Bioquímica II

Cuarto Bloque

Bioquímica Genética

Jesús F. Torres-Peraza
MD PHD
 Experimento de
Frederic Griffith
(1923)

Al exponer a las bacterias de la cepa

S (patógenas) al medio donde Conclusión: Existen moléculas
crecían las bacterias de la cepa R (no (Sustancia Transformadora) en
patógenas) se logró la la cepa Lisa capaces de portar y
transformación: Cambio de no transmitir la información
patógenas a patógena (de R a S) hereditaria produciendo la
transformación bacteriana
OJO: Ese cambio fue permanente y
hereditario.
¿Cual es el sustrato bioquímico de la información genética?
 Conclusión: “La
sustancia
transformadora”, la
molécula que porta
y transmite la
información
hereditaria es el
ADN

¿Como se hereda?…..¿Cual es la composición de

la sustancia?....¿cual es la estructura?.....¿que
tipo de información guarda?
 F. Crick Watson
-La molécula está compuesta por la
misma cantidad de A y T, así como de
C y G. (relación A:T y C:G igual a 1)
-El espacio ocupado por A-T es el
mismo ocupado por C-G.
Fotografía por Difracción de
Rayos X del ADN. Tomada por
Las bases A-T y las C-G
Roselin Franklin. Real Colegio
siempre están pareadas.
de Londres. 1953.
DOBLE HÉLICE A C T G

T G A C
 Modelo de la doble hélice del ADN
realizado en 1953 por los Drs. Watson y
Crick a sus 24 y 36 años de edad
respectivamente.
F. Crick

Premio Nobel en
Medicina y Fisiología de
Watson 1962.
Doble hélice de ADN
Dos cadenas antiparalelas de
polinucleótidos formadas por
nucleótidos unidos por
enlaces fosfodiester y unidas
entre ellas por puentes de
hidrógeno.
-Cada cadena tiene una
columna externa constituida
por Desoxiribosa y fosfatos.
-La orientación de las
cadenas es antiparalela (3-5
y 5-3).
-Las bases nitrogenadas,
unidas al carbono 1 de la
Desoxiribosa, se unen en la
región interna de la doble
hélice mediante puentes de
hidrógeno.
-Las cadenas son lineales.
Características:
-Diez pares de bases por vuelta (3.4 nm)
-Distancia entre bases: 0.34 nm)
-El eje de la hélice pasa por los puentes de hidrógeno.
-Presencia de SURCOS: Menor (1.2 nm) y Mayor (2.2 nm).
-2 puentes de hidrógeno entre A-T y 3 entre C-G. (estabilidad de la cadena)
Bases Nitrogenadas

Purinas:
Adenina y Guanina

Pirimidinas:
Citosina y Timina

Apareamiento
de una purina
con una
pirimidina
El código Genético: Un lenguaje de 4 letras y
aproximadamente 20 palabras y miles de
párrafos

ADN Proteínas
ADN como portador de la información genética
¿Que tipo de información está codificada en el ADN?
¿De que manera de traduce esa información?

Replicación: Copia del ADN

cromosómico o de ARN progenitor
ADN para formar moléculas de ADN o
ARN hijas, respectivamente, con
Transcripción secuencias idéntica a la parental
Transcripción
Reversa Transcripción: Reproducción
precisa en forma de ARN de parte
del mensaje genético contenido
ARN en el ADN.
Transcripción reversa: Formación
de ADN a partir de ARN
(retrovirus)
Traducción
Traducción: síntesis de proteínas,
con una secuencia específica de
Proteína aminoácidos, sobre la base del
emnsaje genético codificado por
el ARN
REPLICACIÓN DEL ADN
El código Genético: Un lenguaje de 4 letras y
aproximadamente 20 palabras y miles de
párrafos para formar un libro.

Libros Genes
 Secuencias de ADN que
contienen la
Genes información para
codificar un producto
génico.

Productos génicos: Proteínas y ARN estructurales y catalíticos.

Núcleo

En el caso de las proteínas, se requiere GEN

ARNt
de un intermediario, el ARNm y también Proteína
se requiere del ARNr y del ARNt para su ARNm ARNr
procesamiento hasta la formación del ARNm
producto.
ADN MATRIX
 Unidades de longitud para la molécula de ADN
-Debido a su carácter de doble hélice la longitud del ADN se expresa
en pares de bases (pb).
-1kb: 1000pb
-1Mb: 1000Kb: 1.000.000pb
-1Gb: 1000Mb: 1.000.000Kb: 1.000.000.000 pb

Cada célula humana diploide contiene 46

moléculas de ADN 46Mb, aprox. 5cm
Cada célula contiene 2 mt de ADN aprox.
Cada ser humano tiene 2 billones de células:
Equivale a:
100 vueltas a la tierra
7000viajes a la luna (ida y vuelta, todo
incluido!!!)
13 viajes al sol ida y vuelta.
 GENOMA HUMANO
Cada individuo posee un GENOMA, aunque se
generaliza nombrando al Genoma humano.

La característica fundamental del ADN radica en su

secuencia de nucleótidos….es única para cada
individuo.

Conociendo la secuencia de bases del ADN

conoceremos los genes de cada individuo……su
GENOMA.

Sólo los gemelos idénticos comparten genoma. El resto

poseen pequeñas variaciones de 1 nucleótido
(Polimorfismos de una sola base: SNPs)…….Variación
James Watson, Abril 2003
de una enzima en mas del 1% de la población.

Existen 1.4 millones de SNPs…….1 por cada 2Kb de

secuencia: Gran variabilidad
 Genoma Humano
ADN

ADN Nuclear ADN Mitocondrial

(99.9995%) (0.0005%)

2 22 13
ARNr ARNt Proteínas

Génico Extra-Génico

Codificante No Codificante Bajas Medianamente Altamente

repeticiones o Repetitivo Repetitivo
(<5%) Copia Única

Proteínas Pseudogenes Fragmentos de Intrones

genes
35.000 genes (menos del 5% del genoma nuclear):
23.2%: Control de la expresión, replicación y mantenimiento del genoma.
21.1%: Transducción de señales.
38.2%: Sistemas de transporte, plegamiento de proteínas, elementos
estructurales.
17.5%: Funciones bioquímicas generales de la célula
Gen de la proteína
Tripsinógeno

ADN codificante

Segmentos de ADN que

tienen su
correspondencia la
secuencia de aa
ininterrumpida del
tripsinógeno.

