasas, reductasas y peroxidasas

Clase 2: TRANSFERASAS
Catalizan la transferencia de un grupo qumico

(distinto del hidrgeno) de un sustrato a otro. Ejem: transcarboxilasas, transmetilasas, transaminasas

Clase 3: HIDROLASAS
Catalizan las reacciones de hidrlisis:

(rupturas hidrolticas. Ejem: peptidasas, fosfatasas, esterasas.

lactosa + agua glucosa + galactosa

Clase 4: LIASAS
Formacin de dobles enlaces por eliminacin de un

grupo qq o adicin de grupos a dobles enlaces. Ejem: aldehido liasas, descarboxilasas, deshidratasas, desaminasas, sintasas

Clase 5: ISOMERASAS
Catalizan la interconversin de ismeros: rearreglos

de tomos dentro de una molcula. Son ejemplos la fosfotriosa isomerasa, fosfoglucosa isomerasa, epimerasas, mutasas

Clase 6: LIGASAS
Reacciones en las que se unen dos

molculas Formacin de enlaces qq, utilizando ATP u otros nucletidos como fuente de energa. Ejem: polimerasas, sintetasas

NOMENCLATURA

Sitio o centro activo de una enzima

Lugar de la estructura proteica donde se

1.

2.

da la interaccin con el sustrato. Es una estructura dinmica y transitoria. Hay dos modelos sobre la forma en que el sustrato se une al centro activo de la enzima: Modelo llave cerradura Modelo del ajuste inducido

Modelo llave cerradura

Propuesto por el bioq. alemn

E. Fisher 1884 Plantea una interaccin relativamente rgida entre los 2 componentes. La enzima permanece sin transformaciones estructurales ni funcionales Supone que la estructura del sustrato y la del sitio activo son complementarias

Modelo del ajuste inducido

Propuesto por D. Koschland en 1958

La enzima sufre un cambio

conformacional (al interactuar con el S) que permite una relacin ms estrecha entre ambos Es el ms aceptado actualmente La E y el S sufren cambios conformacionales Al final de la reaccin la E recupera su estructura original

MODO DE ACCIN DE LAS ENZIMAS: conceptos importantes

Una reaccin qumica tiene lugar cuando las molculas

que chocan poseen una cantidad mnima de energa denominada energa de activacin ( Ea). En bioqumica esta energa se conoce ms frecuentemente como energa libre de activacin (G). La Ea es una barrera energtica por encima de la cual una molcula de un producto intermedio debe pasar para que se lleve a cabo una reaccin. Estado de transicin: es un estado que posee mayor cantidad de E libre que los reactantes y que los productos.

Perfil energtico de una reaccin espontnea

Perfil energtico de una reaccin catalizada

La accin de los catalizadores consiste en disminuir la Ea Las enzimas disminuyen la Ea aun ms que los catalizadores inorgnicos. La actuacin de la enzima permite: 1. Que los sustratos se unan a su centro activo con una orientacin ptima para que la reaccin se produzca. 2. Modifica las propiedades qumicas del sustrato unido a su centro activo, debilitando los enlaces existentes y facilitando la formacin de otros nuevos

CINETICA ENZIMTICA

CINETICA ENZIMTICA
Estudio cuantitativo de la catlisis enzimtica

Velocidad de reaccin: cambio en la concentracin

de sustratos o productos por unidad de tiempo. Las enzimas son catalizadores biolgicos

Cintica enzimtica: orden de la reaccin Los principios generales de las reacciones qumicas se aplican tambin a las reacciones enzimticas
En una reaccin de primer orden la velocidad de formacin de los

productos es directamente proporcional a la concentracin del sustrato. Una reaccin de segundo orden es aquella en la que la velocidad de formacin del producto depende: 1. de la concentracin de dos sustratos (como en una reaccin de condensacin) 2. del cuadrado de la concentracin de un nico sustrato (reaccin de dimerizacin) En una reaccin de orden cero, la velocidad de formacin del producto es independiente de la concentracin de sustrato.

Cintica enzimtica
Teora general de la accin enzimtica:

La E se combina con su S para formar el complejo E-S (unin reversible) luego este se rompe: por un lado se libera la E y por el otro se origina el Producto

Factor limitante

Cintica de Michaelis - Menten

El efecto de la [S] en la velocidad de reaccin se

rige por la siguiente ecuacin matemtica:

V: velocidad inicial de la reaccin Vmax: velocidad max. que puede alcanzar la rx Km: cte de Michaelis [S]: concentracin de sustrato

Ecuacin de Michaelis Menten

Vmax: punto en que no importa

la cantidad de S, la velocidad de rx no aumenta ms. Punto de saturacin de la E: corresponde a la cantidad de S donde se alcanz la Vmax Km: [S] a la cual se alcanza la mitad de la Vmax Km: es un parmetro de la afinidad de la enzima por su sustrato.

