Вы находитесь на странице: 1из 36

А.С.

Спирин

2006 г.

Лекция 8:
Инициация трансляции у
эукариот
ОСОБЕННОСТИ ЭУКАРИОТИЧЕСКОЙ ТРАНСЛЯЦИИ

И ЭУКАРИОТИЧЕСКОЙ мРНК
СОПРЯЖЕННАЯ ТРАНСКРИПЦИЯ-ТРАНСЛЯЦИЯ ПРОКАРИОТ
Общая схема биосинтеза белков
Д Н К

ТРАНСКРИПЦИЯ

Р Н К

ПРОЦЕССИНГ И
ТРАНСПОРТ РНК
5' 3'

м Р НК

ТРАНСЛЯЦИЯ
РИБОСОМА РИБОСОМА
3'

РИБОСОМА
5'

РАСТУЩИЙ
ПЕПТИД

т РН К

т РН К т РН К

СВОРАЧИВАНИЕ
ПРОЦЕССИНГ И
ТРАНСПОРТ
ПОЛИПЕПТИДА

БЕЛОК
Инициация трансляции мРНК в цитоплазме:

• «Девственная» инициация трансляции нетранслмруемых мРНК (мРНП).


• Инициация трансляции транслируемых мРНК новыми рибосомами.
Инициация трансляции мРНК в цитоплазме:

• «Девственная» инициация трансляции нетранслмруемых мРНК (мРНП).


• Инициация трансляции транслируемых мРНК новыми рибосомами.
• Ре-инициация в циркуляризованных полирибосомах.
ЦИРКУЛЯРИЗАЦИЯ ПОЛИРИБОСОМЫ

40S

5'-UTR

CAP

POLY(A)
40S
60S
CODING REGION
3'-UTR

60S
ЦИРКУЛЯРИЗАЦИЯ
ЭУКАРИОТИЧЕСКИХ
ПОЛИРИБОСОМ
(полирибосомы клеток гипофиза
крысы на эндоплазматическом
ретикулуме).
ИНИЦИАЦИЯ ТРАНСЛЯЦИИ

Э ук ари оты :

скан и р о ван и е трансляци я


I: 5' 3'

СТА РТ СТО П

П р ок ари оты :

трансляци я

II: 5' 3'

СТА РТ СТО П
ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ УЧАСТКИ ЭУКАРИОТИЧЕСКОЙ мРНК

• «Кэп» и 5'-НТО:
Концевая инициация. Разделенность RBS и AUG.
Сканирование.
• Моноцистронность.
• Длинные 3'-НТО:
Регуляторные третичные структуры.
Усилители инициации («энхансеры»).
В клетках эукариот вся мРНК существует в форме
комплексов со специальнцыми белками –
информационных рибонуклеопротедов (мРНП) -

либо в качестве свободных нетранслируемых мРНП-частиц


(информосом),

либо как транслируемые мРНП в составе полирибосом.


Мажорный белок цитоплазматических мРНП –
«р50» = YB (“Y-box protein”):

•Неспецифическая РНК-связывающая активность


•Мол. масса 36 000 D
•Трех-доменная структура:
А,Р-богатый участок (N-конец),
РНК-связывющий участок (центр),
«+,–» участок (С-конец)
•Формирование крупных гомоолигомеров
итоплазматические
информационные рибонуклеопротеиды в животных клетках

. Свободные нетранслируемые мРНП-частицы


как форма существования маскированных мРНК.
Стабильны в клетке, не подвержены деградации и
полиаденилированию/деаденилированию,
не способны взаимодействовать с факторами инициации трансляции и рибосомами.

I. Свободные мРНП-частицы
как фонд транслируемых мРНК.
Подвержены как деаденилированию и деградации,
так и полиаденилированию и взаимодействию с рибосомами.
Могут либо находиться в равновесии с полисомами,
либо быть временно выключены из трансляции репрессорами.

II. Транслируемые мРНП, входящие в состав полисом и


освобождаемые при диссоциации рибосом.
Белки, связанные с мРНК в полисомах, позволяют рибосомам беспрепятственно транслировать
кодирующие последовательности, а возможно и способствовать трансляции.
сновные физико-химические свойства
свободных цитоплазматических мРНП (информосом)

1) Гетерогенность размеров,
линейная корреляция коэффициентов седиментации частиц
с коэффициентами седиментации их изолированной РНК.

2) Плотностная гомогенность (т. е. все частицы, не зависимо от размера, имеют одинаковое


соотношение белок : РНК).

