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INTRODUCCION
Las buenas prcticas en un laboratorio microbiolgico consisten en actividades que dependen de varios principios:
Tecnicas aspticas, control de medios, control de cepas y control de equipos, registro detallado y relacin de datos as como capacitacin del personal de laboratorio. Debido al riesgo inherente de variabilidad, la confiabilidad y la reproducibilidad dependen de la utilizacin de los mtodos aceptados y del cumplimiento de las buenas prcticas de laboratorio.
Procedimiento
ALMACENAMIENTO DE MEDIOS
Es prudente considerar como como el fabricante o el proveedor transporta y almacena los medios antes de distribuirlos al usuario final. Los fabricantes de medios deberan manejar los medios bajo condiciones de transporte y almacenamiento que minimicen la perdida de humedad, controlen la temperatura, prevengan la contaminacin microbiana y provean de proteccin mecnica a los medios preparados. No almacenar un agar a temperaturas iguales o bajo cero ya que el congelamiento podra perjudicar la estructura del gel. El medio de agar liquido debera colocarse en un bao de agua entre 45-50 grados durante no mas de 8 horas.
Equipos de Laboratorio La mayor parte de los equipos (incubadoras, baos de agua y autoclaves)est sujeta a las prcticas estndares de identificacin de instalacin, operacin y desempeo. Diagrama del Laboratorio y Operaciones En el diagrama y diseo del laboratorio se debe tener en cuenta los requisitos de las buenas practicas microbiolgicas y de seguridad de laboratorio. Es esencial que se trate de minimizar en lo posible la contaminacin cruzada de los cultivos biolgicos. En general, un laboratorio debe estar dividido en reas limpias o aspticas y reas de cultivos vivos.
MANIPULACION DE MUESTRAS
Los microorganismos viables en la mayora de las muestras microbiolgicas, particularmente muestras de agua, monitoreo ambiental y biocarga son sensibles a las condiciones manipulacin y almacenamiento. Los parmetros crticos incluyen la composicin del producto, composicin del recipiente, tiempo y temperatura de almacenamiento. Por lo tanto es importante minimizar el tiempo entre el muestreo y el inicio de la prueba y controlar las condiciones de almacenamiento.
< 3 das
> 3das
Horas
Das
Las incubaciones iniciadas en la maana o despus del medio da deberan concluirse generalmente a la misma hora del da.
Personas con una previa y slida educacin en microbiologa o en otro campo cientfico vinculado a la biologa
El personal no deber realizar pruebas microbiolgicas en forma independiente hasta estar CAPACITADO para llevarlas a cabo.
El historial de capacitacin debe estar al da, documentando el entrenamiento en la revisin vigente de cada POE en particular
Funciones laborales
RESPONSABLE DE REA: Habilidades de supervisin Medicas de seguridad laboral en el laboratorio Planificacin Presupuesto Capacitacin Investigacin Profesional Redaccin de informe tcnicos continua. POEs pertinentes Dems aspectos importantes
DOCUMENTACIN
Se debe contar con suficiente informacin para demostrar que la prueba fue hecha en un laboratorio y que se emplearon mtodos adecuados
Capacitacin y verificacin de competencia Validacin, calibracin y mantenimiento de equipos Preparacin de medios, controles de esterilidad, promocin de crecimiento y capacidad de selectividad Inventario de los medios y pruebas de control Verificacin de datos y clculos Informes
Se deber contar con registros o formularios que respaldan los registros del cuaderno del laboratorio. Las temperaturas de los equipos deberan registrarse y ser rastreables. En el informe se debera incluir en forma explcita el POE vigente y todas sus revisiones.
Los estudios de laboratorio deberan llevare a cabo con la mayor precaucin posible para EVITAR LA CONTAMINACIN EXGENA. Es importante que los resultados se interpreten a partir de una perspectiva microbiolgica amplia que tenga en cuenta no solo la naturaleza del contaminante putativo sino tambin la posibilidad de que ese organismo u organismos sobrevivan en el ingrediente farmacutico, el excipiente o el ambiente en anlisis. Cuando se observan resultados que no se ajustan a una monografa farmacopica o a otros criterios de aceptacin conocidos, es necesario llevar a cabo una investigacin en la desviacin de los datos microbianos.