EXONES
Los genes son El tamaño promedio de un gen humano es
discontínuos: de 27.000pb, pero basados en el código
genético (3pb:1aa) son necesario sólo
Poseen EXONES e 1.200pb para codificar una proteína
promedio de 400aa. Exones e intrones.
INTRONES

Glu- Glu- Glu- Glu-Glu- Glu- Secuecia de aa: 6 aa

CAG-CAG-CAG-CAG-CAG-CAG Secuecia de ADN: 6 codones

Esta relación no se cumple

Glu- Glu- Glu- Glu-Glu- Glu- Secuecia de aa: 6 aa

CAG-CAG-CAG-CCC-CCC-CCC-CAG-CAG-CAG Secuecia de ADN: 9

codones
 Núcleo
GEN
Proteína
ARNm
ARNm

Gen (TRY4) del Tripsinógeno 30-40Kb

Pre-ARNm

ARNm
Exon

Tripsinégeno Intron
 El procesamiento del ARN puede no ser tan directo:
Procesamiento Alternativo (Splicing)
Exon 1 Exon 2 Exon 3 Exon 4

Pre-RNA

RNAm 1 Proteína
1

RNAm 2 Proteína
2

RNAm 3 Proteína
3
 Genoma Humano
ADN

ADN Nuclear ADN Mitocondrial

(99.9995%) (0.0005%)

2 22 13
ARNr ARNt Proteínas

Génico Extra-Génico

Codificante No Codificante Bajas Medianamente Altamente

repeticiones o Repetitivo Repetitivo
(<5%) Copia Única

Proteínas Pseudogenes Fragmentos de Intrones

genes
ADN Génico NO CODIFICANTE
No expresado

Pseudogenes: Son genes afuncionales. Pueden

considerarse elementos resultantes de la evolución del
genoma (el cual está sufriendo cambios continuamente).
Productos de mutaciones.

Fragmentos de Genes: son aquellos genes que han perdido

parte de sus extremos.

Genes truncados: Pequeñas regiones aisladas del interior de

los genes.

Intrones: Secuencias intragénicas no transcritas…Se

encuentran entre los exones, los cuales corresponden a
los segmentos del gen que si posee la información que
será traducida a proteína.
 ADN Nuclear

Extra-Génico
Génico

Bajas Medianamente Altamente

repeticiones o Repetitivo Repetitivo
Copia Única

Dispersos TANDEM Satélite:

Responsable del No codificante: Centrómero
control de la Función
Expresión desconocida Hasta 171 pb
100kb-MG

SINES LINES
(alu) Grupos Mini Satélite: Micro Satélite:
de Telómero Repartido
Genes:
6-24 pb 1-4 pb
RNAr
SINES: Elementos Nucleares Dispersos Cortos 0.1-20Kb Menor de 150pb
LINES: Elementos Nucleares Dispersos Largos
 ADN repetitivo….elementos móviles
Aproximadamente entre el 60 y el 64% del genoma humano
está constituido por regiones intergénicas. Función
desconocida..ADN basura?

Tipos
Medianamente
Repetitivo

Dispersos TANDEM

Dispersas: Una secuencia específica se repite n veces a lo largo del

genoma en forma aparentemente aleatoria. Ejemplo: LINES, SINES, LTRs y
Transposones.
-----CATGATTA------/-----CATGATTA------/-----CATGATTA------/------

TANDM o grupos: Secuencias de longitud variable que se repiten en

grupo. Ejemplo: ARNr, Microsatélites, minisatélits.
-------CAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAG---------
 Elementos móviles

Elementos Móviles

Estas secuencias son copiadas e insertadas en un nuevo sitio del

genoma mediante un proceso denominado “trasnsposición”.

Estos elementos siguen transponiendose (generándose) y pueden ser

la causa de enfermedades genéticas, mutaciones de novo, variabilidad
genética.

1 cada 200 nacimientos

LINES “Long interspersed element” (Elementos interdispersos largos):
Fragmentod de ADN de gran tamaño repetidos miles de veces en todo el
genoma. En el humano, lo LINES tienen entre 6.000-8.000pb y se
repiten 850.000 de veces. Representan aproximadamente el 21% del
genoma.

SINES “Short interspersed element” (Elementos interdispersos cortos):

Fragmentos de ADN cortos repetidos millones de veces en todo el
genoma. En el humano, lo SINES tienen entre 100-300pb y se repiten
1.5 millones de veces. Representan aproximadamente el 13% del
genoma. Ejemplo: Secuencia ALU.

¿ Cual es la importancia biomédica de las

secuencias ALU ?
 Importancia biomédica de las secuencias ALU

1.- Evolución.

El fenómeno de TRANSPOSICIÓN juega un rol fundamental en la

plasticidad del genoma.

Causa rearreglos cromosómicos, inserciones de ADN, mutaciones por

deleciones, etc. ESTE PROCESO CONTRIBUYE A LA EVOLUCIÓN, en el
caso de que el rearreglo tenga un efecto POSITIVO sobre el fenotipo.

¿ Cual podría ser el efecto NEGATIVO de la transposición ?

 Importancia biomédica de las secuencias ALU

2.- Mutaciones

Neurofibromatosis. Aparición de
tumoraciones no malignas en el
trayecto de los nervios.
Autosómica dominante producida
por el gen NF1.

Margaret Wallace y col., (Nature

1991) reportaron la inserción de
una secuencia ALU en el gen de
NF1, la cual causó la deleción del
exón 5 del gen. Esta mutación fue
de novo……
La retrotransposición está
ocurriendo actualmente en
la línea germinal humana.

Kazazian y col., 1988. Hemofilia de novo

Importancia biomédica de las secuencias ALU

3.-Medicina Forense:

Las secuencias ALU se utilizan para identificar ADN humano.

 Tipos
Medianamente
Repetitivo

Dispersos TANDEM
LINEs SINEs

Bicicleta tipo tandem

Los genes de los ARNr (28s, 18s, y 5.8s) están repetidos más de
250 veces. Se encuentran 5 grupos de 50 genes. Están repartidos
en los brazos cortos de los cromosomas 13, 14, 15, 21 y 22.

El gen del ARNr 5s está repetido cientos de veces. Se han encontrado

tres grupos de más de 100 copias cada uno en el cromosoma 1.

Gran expresión de los ARNr….bajo el bajo control

NOTA: Las secuencias que codifican los diferentes tipos de ARN son genes. Fueron
clasificados como “extragénicos” sólo para facilitar la explicación de las secuencias
repetitivas del ADN.
 TAMAÑO vs COMPLEJIDAD del genoma.
Genoma No. de Genes
HUMANO 3.200Mb 35.000
HONGO 12.1Mb 5.800

Si el tamaño genoma fuese proporcional al No de genes el hongo

debería tener sólo 132 genes, sin embargo, tiene 5.800 genes.

El genoma del hongo es más compacto, más denso.

Hongo Mosca Humano

Densidad génica 479 76 11
Intrones x Gen 0.004 3 9
DNA repetitivo (%) 3.4 12 44

El grado de complejidad del organismo es inversamente proporcional

al empaquetamiento del genoma.

El genoma del hongo es más compacto, más denso.

¿La molécula de ADN sigue este patrón ordenado para
almacenar los diferentes tipos de secuencias?

Secuencias
de control

N O Genes

LINES

SINES
Resumen de las Características Generales del Genoma
Humano (Nuclear)
-Sólo un pequeño porcentaje (<5%) codifica para proteínas o ARN
estructurales y catalíticos)

-Gran parte del genoma (45%) está formado por elementos móviles:
LINES, SINES, Transposones.

-Los genes son grandes y discontinuos. Presencia de Exones e

Introenes.
-Existe una proporción importante del genoma que se encarga del
control de la expresión del AND codificante. Determinan el tiempo,
espacio y magnitud de la expresión.

