Tcnicas de laboratorio para el diagnstico de Influenza

Tipos de tcnicas
Identificacin del virus

Directas

Virus (viables o no viables) Antgenos Virales cido Nucleico viral

Pruebas de laboratorio
Identificacin de la respuesta inmune

Indirectas

Anticuerpos

Tipo de tcnica segn los das de evolucin

Anlisis virolgicos
Periodo de incubacin PCR

Anlisis serolgicos
Deteccin Ac

Deteccin Ag / Cultivo

Respuesta de anticuerpos

Virus

Das de evolucin

Tipos de inmunofluorescencia

Directa: Ac marcado con el fluorocromo se une al Ag presente en las clulas epiteliales

Indirecta: el Ac que se une al Ag presente en las clulas epiteliales est sin marcar. El conjugado detecta el primer Ac

IgG marcado con FITC IgG no marcado

Anti-IgG marcado con FITC

Ag Clulas

Ag Clulas

Kit Light DiagnosticsTM Respiratory Panel Millipore-Chemicon

Frascos 2 ml con anticuerpos monoclonales marcados con FITC para la deteccin de:

Adenovirus Influenza A y B Parainfluenza 1, 2 y 3 Virus Respiratorio Sincicial Con protena estabilizadora, azul de Evans y azida de sodio al 0,1% como preservante

Lminas de control para los antgenos virales Paquete de sales para PBS

Kit Light DiagnosticsTM Respiratory Panel Millipore-Chemicon

Frasco 10 ml Tween 20 Frasco 10 ml Lquido de montaje pH 8,5 glicerina tamponada con Tris, amplificador de inmunofluorescencia y azida de sodio 0,1%

Inmunofluorescencia viral

Ventajas:

Desventajas:

Rpido y verstil Diagnstico simultneo para mltiples virus respiratorios Mejor sensibilidad que las pruebas rpidas Detecta de virus viable y noviable Resultado < 24 horas

No diferencia entre subtipos HA Requiere experiencia tcnica Requiere de microscopio de fluorescencia Costoso

Aislamiento del virus Influenza en huevos embrionados

RT-PCR tiempo real

Amplificacin de un segmento especfico de ADN Sondas y primers especficos para la deteccin de:

Influenza A Influenza A/H1 Influenza A/H3 Influenza A/H5a Influenza A/H5b Influenza B

RT-PCR tiempo real

Ventajas

Desventajas

Altamente sensible (una sla molcula puede ser detectada) y especfico Detecta virus viables y noviables Herramienta de estudios de alta complejidad identificacin de variabilidad gentica Procesamiento simultneo de muchas muestras e identificacin de diferentes virus Resultados en < 24 horas

Requiere experiencia tcnica Primers y sondas deben ser actualizados Estandarizacin interlaboratorial limitada reactivos y equipos Costoso

Factores que afectan la sensibilidad y especificidad de las tcnicas

Tiempo de recoleccin de muestra despus de aparicin de sntomas: > 3 das de evolucin Tipo de muestra Calidad de la muestra Manipulacin, almacenamiento y transporte Tipo de tcnica Errores tcnicos en procedimientos Poblacin en estudio: vacunacin

Redes de Laboratorio Internacional

Todos los virus de casos humanos de influenza se envan al laboratorio de referencia de la OMS (CDC Atlanta) para:

Anlisis de susceptibilidad antiviral

Estudios moleculares (ejemplo

determinar sub-tipo) Desarrollo de vacunas

MSc. Jenny Lara Araya

Centro Nacional de Influenza Centro Nacional de Referencia de Virologa

INCIENSA, Costa Rica