Ecuacin del doble recproco o de Lineweaver- Burk

Se colocan valores

del recproco de la [S] y de la Vi

1 Km 1 Vi V max[ S ] V max

INHIBICIN ENZIMTICA
Medio importante para regular las rutas

metablicas
Tx clnicos se fundamentan en la

inhibicin enzimtica
Permite disear tcnicas bioqumicas

Clases de inhibidores
Inhibicin reversible:

1. Competitivos
2. Acompetitivos 3. No competitivos Inhibicin Irreversible: venenos

enzimticos

Inhibidores competitivos
Se unen de forma reversible a la enzima libre para formar complejo

EI El S y el I compiten por el mismo lugar en la enzima La actividad de la enzima El efecto puede invertirse: la [ S ] Reducen la afinidad de la enzima por el S Tienen una estructura semejante al S

Inhibidores competitivos

Succinato deshidrogenasa

Inhibidores acompetitivos
Se unen al complejo ES

La adicin de ms S a la rx la velocidad de rx
Se observa en las rxs en las que se unen ms de un

sustrato

Inhibidores No competitivos
Se unen tanto a la E como al complejo ES

Se unen a un sitio diferente del lugar activo de la E

Modificacin de la conformacin de la E (impide la

formacin del producto) No afectan a la unin del sustrato Se invierte parcialmente= la [ S ]

Inhibicin no competitiva

Cintica de la inhibicin enzimtica

NC

AC

Inhibicin irreversible
Se unen covalentemente a

la enzima Inhibicin con metales pesados como Hg y Pb Anemia por envenenamiento por Pb: unin del Pb a los grupos SH de la ferroquelatasa (insercin de Fe+2 en el hemo)

Inhibicin irreversible

Enzimas alostricas
Son protenas con varias subunidades

Su actividad es afectada por molculas efectoras que se

unen a otros lugares alostricos o reguladores Catalizan pasos reguladores claves de las rutas bioqumicas Representacin de la velocidad de rx son sigmoideas

Catlisis

Efectos de proximidad y tensin Efectos electrostticos Catlisis acidobsica Catlisis covalente

La actividad ptima de la enzima depende de:

Temperatura

pH
Presencia de cofactores [ S ] [ E ]

Efecto de los cofactores

Casi un tercio de los enzimas conocidas requieren cofactores para su

funcin. Los cofactores pueden ser iones inorgnicos como el Fe++, Mg++, Mn++, Zn++ etc. Cuando el cofactor es una molcula orgnica se llama coenzima. Muchos de estas coenzimas se sintetizan a partir de vitaminas

Funcin de los cofactores

Alterar la estructura tridimensional de la enzima

Intervenir como otro sustrato

Efecto de la T
Los aumentos de

temperatura aceleran las reacciones qumicas

La temperatura a la cual la

actividad cataltica es mxima se llama temperatura ptima

Efecto del pH
Segn el pH del medio, los grupos R

de las enzimas pueden tener carga elctrica positiva, negativa o neutra.

Hay un pH en el cual la conformacin

ser la ms adecuada para la actividad cataltica. Este es el llamado pH ptimo.

La mayora de las enzimas son muy

sensibles a los cambios de pH. (amortiguadores fisiolgicos)

Modificacin de la [S]
Es la menos compleja.

Ocurre al o la [S]
Bajas [S] es indicador de

disminucin de la actividad enzimtica Fig sup: velocidad de rx enzimtica a 6 diferentes [S]

Modificacin de la [E]
Es ms compleja: requiere la sntesis de novo de

enzimas (induccin enzimtica) La sntesis proteica requiere tiempo y mucha energa Cuando la [S] aumenta por encima de ciertos valores y si aparecen nuevos sustratos (antes ausentes) se deben sintetizar nuevas enzimas. La induccin enzimtica es estimulada por hormonas (larga duracin) Represin enzimtica: disminucin de la sntesis de enzimas ** de acuerdo a las necesidades celulares

Regulacin enzimtica
Mantenimiento de un estado ordenado Conservacin de energa Respuesta a las variaciones ambientales

El control se realiza por:

1. Control gentico 2. Modificacin covalente 3. Regulacin alostrica 4. Activacin de zimgenos

Control gentico
Induccin enzimtica

Represin enzimtica

Modificacin covalente
La actividad enzimtica puede o por adicin covalente de un

grupo qumico a la enzima Es transitoria y reversible Con mayor frecuencia: fosfatos, metilo y adenosina La adicin o remocin de grupos qq funcionan como mecanismos de control

Elementos de la reaccin

Enzima no fosforilada es inactiva

Enzima fosforilada es activa

Modificacin covalente

Activacin de zimgenos
Las enzimas son sintetizadas como molculas inactivas llamadas

zimgenos o proenzimas. Para activarse, los zimgenos sufren un ataque hidroltico que origina la liberacin de uno o varios pptidos Si estas enzimas se sintetizasen directamente en forma activa destruiran la propia clula que las produce

Regulacin alostrica

1. 2. 1.
2.

Las enzimas reguladas por alosterismo existen en dos estados: T o tenso L o laxo Hay 2 tipos de reguladores alostricos: Efectores o activadores alostricos Inhibidores alostricos Ciertas sustancias se unen en sitios diferentes del sitio activo (sitio alostrico) Ejem: ATP, NADH, citrato, etc.