El genoma no es compacto y es
altamente desordenado
 Representación
esquemática del
genoma humano

Secuencias
repetidas:
LINES
SINES

Intrones

Control de la
transcripción

Genes
 Genoma Humano
ADN

ADN Nuclear ADN Mitocondrial

(99.9995%) (0.0005%)

2 22 13
ARNr ARNt Proteínas

Génico Extra-Génico

Codificante No Codificante Bajas Medianamente Altamente

repeticiones o Repetitivo Repetitivo
(<5%) Copia Única

Proteínas Pseudogenes Fragmentos de Intrones

genes
Genoma Mitocondrial

¿ Por qué las mitocondrias tienen su propio genoma?

Hipótesis: Las mitocondrias evolucionaron de células

prokariotas que fueron endocitadas por células
eukariotas primitivas y se desarrollaron en simbiosis.

¿ Cómo se organiza el genoma mitocondrial ?

Una sola molécula de ADN circular de 16659pb localizada
en la matriz mitocondrial.
Cientos de miles de copias por célula.
Productos génicos mitocondriales (37):
-13 proteínas (componentes del sistema de fosforilación
oxidativa)
-24 genes para el aparato de síntesis proteica
mitocondrial (22 ARNt y 2 ARNr)
 ADN

ADN Nuclear ADN Mitocondrial

Nuclear Mitocondrial
Cadena Doble hélice lineal Doble hélice circular
No. de genes 35.000 genes 37 genes
Tamaño 3.200Mb 16.6 kb
ADN 3-5% 93%
codoficante
Asociado a Si: Histonas, forma cromatina No asociado a proteínas, no
proteínas forma cromatina
Froma Si. 46 por cada núcleo diploide No. Cada célula tiene múltiples
cromosomas copias de la molécula de ADNmt.
Intrones Si No
Herencia Materna y paterna. Materna
Susceptibilida Menos susceptible a Más susceptible a Mutaciones
d Mutaciones
Código AUA: Isoleucina AUA: Metionina
genético AGA-AGG: Arginina AGA-AGG: STOP.
UGA: STOP. UGA: Triptófano
% codificante 5% 65% (24 de 37)
para ARN
 Los componentes proteínicos La mitocondria depende de
constituyentes de la cadena proteinas codificadas por el
oxidativa son 80…pero la genoma nuclear para
mitocondria codifica sólo 13 garantizar sus funciones

La mitocondria no
exporta sus
productos génicos

El ADNmt tiene mayor susceptibilidad a sufrir mutaciones

-La mitocondria no dispone de sistemas eficientes de reparación.
-El ADNmt no está asociado a proteínas Histonas, por lo que podría
estar menos protegido.
-El ADNmt está en la matriz mitocondrial, donde se produce gran
cantidad de radicales libres como productos secundarios de la
fosforilación oxidativa.

LOS POLIMORFISMOS ACUMULADOS EN EL ADNmt SONN HASTA 17 VECES

MAYORES QUE AQUELLOS ENCONTRADOS EN EL ADN NUCLEAR
Pero, ¿ cuan importante podría ser la mutación del ADN de una mitocondria,
si la célula tiene miles de mitocondrias?

La mutación en el ADN de una mitocondria puede no acarrear

modificaciones fenotípicas. Sin embargo, cuando se supera un
umbral determinado ( 60% de mitocondrias con la misma mutación)
se pueden presentar alteraciones fenotípicas directamente
proporcionales al número de mitocondrias mutadas.

Los órganos más afectados son aquellos que necesitan gran

consumo de energía: Corazón, cerebro, músculo)

Sólo para el gen del CytB se han descrito 9 mutaciones

Enfermedades producidas por mutaciones en el ADN mitocondrial

 Ejemplo de enfermedades producidas por
mutaciones en el ADN mitocondrial
MELAS: (miopatía mitocondrial con encefalopatía, acidosis láctica y
episodios similares al ictus). Se debe a una disfunción el complejo I de
la cadena respiratoria mitocondrial debida a un cambio de bases en el
par 3243 de la cadena pesada

MERRF: (epilepsia mioclónica, fibras rojas deshilachadas): se debe

sobre todo a una mutación del gen que codifica el t-ARN de la lisina
por un cambio de bases en la posición 8344 de la cadena pesada. Este
cambio produce una disfunción del complejo V de la cadena
respiratoria

NARP (neuropatía, ataxia, retinitis pigmentaria): se debe a una

mutación del gen que codifica el complejo V de la cadena respiratoria
(ATP-asa 6)

LHON (neuropatía hereditaria de Leber): se debe a multiples

mutaciones en los genes que codifican el complejo I (NADH-
deshidrogenasa)
Las mutaciones presentes en el ADNmt materno pasan a la prole,
mientras que las variaciones del ADNmt paterno no lo hacen.

Mit
ocond
rias Cigoto

as
ondri
Mitoc

Ambos sexos se pueden ver afectados por la mutación y expresar

el fenotipo, pero se transmite la mutación sólo a través de la
madre, es decir, se transmite cuando la madre es portadora de la
mutación mediante un fenómeno de HETEROPLASMIA.
Transmisión de las mutaciones mitodcondriales
Ejemplo: Suponiendo que se necesite el 60%
Mitocondria Normal
de las mitocondrias con la mutación para
expresar el fenotipo. Mitocondria Mutada

Gameto con 50%

Homooplásmica

Individuo SANO
Distribución

50%

Individuo SANO

Gameto con 75%

Individuo
Heteroplásmica

50%
Distribución

AFECTADO

Individuo SANO

Gameto con 25%

 ¿Cómo se organiza físicamente el ADN?
El genoma nuclear lo constituyen largas moléculas lineales de ADN
que se localizan en los CROMOSOMAS

Las células diploides

tienen 23 pares: 46
cromosomas.
Cada cromátida
contiene 1 molécula
de ADN de
aproximadamente
1.5 a 5cm

NOTA: estos son cromosomas metafásicos o mitóticos.

 Condensación
ADN Cromatina Cromosoma
Cromatina: ADN asociado a proteínas (histonas y no histonas)

El grado de condensación se refiere a la relación enxistente

entre la longitud de la molécula de ADN antes y después de
sufrir el proceso de condensación.

Ejemplo: el cromosoma 1 mide sólo

5μm pero contiene una molécula de 5000.000
= 100.000
ADN de 5cm (500.000μm) 5
aproximadamente.

El grado de condensación del ADN puede legar a ser

de hasta 100.000
Grados de condensación de ADN

- +
Primer grado de condensación: El Nucleosoma.
 NUCLEOSOMA
Unidad básica elemental de la cromatina y los cromosomas,
constituidos por un patrón regular de asociación del ADN con las
proteínas Histonas, principal componente proteico del material
genético en eucariotas.

Nucleosomas

Microfotografía
electrónica

Generalmente se considera el nucleosoma

como el segmento de ADN directamente
relacionado con el núcleo de histonas
Constituido por 8 histonas y un
segmento de ADN de 200pb.

El segmento de 146 pb del ADN da

1.6 vueltas alrededor de un núcleo
de Histonas, mientras que las
restantes 54pb conectan con el
siguiente nucleosoma.

Cociente de Condensación = 6
 HISTONAS

Núcleo
octamérico

Las histonas tienen gran

cantidad de Arginina y Lisina
(aminoácidos básicos)

Se facilita la interacción con

Histonas H2A, H2B, H3 el ADN (acido).
y H4 forman el núcleo
octamérico de Histonas
La interacción
entre el ADN y el
núcleo de histonas
no es estática.
Puede ser
modificada por la
MAQUINARIA
REMODELADORA
DE LA CROMATINA

Ejemplo: Enzimas
Acetilasas y
Desacetilasas de
histonas: Unen o
quitan grupos acetil
a aminoácidos como
la Lisina.