3) Высокое соотношение белка к РНК (около 4 : 1)


и соответственно низкая плавучая плотность (1,4 г/см3 в CsCl).
(Рибосомы имеют соотношение 1 : 1 и плавучую плотность 1,55 г/см3).

4) Устойчивость к удалению ионов магния.


(Рибосомы при удалении магния диссоциируют
сначала на субчастицы, а затем на РНК и белок).

5) Чувствительность к рибонуклеазам.
(Рибосомы относительно устойчивы к рибонуклеазной обработке).
ОСОБЕННОСТИ ЭУКАРИОТИЧЕСКОЙ мРНК:
• Пространственное разделение транскрипции и трансляции
• Функциональная стабильность мРНК («долгоживучесть»)
• Сканирование пред-инициаторного участка мРНК
• Специфические пространственные структуры в 5’ и 3’ НТО
• Функционально активные 5’ и 3’ нетранслируемые участки мРНК
и их функциональные взаимодействия («переговоры») в
ходе трансляции
• Множественность белковых факторов инициации
• Нуклеопротеидная форма существования (мРНП)
I

II

III
“Native” 40S subunit =
40S:eIF3:eIF1A:eIF1:eIF2αβγ
I

II

III
ЦИКЛ ИНИЦИАТОРНЫХ ФАКТОРОВ eIF2:GDP/GTP И eIF2B

eIF 2 : G T P : eIF 2 B M e t-tR N A i

G TP

M e t-tR N A i : e IF 2 : G T P : e IF 2 B
e IF 2 : e IF 2 B

G D P 4 0 S S U B U N IT

e IF 2 B

e IF 2 : G D P 4 0 S : M e t-tR N A i : e IF 2 : G T P

8 0 S : M e t-tR N A i 6 0 S S U B U N IT
IN IT IA T IO N C O M P L E X
I

II

III
40S – eIF3 – eIF4F (G) – PABP – 3’poly(A)
(E) – cap
ИНИЦИАЦИЯ ТРАНСЛЯЦИИ У ЭУКАРИОТ:
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ СОБЫТИЙ ПРИ ОБРАЗОВАНИИ
ИНИЦИАТОРНОГО 48S РИБОСОМНОГО КОМПЛЕКСА

A :A T P
A U G e IF 4 F A U G
e IF 4 B
G
CA P 3′ E
(1 ) (2 )

A D P, P e IF 4 A :A T P
A U G i
E G A A U G
E G A :A T P

(2 ) (3 ) (4 )
B B
e IF 4 F

A
A U G e IF 4 A :A T P A U G
A :A T P
A :A T P
(4 ) (5 )
B B
A D P, P i
e IF 4 A

A 43S C O M PLEX
A :A T P

(6 )
B

48S C O M PLEX

A U G

(6 ) B
РАСПЛЕТАНИЕ НЕКОДИРУЮЩЕЙ ЛИДЕРНОЙ ОБЛАСТИ мРНК
ФАКТОРОМ eIF4A
(ATP-DEPENDENT HELICASE, OR RNA-DEPENDENT ATPase)
ИНИЦИАЦИЯ ТРАНСЛЯЦИИ У ЭУКАРИОТ:
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ СОБЫТИЙ
ИНИЦИАЦИЯ ТРАНСЛЯЦИИ

Э ук ари оты :

скан и р о ван и е трансляци я


I: 5' 3'

СТА РТ СТО П

П р ок ари оты :

трансляци я
5' 3'

СТА РТ СТО П

II: (а также внутренняя инициация у эукариот)


ВНУТРЕННЯЯ ИНИЦИАЦИЯ ТРАНСЛЯЦИИ
ПИКОРНОВИРУСНОЙ РНК

IRES
A

300 400

500

200
586 600 743
AUG AUG
100
Pyrimidine-rich region
IRES

5' UUUC.. .UU AUG AUG 3'


600 scanning

500
300 cardioviruses enteroviruses
700 rhinoviruses
100 800 834 unstructured spacer,
AUG starting window
400
Pyrimidine-rich region
oligopyrimidine tract aphthoviruses
IRES
ВНУТРЕННЯЯ ИНИЦИАЦИЯ ТРАНСЛЯЦИИ
ПИКОРНОВИРУСНОЙ РНК
IRES

CAP
5' UUUC.. .UU AUG AUG 3'
scanning

cardioviruses enteroviruses
rhinoviruses
unstructured spacer,
starting window

oligopyrimidine tract aphthoviruses


СХЕМА ВНУТРЕННЕЙ ИНИЦИАЦИИ ТРАНСЛЯЦИИ
РНК ВИРУСА ПАРАЛИЧА СВЕРЧКА

(1) Домен IRES’a занимает Р-участок рибосомы,


вместо инициаторной тРНК, садясь на
пролиновый CCU-кодон.