CONTROLES POSITIVOS Y NEGATIVOS DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Y SU RELEVANCIA EN LOS ANALISIS MICROBIOLOGICOS
Medio de Cultivo: Es una solucin acuosa (bien como tal, o bien incorporada a un coloide en estado de gel) en la que estn presentes todas las sustancias necesarias para el crecimiento de un determinado microorganismo. Segn la finalidad estos podemos encontrar: 1) Medios nutrientes (no selectivos) Permiten el desarrollo de varios tipos de microorganismos. No contienen inhibidores. Como ejemplos: agar tripticasa soja, caldo nutriente, etc y a veces contienen ciertos productos tales como sangre, yema de huevo, etc. Para permitir el crecimiento de microorganismos exigentes: tendramos entonces un medio de cultivo rico o enriquecido; ej. agar sangre, agar chocolate (el medio contiene sangre hemolizada). Tambin pueden contener indicadores de pH u otros para diferenciar la reaccion de los m.o.; tales medios se llamaran medios diferenciales, por el. agar lactosa rojo fenol (indicador de pH rojo fenol), caldo tioglicolato (indicador de potencial redox resazurina).
Son medios que contienen adems de los nutrientes, ciertas sustancias que inhiben el desarrollo de algunos microorganismos permitiendo el crecimiento de otros, por ej. agar cetrimide. Tambin pueden contener indicadores para diferenciar los distintos tipos de microorganismos que puedan crecer en l; tal medio sera selectivo y diferencial, por ej. Mac Conkey, Baird Parker, EMB, etc. Los medios de enriquecimiento selectivo son medios selectivos lquidos que contienen inhibidores, ej., sales biliares, altas concentraciones de cloruro de sodio, etc. 3) Medios diferenciales Contienen sustancias que permiten diferenciar las distintos tipos de m.o. por ej por sus propiedades bioqumicas (produccin de cido de un carbohidrato, produccin de pigmentos, hidrlisis de un compuesto, etc) , ej: agar lactosa rojo fenol, agar Mac Conkey, agar Baird Parker (contiene yema de huevo que permite ver la produccin de lipasas). Pueden ser selectivos o no.
EJEMPLOS
Crecimiento de microorganismos en medio de cultivo slido Microorganismos Caractersticas de las Medio de Microorganismos Caractersticas de las
cultivo Agar caso (ADCS) Agar Sabouraud 4% (SDA) Control Positivo colonias control negativo Candida albicans Staphylococcus aureus colonias Poco desarrollo colonias. Poco desarrollo de colonias Staphylococcus aureus Colonias medianas blancas Cndida albicans Colonias blanquecinas bien desarrolladas
Abundante desarrollo de colonias amarillas pequeas Staphylococcus aureus rodeadas de una zona amarilla. Colonias rodeadas turbia. grandes rojas, de una zona
Escherichia coli
Ausencia de crecimiento
Colonias verdosas fluorescentes bajo luz UV Colonias bien desarrolladas de color rojo con o sin centro negro Colonias rodeadas turbia. grandes rojas, de una zona
Agar XLD
Escherichia coli
Staphylococcus aureus
Micrococcus luteus
Micrococcus luteus
Buen crecimiento Colonias grandes rojas, rodeadas de una zona turbia. Colonias grandes rojas, rodeadas de una zona turbia. Colonias bien desarrolladas de color rojo con o sin centro negro
Escherichia coli
Caldo Mossel
Escherichia coli
Staphylococcus aureus
Ausencia de crecimiento
Caldo Rappaport
Salmonella sp.
Staphylococcus aureus
Ausencia de crecimiento
Evitar falsos positivos y falsos negativos para asi asegurar confiabilidad de los resultados emitidos.
GRACIAS