PERMITE LA INTERACCIÓN CON COMPLEJOS PROTEICOS

QUE PARTICIPAN EN LA REPLICACIÓN, REPARACIÓN Y
CONTROL DE LA EXPRESIÓN.
Constituido por 8 histonas y un
segmento de ADN de 200pb.

El segmento de 146 pb del ADN da

1.6 vueltas alrededor de un núcleo
de Histonas, mientras que las
restantes 54pb conectan con el
siguiente nucleosoma: Segmento
conector.

Cociente de Condensación = 6
Grados de condensación de ADN

- +
Segundo grado de condensación: EL SELENOIDE.
 Selenoide

Nucleosomas

La fibra de 11nm se enrolla en sentido levogiro dando lugar a una

estructura más condensada.
Contiene 6 nucleosomas por vuelta.
La HISTONA H1 es necesaria para su formación.
Cociente de condensación:40
LA HISTONA H1 PARTICIPA EN LA FORMACIÓN DEL SELENOIDE
Las colas de las histonas
tamién juegan un papel
fundamenta: Interaccionan
con nucleosomas vecinos
(ADN e Histonas)

El grado de compactación del selenoide es variable y

determina la accesibilidad al ADN
 Tercer grado de condensación del ADN: Cromatina
o cromosoma interfásico

Formación de lazos de
superenrollamiento del
selenoide.
Cada lazo está formado
por 50-100 kb.
Generalmente hay un
gen en cada lazo.
Grado de
condensación: 50.000

Participa una
Proteína
Nuclear de
Andamiaje.
La cromatina en la interfase puede tener grados variables de
condensación

Eucromatina:
-Forma menos condensada.
-Mayoritaria en la interfase.
-Contiene genes que se expresan constitutivamente.
-Es accesible a las enzimas ADN y ARN polimerasas, factores
de transcripción, etc.

Heterocromatina:
-Forma más condensada.
-Minoritaria en la interfase.
-Constitutiva (centrómero-telómero) vs Facultativa (genes)
Tinción de Klüver-Barrera
Corteza cerebral de rata

Heterocromatina

Eurocromatina
 ADN
(1)

Nucleosoma (6)

Selenoide
(40)

GRADOS DE
CONDENSACIÓN Cromatina o
Cromosoma
DEL ADN
interfásico
(50.000)

Cromosoma
Metafásico
(100.000)
4to. Grado de condensación: El CROMOSOMA METAFÁSICO
Mayor grado de condensación: 100.000 veces.
 -Centrómero
Elementos básicos
estructurales y funcionales -Telómeros
de los cromosomas -Orígenes de Replicación

Centrómero: Región del cromosoma mitótico en el cual

están unidas las cromátidas hermanas. Está formado por
secuencias repetitivas (ADN Satélite) aproximadamente de
171pb repetidas en tandem hasta alcanzar 0.9-1.2Mb.
También se conoce como ADN alfoide.
Se asocia a un complejo multiproteico llamado Kinetoforo, el
cual permite la propulsión de los cromosomas hacia las
células hijas al final de la mitosis.
Telómeros: Región final de los cromosomas. Formado por
secuencias de ADN repetitivas dispuestas en TANTEM (ADN
minisatélite). Secuencias de TTAGGG (T2AG3) repetidas de 0.1
a 20kb.
-Permite la correcta replicación de las moléculas de ADN.
-Protege el cromosoma de daños producidos por los sistemas
de reparación del ADN. Evita ser confundido con una cadena
de ADN rota…..ESTABILIDAD DEL ADN.
-Localización de los cromosomas dentro del núcleo.

Orígenes de replicación: Zonas de la molécula de AN

donde comienza el proceso de replicación del ADN. Hay varios
orígenes de replicaión por cada cromosoma.
 ESTABILIDAD DEL GENOMA HUMANO.
MUTACIONES

Mutación: Alteración de la secuencia del ADN de un

individuo que se transmite por herencia a su descendencia

mutación
ADN nativo ADN alterado
Todo el genoma es susceptible de sufrir mutaciones

Endógenas Exógenas
Errores de replicación Agentes químicos
Errores de recombinación Agentes físicos (radiaciones)
Reparación inapropiada del ADN Agenets biológicos
Depurinación de nucleótidos
Deaminación de bases Nitrogenadas
Transposones y Retrotransposones
Tipos de Mutaciones

Transiciones y Transversiones
Sustitución Silentes y no Silentes
Sustitución de
bases Eventos de Conversión Génica
(sustitución de múltiples bases)

De uno o pocos nucleótidos

Inserciones Expansión de tripletes
Grandes inserciones

Deleciones De uno o pocos nucleótidos

(Pérdida o eliminación) Grandes Deleciones

Anormalidades Numéricas
cromósómicas Estructurales
 Transiciones y Transversiones
Sustitución silentes y no silentes
Sustitución de
bases Eventos de Conversión Génica
(sustitución de múltiples bases)

Transiciones: Cuando una base púrica (A-G) se

sustituye por otra base púrica (A-G) o cuando una
base pirimidínica (C-T) se sustituye por otra base
pirimidínica (C-T)
Ejemplos:

Purinas Pirimidinas
A G C T

G A T C
Transversión: Cuando una base púrica (A-G) se
sustituye por una base pirimidínica (C-T) y
viceversa.

Ejemplos: (8 posibilidades)

Purinas Pirimidinas
A T T G

A C T A

G T C A

G C C G
Las sustituciones (además de las deliciones y las inserciones)
pueden tener o no efecto sobre el producto génico: Mutaciones
Silentes y No silentes.

Silencionsas: El cambio de un nucleótido del triplete

no modifica el amionoácido codificado. También
llamadas sinónimas, neutrales o con sentido. Sólo
las sustituciones pueden producir mutaciones
sinónimas.

ADN nativo ADN mutado

AGA AGG

Arginina Arginina

NOTA: recordar que un aminoácido puede ser codificado por más

de un codón. CCC, CCU, CCA y CCG codifican para el aa prolina.
Posibilidades de Mutaciones SILENTES o SINÓNIMAS

Amnoácidos Codónes
ACA
Treonina ACC Tercera letra
dif.
ACG
CTA
Leucina La primera letra
dif.
TTA
AGA
Arginina La primera letra
dif.
CGA
 No Silentes: El cambio de un nucleótido del triplete
modifica el sentido (amionoácido) o el marco de lectura
codificado. También llamadas mutaciones no silenctes, o
con sentido falso, alterado o equivocado.
Alteración del sentido: Cambio del aa codificado

ADN nativo ADN mutado

GAG GTG

Glutamato Valina

Hemoglobina Hemoglobina
normal
mutada

Anemia falciforme

El cambio de un solo aminoácido repercute sobre la funcionalidad de la

proteína
 NOTA: No siempre el cambio de una aminoácido
produce alteraciones funcionales de la proteína.
MUTACIONS NO SINÓNIMAS CONDICIONADAS

Ejemplo: El cambio de Aspartato por Glutamato,

dos aa con gran similitud. Sin embargo las
propiedades de la proteína se pueden modificar
dependiendo de las condiciones del medio
(variaciones del pH y de la Temperatura)

El cambio de un aminoácido en una región no activa de la

proteína podría NO alterar su función, regulación ni
localización: MUTACIONES NO SINÓNIMAS CONSERVATIVAS.
Las mutaciones no sinónimas o no silentes pueden además
CAMBIAR EL MARCO D LECTRUA

Marco de lectura

Recordar que se “lee”

de 3 en 3pb
 Mutaciones NO SINÓNIMAS sin sentido

Introducción de un codón de inicio, terminación o de

empalme inapropiados.