(3) Ala-tRNA занимает А-участок, садясь на свой


GCU-кодон.

(5) Происходит «псевдо-транслокация» Ala-


tRNA из А в Р участок.

(7) На вакантный А-участок садится Thr-tRNA, в


соответствии с АСА-кодоном, и начинается
трансляция.

J.E. Wilson, T.V. Pestova, C.U.T. Hellen and P. Sarnow (2000) Initiation of protein synthesis from
the A site of the ribosome. Cell 102, 511-520.
3’-КОНЦЕВЫЕ УСИЛИТЕЛИ ИНИЦИАЦИИ ТРАНСЛЯЦИИ:

(3) Poly(A) tail (+ PABP).


(4) Histone mRNA SL (+ SLBP).
(5) Pseudoknot domains and other special structures (TED, TE, etc.).
(6) tRNA-like domain (of plant viral RNAs).
КРУГОВАЯ ТРАНСЛЯЦИЯ
В СФОРМИРОВАННЫХ ПОЛИСОМАХ

40S

5'-UTR

CAP

eIF3, eIF4
PABP
POLY(A)
40S
60S
CODING REGION
3'-UTR

60S
тРНК-ПОДОБНАЯ СТРУКТУРА НА 3’-КОНЦЕ РНК ВТМ

A 10 B
UA
30
A A U CCCC CCG GGGGCCCA OH
G
C GGGG GGC CCCC
U U
G A UUA
G 40 G A
U C U 20
A A A G C
G
A U 100 C
U C
A U A
U G G
U G G C
50 G G C 90 C G
U A
C G C
U G G C 60
5' C
A A A U
U A
80 G C
U A
A U
U A
A U
U A
G C
G U U
70
СХЕМА РНК ВИРУСА ЖЕЛТОЙ МОЗАИКИ ТЕРНЕПСА (TYMV)

Полноразмерная РНК (6319 нт) содержит следующие гены:


(1) ген транспортного белка (МР), начинающегося на 89-м нуклеотиде;
(2) ген поли-белка (РР), начинающегося на 96-м нуклеотиде в +1 рамке;
(3) ген белка оболочки (СР), начинающегося на 5645-м нуклеотиде.

S. Barends, H.H.J. Bink, S.H.E. van den Worm, C.W.A. Pleij and B. Kraal (2003) Entrapping ribosomes for viral
translation: tRNA mimicry as a molecular Trojan Horse. Cell 112, 123-129.
СХЕМА МЕХАНИЗМА ВНУТРЕННЕЙ ИНИЦИАЦИИ ТРАНСЛЯЦИИ
ГЕНА ПОЛИ-БЕЛКА ВИРУСА ЖЕЛТОЙ МОЗАИКИ ТУРНЕПСА
С УЧАСТИЕМ тРНК-ПОДОБНОГО 3’-КОНЦЕВОГО ДОМЕНА

Трансляция гена РР начинается с валина!

Val

S. Barends, H.H.J. Bink, S.H.E. van den Worm, C.W.A. Pleij and B. Kraal (2003) Entrapping ribosomes for viral
translation: tRNA mimicry as a molecular Trojan Horse. Cell 112, 123-129.
ИНИЦИАЦИЯ ТРАНСЛЯЦИИ

• Установка донорного субстрата в P-участок рибосомы.


Постановка первой аминокислоты синтезируемой
полипептидной цепи, образование первой пептидной связи.
• Установка рамки считывания матричной РНК.
Опознавание инициирующего кодона,
детерминация стартового нуклеотида трансляции.
• Точка приложения механизмов регуляции белкового синтеза
на уровне трансляции.
реимущества регуляции на уровне трансляции:

1) Быстрота ответа.

2) Обратимость (и, следовательно, консервация ресурсов мРНК).

3) Точная подгонка количества синтезируемого белка к потребности клетки в нем.

4) Координированный синтез семейств белков.

5) Пространственный контроль синтеза белков в клетке.

6) Регуляция синтеза белков при клеточной дифференцировке.

7) Регуляция синтеза белков в отсутствие активности клеточного ядра


(например, в раннем эмбриогенезе).