Codón Empalme Empalme Codón

de Inicio de Stop

Exon 1 Intrón Exon 2

GEN A formado por dos exones y un intrón

 Mutaciones NO SINÓNIMAS sin sentido

Introducción o eliminación de un codón de inicio,

terminación o de empalme inapropiados.

Codón de
Eliminación de las terminación
Codón secuencias de
de Inicio empalme (UAA, UAG, UGA)

Exon 1 Intrón Exon 2

Proteína acortada, alargada y que expresa un intrón.

TAMBIÉN SE PUEDE PRODUCIR UNA SECUENCIA ABERRANTE: Alteración

del marco de lectura
 Codón de inicio

Gen SUMA UNI UNO MAS UNO SON DOS STOP

Proteína 1 + 1 = 2

Nuevo codón de inicio: Mutación sin sentido

Cambio de UNI UNI MAS UNO SON DOS STOP

O por I
Proteína
Mutada + 1 = 2
 Alteración del marco de lectura por Deleciones e Inserciones

Codón de inicio

Inserción de una UNI UUN OMA SUN OSO NDO STOP

letra una letra

? ? ? ? ?
Proteína

Codón de inicio

Deleción de una
UNI NOM ASU NOS OND OSS TOP
letra una letra

Proteína ? ? ? ? ?
 No siempre se produce alteración del marco de lectura
por deleciones o inserciones

Gen SUMA UNI UNO MAS UNO SON DOS STOP

Proteína 1 + 1 = 2

Inserción o deleción
múltiplo de 3

Gen SUMAmut UNI UNO MAS SON DOS STOP

Proteína -1 aa 1 + = 2

Gen SUMAmut UNI UNO MAS UNO UNO SON DOS STOP

Proteína + 1 aa 1 + 1 1 = 2
Mecanismos de producción y reparación
de las mutaciones
1.-Errores durante la replicación del ADN. 1/109

REPLICACIÓN NORMAL

Siempre se replica
en dirección 5 al 3.
No se han
encontrado enzimas
que sinteticen ADN
en sentido 3 al 5.
 Replicación del ADN
Participan las siguientes enzimas: (Conducente o continua) Helicasa, ADN
polimerasa o (Retardada) Helicasa, Primasa, ADN polimerasa y Ligasa

5
3

5
3
Apareamiento normal de bases
 ¿ Que son las formas TAUTOMÉRIAS ?

Variaciones que sufren las bases nitrogenadas por migraciones

de un átomo de hidrógeno hacia una forma más inestable. Las
formas tautoméricas formar dupletes con otra base diferente a
la que normalmente le corresponde.

Forma Adquiere
Aparea Par normal Par
Tautoméric propiedade
con Anormal
a s de

A* (imina) G C A T A* C

G* (Enol) A T G C G* T

C* (Imina) T A C G C* A

T* (Enol) C G T C T* G

Se produce una distorción de la doble hélice

 Formas tautomérias
Cambio espontáneo y Reversible

La ADN Polimerasa realiza

3 CORRECCIONES DE
PRUEBA (proofreading)

Forma enólica 1.- Cuando el nucleótido se

Timina de timina une por primera vez a la
enzima.

2.- Cuando el nucleótido se

une al sitio activo.

3.- Cuado el nucleótido se

Forma enólica de
Guanina guanina
ubica el extremo 3`del
polinucleótido que se está
sintetizando.
La ADN Polimerasa posee actividad
exonucleasa 3 al 5… 3ª Correctora de prueba
Despurinación de Nucleótidos: Implica la ruptura del enlace
glucisídico entre la base y la desoxiribosa y la pérdida posterior de
un residuo de guanina o adenina del DNA, con la formación de un
sitio AP (abásico)

Una célula de mamífero pierde de forma espontánea alrededor de

10.000 purinas de su DNA durante un tiempo de generación de 20
horas a 37ºC.

ES EL DAÑO MÁS FRECUENTE QUE PUDE SUFRIR

EL ADN: 10.000 purinas por ciclo celular
Producido por ROS, Rayos X y gamma

El problema está si no se repara: Cualquier base se

puede aparear. La siguiente replicación originaría la
mutación.

El mecanismo de reparación consiste en la

Corrección DEL SITIO AP
 ADN con sitio
DESPURINADO
Mecanismos de
Reparación:

AP endonucleasa y Excisión de Base

Exonucleasa
El sitio AP es
reconocido por
la AP
edonucleasa

ADN polimerasa y
ADN Ligasa
Desaminación de bases. Pérdida de un grupo amino de las bases
nitrogenadas. Causadas también por ROS
Desaminación de bases. Apareamiento anormal de las bases
desaminadas

Base
Base Aparea
Desamina
Normal con
da
A Inosina C
G Xantina T
C U A
5-metil C Timina A
No se
T
desamia

U
A Mutación
C U T
C T
G G A
C
G
 I
Mutación
C
A I G A G

T T C
A
T

X
T
G X A Mutación
G A
C C T
G
C
 Mecanismo de reparación de la Desaminación: Excisión de base.
Participan las enzimas Glicosidasas de ADN

Normal Desaminada Enzima

Inosina ADN
A Inosina
Glucosidasa
Xantina ADN
G Xantina
Glucosidasa
Uracilo ADN
C Uracilo
Glucosidasa
5-metil C Timina No tiene

Cada Nucleótido Desaminado es Algunas bases C están metilados: 5-

reconocido un enzima
GLUCOSIDASA específica, la cual
lo reconoce y lo escinde
metil-Citosina. Los nucleótidos 5-metil
citosina desaminados (Timina) NO SON
RECONOCIDOS COMO ANORMALES ya
que la timina es estructuralmente
normal
 Rompen el enlace glicosídico generando una desoxiribosaabásica

¿ En que consiste el mecanismo ?

Creación y reparación de un sitio abásico

El mecanismo consiste en producir un Stio AP: Excición de bases.

 Producción del
sitio abásico
Base
DESAMINADA Los sitios AP
Reparación de la Desaminación

pueden ser
producto de la
Uracil ADN
Glicosidasa Enzima reparadora
Excisión de Base

o pueden ser por

agentes dañinos
Base
DEPURINADA
La AP endonucleasa
reconoce los sitios AP
Reparación del sitio

AP endonucleasa y
Exonucleasa
Corrige bases
abásico

Desaminadas

ADN polimerasa y
ADN Ligasa
 Las enzimas Glicosidasas son muy
Uracil ADN específicas: Para Uracilo, Xantina,
Glicosidasa Hipoxantina.

NOTA IMPORTANTE:

Si el ADN tuviese Uracilo en vez de Timina NO

SE PODRÍAN CORREGIR LAS DESAMINACIONES
DE CITOCINA
Recordar que Citocina desaminada = Uracilo

Los nucleótidos 5–Metil Citocina se desaminan a 5–Metil Uracilo,

pero estos no son reconocidos por la glicosidasa. Potencial peligro
de mutación en secuencias donde esté metilada la citocina
 Dímeros de Pirimidinas
Producidos por LUV
Bases Oxidadas
Poducidas por ROS
Endonucleasa

Helicasa

ADN polimerasa y
Mecanismo de reparación:
ADN Ligasa
EXCISIÓN DE
NUCLEÓTIDOS
 Agentes alquilantes
D AÑO AL ADN Agente
alquilante
Transferasas: Enzimas muy
específicas para cada molécula
y nucleótido

Nucleótidos CH3
Modificados Enzima
ADN +
Covalentemente
MECANISMO DE REPARACIÓN

Metil-Guanina
Reversión Metil transferasa
directa del daño

CH3

Enzima
Eliminación de ADN +
residuo unido
mediante la unón
covalente a la
enzima
La enzima no se recicla
reparadora
 ROS ROS
D AÑO AL ADN

Rayos X Rayos X

Rayos Gamma Rayos Gamma

Desaminación Despurinación
(esto ya es un sitio abásico)
MECANISMO DE REPARACIÓN

Excición de Bases Excición de Bases

Producción del Sitio
abásico

Producción del Sitio AP

Corrección del Sitio AP

D AÑO AL ADN Agente
LUV Los sistemas anteriores
alquilante
están diseñados para
reconocer BASES
ALTERADAS
Dímeros de
Nucleótidos ESTRUCTURALMENTE.
Modificados
Pirimidinas
Covalentemente
MECANISMO DE REPARACIÓN

Excición de Corrección Son incapaces de

Nucleótido Directa
reconocer errores del
apareamiento ya que
son bases sin
Eliminación de la Transerencia
del grupo anormalidades
Secuencia
quimico a la estructurales
mutada
Transferasa
Síntesis de la
Secuencia
mutada
 Reparación de las bases mal apareadas

La primera dificultad está en reconocer cual de las dos hebras es

la parental, es decir la ORIGINAL.

Si se reconoce la hebra hija como parental la mutación

perdurara
M M

M M

Sólo debe repararse la hebra hija

M M M

M M M

¿ Como reconocer la hebra parental de la hebra hija ?

 La metilación de ADN se realiza en secuencias específicas CATG
Enzima: Hemimetilasa de ADN

C A T G

G T A C
M
M
C A T G La metilación de la
hebra hija es
G T A C retardada, por lo que
M se puede diferenciar
M por pocos minutos la
C A T G hebra hija de la
parental
G T A C

M
El proceso de reparación de la bases mal apareadas lo inician las
proteínas MutS y MutL
Mal apareaiento
M M

S
M M

2
L

Actividad
Endonucleasa
S
M M

3 L
 Bases mal apareadas (continuación)

M M

Helicasa
Exonucleasa
M M

ADN Polimerasa
+ ADN Ligasa

M M

M Segmento reparado y metilado M

Otras sustancias que causan daños al ADN

5-Bromuro de Uracilo: similar a la timina pero con un

átomo de Bromo. Se aparea con Guanina. Produce
transiciones de T-C.

BU

BU A

G
T BU
C
A A
A
G
T
Tipos de Mutaciones

Transiciones y Transversiones
Sustitución Silentes y no Silentes
Sustitución de
bases Eventos de Conversión Génica
(sustitución de múltiples bases)

De uno o pocos nucleótidos

Inserciones Expansión de tripletes
Grandes inserciones

Deleciones De uno o pocos nucleótidos

(Pérdida o eliminación) Grandes Deleciones

Anormalidades Numéricas
cromósómicas Estructurales
 Inserción-Deleción en secuencias repetitivas
Deslizamiento de la ADN Polimerasa durante la Replicación del ADN

5
3

5
3
 El
deslizamiento
puede ocurrir
tanto en la
hebra molde
como la hebra
nueva

Lazo en
Lazo en hebra molde
hebra hija

Replicación
Inserción Replicación
Deleción
 Las secuencias microsatélites y pequeñas secuencias en
tandem son puntos calientes para deleciones e insercions.

GCC ATT TTT GGC CTT

Deleción de un T Fibrosis
en el gen CFTR Quística

GCC ATT TT G GCC TT

GAT TCT TAT CTT ATG ACC Deleción de la

secuencia CTTAT Xerodermia
del gen XPAC, no Pigmentosa
múltiplo de 3

GAT TCT TAT G ACC

 Expansión de Tripletes CAG
5 3
CAG CAG CAG CAG CAG CAG CAG CAG n: 8

GTC GTC GTC GTC GTC GTC GTC GTC n: 8

3 5
CAG
Deslizamiento de la

CAG
hebra hija
CAG

Polimerasa
5 3
CAG CAG CAG CAG CAG n: 11

GTC GTC GTC GTC GTC GTC GTC n: 8

El desplazamiento de la ADN Polimerasa forma un loop

(lazo) de la hebra hija y luego continúa la síntesis de ADN

El loop se estabiliza hasta la siguiente replicación

produciendo: Inserciones de 3 tripletes CAG
 Enfermedad de Huntington New_htt.avi

Normal CAG

Por encima de 37 repeticiones CAG en el gen de la proteína

Huntingtina se produce la Enfermedad de Huntington
Mutada CAG-CAG-CAG

Normal Huntington

Degeneración selectiva de las neuronas estriatales de proyección

Las secuencias de repeticiones CAG son muy inestables

A partir de un umbral de
repeticiones se producirá la
expansión o deleción de tripletes

Los gametos presentan casi en el

100% alteraciones con respecto a
las células germinales progenitora

En la enfermedad de Huntington ocurre expansión de

tripletes de Padre a Hijo, mientras que de Madre a hijo
es menos frecuente, e incluso puede ocurrir
acortamiento del segmento CAG
Recombinación General u Homóloga

Intercambio de material genético entre un par de secuencias

homólogas de manera recíproca.

Pueden ser cromátidas hermanas (replicas de la misma

molécula de ADN) o cromosomas homólogos (Dos cadenas de
ADN: materna y paterna)
Ejemplo de recombinación homóloga

Ambas cadenas de ADN

fueron modificadas
 Recombinación y Conversión Génica
Ejemplo de
Recombinación
Quiasma Homóloga

Ambas moléculas son

donante y receptor ya
que ocurre un
intercambio recíproco

Las secuencias donde

se forma el quiasma
cromosómico han de
poseer gran similitud
La secuencia de ADN donde se
unen ambas moléculas se
denomina HETERODUPLEX

Segmento con una

hebra materna y la
complementaria paterna
o viceversa
Formación del heteroduplex (Sinapsis génica). Comienza
produciendo una ruptura de la doble hélice. RecA

Síntesis de AN

Ruptura de la
doble hélice

Apareamiento
Endonucleas
a 5`limitada

Apareamiento
Resolución por
del corte y unión
cromosoma
roto con el
intacto
Síntesis de AN Modelo de Holliday de recombinación
homóloga

Unión de Holliday
Apareamiento

Resolución por
corte y unión
La recombinación
puede acarrear
mutaciones si ocurre
en secuencias génicas:
recombinación alélica
o intragénica: Produce
genes de fusión los
cuales pueden ser
afuncionales
 También puede producir deleciones e inserciones

Punto de partida: Alineación

incorrecta de las cadenas
de ADN involucradas en la
recombinación

Recombinación
homóloga desigual:
entre dos cromosomas
homólogos

Recombinación
homóloga desigual:
entre dos cromátidas
hermanas

Puede además ocurrir erroneamente entre dos cromosomas no

homólogos: RECOMBINACIÓN HETERÓLOGA
Aunque el fenómeno de Recombinación puede producir mutaciones
(deleciones e inserciones) participa además en procesos
fisiológicos:

-Aumento de la variabilidad genética (Al final de la meiosis cada

cromosoma posee genes paternos y maternos)

-Corrección de la ruptura de las hebras de ADN

-Corrección de daños durante la replicación (Interrupciones de la

ADN Polimerasa)
 Reparación de la ruptura de la DOBLE cadena de ADN

Secuencia
perdida

Exonucleasa
Molde del
cromosoma
homólogo
Ligasa
ATM
detecta la
doble
ruptura y
activa la
maquinaria
de RH
Unión por extremos no
homóloos

Unión por extremos homólogos

-Corrección de daños durante la replicación (Interrupciones de la
ADN Polimerasa)
Reparación Recombinatoria de la Replicación
La Conversión Génica es el proceso mediante el cual se
transfiere una determinada secuencia desde un locus/alelo
donante a una locus/alelo aceptor por un mecanismo parecido
al de la recombinación, de manera no recíproca.

Conversión
Recombinación
Génica

Ambas cadenas de ADN Sólo la cadena de ADN

fueron modificadas aceptora fue modificada
En la Reconversión Génica
también se forma un
heteroduplex, sólo que las
secuencias no son
totalmente idénticas (a
diferencia de la RH)

Es Necesario el empleo de
un mecanismo de
reparación del mal
apareamiento para que
ocurra la conversión.
 La Conversión
Génica rompe con
Célula con un par las reglas de la
de cromosomas segregación
homólogos
Alelo Pat. Alelo Mat.

Recombinación
homóloga

Zona de
reconversión
génica

50% 50%
 La Conversión
Génica rompe con
Célula con un par las reglas de la
de cromosomas segregación
homólogos
Alelo Pat. Alelo Mat.

Recombinación
homóloga

Zona de Reconversión
reconversión
génica

100%
 Conversión Génica como origen de mutaciones
Conversión inter-alélica Conversión inter-locus

Conversión Conversión
Génica Génica

Sólo la cadena de ADN

aceptora fue modificada Transferencia de una secuencia de
un locus a otro, por mal
apareamiento entre cromátidas
hermanos o no hermanas
 Conversión Génica como origen de mutaciones

Donante: Pseudogen Hiperplasia Suprarenal

CYP21A congénicta: Deficiencia de la enzima
Esteroide 21 hidroxilasa

Transferencia de una secuencia del

Aceptor: Gen
pseudogen CYP21A hacia el Gen
CYP21B
CYP21B. Esto ocurre de un locus a
otro, por mal apareamiento
Conversión (Recombinación desigual) entre
génica cromátidas hermanos o no
hermanas

Tanto el CPY12A como el CPY21B están flanqueados por

secuencias repetidas en Tandem, lo cual facilita el
apareamiento entre las cromátidas hermanas o no
hermanas
 Mecanismo de Corrección SOS

Utilizado cuando el daño del ADN es muy grande

y la célula no tiene ninguna alternativa

Mecanismo capaz de continuar la replicación incluso cuando la

hebra molde tiene anormalidades las cuales en condiciones
normales boquearían el proceso de replicación (sitios abásicos,
dímeros de timidina).

Dado que la hebra molde no es normal y hay

gran probabilidad de producir errores

Este sistema normalmente está Silenciado o reprimido por la

expresión continua del Represor LexA, el cual controla la
expresión de las polimerasas de la respuesta SOS

Existen proteínas que responden a situaciones de stress celular (calor,

agentes ROS) y activan los mecanismos SOS….la ATM y la p53
 Respuesta de la p53: Guardiana del genoma

Mecanismos:
-Modulación del ciclo celular (puntos de chequeo).
-Activación los mecanismos de reparación.
-Inducción de la apoptosis (si el daño es irreprable)
 Otros problemas relacionados a la Replicación:
CORTAMIENTO TELOÉRICO DE LAS MOLÉCULAS DE ADN

Durante la replicación se
emplean Primers de ARN ARN

5` 3`

Primasa

5` 3`
Acortamiento de la molécula de ADN produciendo un segmento
3`libre
Esto ocurre en los 2 extremos del cromosoma
La horquilla de replicación crece en dos sentidos
 Origen de replicación

Primer de ARN de la
hebra retardada
5 3

3 5
3
5
5

5 3
3 5

Los extremos 5 3
3`están 3 5
desapareados
5 3
3 5
El acortamiento se debe a que el final de los cromosomas lineales no
hay espacio para el primer de ARN del último fragmento de Okazaki
Acortamiento de los telómeros con cada replicación

TTAGGG
Al llegar al punto crítico la célula muere por activación de la P53…
…..Apoptosis

¿ Como evita la célula el acortamiento excesivo de los cromosomas?

 TELOMERASA
Ribonucleoproteína (Enzima ADN Polimerasa dependiente de ARN)

Encargada del alargamiento de los telómeros….en los segmentos

3`desapareados. Esta segmento es rico en “G”. TTAGGG

5` 3` TTAGGG TTAGGG TTAGGG 3`

3` 5` AATCCC AATCCC 5`

Tiene actividad de Transcriptasa Reversa: Sintetiza

ADN basado en una secuencia de ARN. La
secuencia de ARN es complementaria a la de los
segmentos desapareados. Secuencia del ARN:
AAUCCC
 Mecanismo de acción de la Telomerasa

Síntesis de ADN en el extremo 3`utilizando un molde de ARN

(AAUCCC)

1- Unión del ARN de la

enzima (molde) a parte
de la secuencia terminal
rica en G)

2.- Alargamiento del

extremo 3`del ADN

3.- Translocación de la
enzima: Se mueve hacia
el nuevo extremo
3`sintetizado
 Mecanismo de acción de la Telomerasa

1
3

Secuencia nueva
(alargamiento del 3`)
La activación de la telomerasa permite a las células germinales y
troncales (células madre) “no envejezcan” y se multipliquen
indefinidamente. Ejemplo: Células madre hematopoyéticas.

¿ En cual caso una célula somática presenta actividad de la

Telomerasa ?
El organismo ha de garantizar la presencia de células
madre durante toda la vida. “No envejecen”

Auto-renovación
 Las células tumorales “no envejecen”.
También presentan la Telomerasa activada.

Potenciales dianas para las patologías neoplásicas:

Cáncer.
Potenciales dianas para la inmortalización de líneas
celulares.

¿ Por qué escapan del envejecimiento las

células que presentan la telomerasa
activa ?

La activación de la p53 dependiente de los telómeros no

se da en las células tumorales ni las células madre ya
que los telómeros se mantienen largos.
 Estructura y función de los telómeros

Formación del
Lazo-T:Triple
hebra de ADN

Asociaión con
proteínas no
histonas TRF 1 y 2

Formación de la
caperuza
protectora

-Las zonas cercanas a los telómeros no se transcriben: Silenciamiento

génico (sólo organismos inferiores)
-Estabilización del ADN. Evita que el parte final de una molécula de ADN
sea identificada como una ruptura de la doble hebra.
-Mantiene los cromosomas en el núcleo
 Mecanismos de control de la expresión génica

Proteínas

Gen: Secuencia de ADN

que contiene la Productos Génicos
información capaz de
cofidificar un producto ARNr
génico. ARN
ARNt

ARNi

Genes tipo1 y tipo 3: Transcritos por la ARN polimerasa I y III

respectivamente. ARNr y ARNt

Genes tipo2: Transcritos por la ARN polimerasa II. ARNm para todas las
proteínas y para las RNP particiapantes en el splicing (snRNP).
 Estas dos células poseen la misma
información genética.
¿ Que hace la diferencia ?

La expresión génica es diferencial y/o específica,

temporo-espacialmente

La expresión génica se controla

cualitativa y cuantitativamente
 Mecanismos de control de la expresión génica

Control transcripcional Control de la traducción

Control del procesamiento del ARN
Control del transporte y
localización del ARN
Control de la estabilidad y
degradación del ARN
Control de la actividad de la
proteína
Control transcripcional

Hebra 5`-3`:
Tiene sentido (codifica)
No se traduce por la ARN
polimerasa
Hebra 3`-5`:
Antisentido (no codifica)
Se traduce por la ARN
polimerasa

CAG CAG CAG CAG CAG CAG CAG CAG CAG Hebra 5`-3`:

GTC GTC GTC GTC GTC GTC GTC GTC GTC Hebra 3`-5`:
ARN polim

CAG CAG CAG CAG CAG CAG CAG CAG CAG ARNm
Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Proteína
 Además de las secuencias codificantes existen secuencias no
codificantes que modulan la expresión……ELEMENTOS EN CIS

Promotores: Combinación de secuencias de ADN localizadas “río arriba”

(hacia el extremo 5`) inmediatamente al gen (200pb)

Componentes del Promotor: Región Proximal, Región central y Región

Distal del Promotor

Core o elemento central del Promotor: dirige el complejo basal de

transcripcón. Si no están presentes elementos reguladores, permite
la expresión constitutiva del gen.

Secuencias o elementos proximales: Modulan la transcripción basal.

Pueden ser POTENCIADORES o SILENCIADORES (modulan la
expresión basal iniciada por la región central)

Secuencias o elementos distales: aprox. 1Kb. Modulan la

transcripción basal en respuesta a estímulos externos.
-1000 -200 -50 +1 +50

Elem. Distal Elem. Core o elem. gen

o de proximal Central
respuesta

Potenciadores
o Silenciadores

1.-Ensamblaje de la
ARNpolimerasa con sus
Cada uno de estos Potenciadores: mediadores
elementos permite la Aumentan
interacción del ADN 2.-Atracción/repulsión, Unión,
Modificación
con proteínas que
(activación/desactivación) y
modifican o regulan la
actividad del Silenciadores: Posicionamiento en el
maquinaria Disminuyen promotor
transcripcional
 1.- Unión de TBP (proteína activara) a la caja TATA.
2.- Unión del FT TAF II y la ARN polimerasa al core del
promotor (INR).
3.- Inicio del proceso transcripcional
Modulación de la maquinaria transcripcional
por los elementos del promotor
 Remodelación de la cromatina
por parte de la maquinaria
transcripcional
La maquinaria transcripcional es
capaz de modificar la posición de los
nucleosomas y el grado de Metilación
del ADN y de Acetilación de las
histonas: Algunos factores de
transcripción se asocian con
Acetilasas o desacetilasas de histonas

Activa:
Acetilada y
desmetilada

Inactiva:
Desacetilada y
Abierta: Cerrada:
metilada
Inactiva
Activa
 El grado de metilación del ADN y de acetilación de las
histonas es uno de los principales mecanismos de control de
la expresión génica

Control Algunos patrones de IMPRONTA

epigenético metilación se heredan

Durante la
gametogénesis El alelo paterno será
Genes con
masculina el gen con silenciado, no se
impronta
impronta paterna es expresa, está
paterna
metilado IMPRONTADO

Durante la
El alelo materno será
Genes con gametogénesis
silenciado, no se
impronta femenina el gen con
expresa, está
materna impronta materna es
IMPRONTADO
metilado

Hacer un diagrama del “pedigree”de una gen

con impronta materna y uno con impronta
 Factores de transcripción básicos
1.- Unión de TBP (proteína activara) a la caja TATA.
2.- Unión del FT TAF II y la ARN polimerasa al core del
promotor (INR).
3.- Inicio del proceso transcripcional
-1000 -200 -50 +1 +50

Elem. Distal Elem. Core o elem. gen

o de proximal Central
respuesta

Potenciadores
o Silenciadores

1.-Ensamblaje de la ARNpolim
sus mediadores
Cada uno de estos Potenciadores:
elementos permite la Aumentan
interacción del ADN 2.-Atracción/repulsión, Unión,
Modificación
con proteínas que
(activación/desactivación) y
modifican o regulan la
actividad del Silenciadores: Posicionamiento en el
maquinaria Disminuyen promotor
transcripcional
Factores de transcripción basales: todos
los genes (constitutivos e inducibles)

Factores de transcripción regulables:

Genes inducibles.
 Factores de transcripción para genes regulables

Responden a estímulos externos

(hormonas hidrofílicas, hormonas
hidrofóbicas, neurotransmisores)

Cierre de Leucina

Clasificación Dedos de Zinc

Estructural

Hélice-giro-hélice

Hélice-lazo-hélice
 CREB (CRE-binding protein)

Factor de transcripción expresado constitutivamente, el

cual controla los genes regulados por el elemento de
respuesta CRE. Tipo: cierre de leucina.

CRE: Ciclic-AMP Response Element

PI3K/AKT PKA P38 MAPK CaMKII

CREB
 AP-1

Factor de transcripción de tipo cierre de leucina

Se une al elemento de Respuesta TRE
Dependiente de la PKC

AP-1 está formado por el dímero FOS/JUN. FOS y JUN

son genes inducibles dependientes de PKC
PKC

FOS/JUN
CREB P-CREB

Fos/Jun FOS/JUN
gen

Genes de respuesta
lenta

Tiroxina Hidroxilasa

NR1, GluR2, D2,

Neurofilamentos
Factores de transcripción activados por ligandos

Corresponde a receptores intracelulares (citoplasmáticos o

nucleares) con propiedades de factor de transcripción.

Corticoides

Esteroideos Andrógenos

Estrógenos-Progesterona.

Ligandos

Hormona Tiroidea
No Esteroideos Vit. D
Ac. Retinoico

Estructura: Dedos de Zinc. Homodímeros.

Factores de
Transcripción
activados por
Esteroides
EST
HSP70

Recep HSP90
Esteriodeo
EST
Inactivo

Activo
EST
Recep
Esteriodeo

Núcleo
 Mecanismo de acción anti-inflamatorio de los esteroides.

Inducción de la expresión de un inhibidor del NFKβ (un

factor de transcripción de genes pro-inflamatorios)

Esteroide
Receptor de
Esteroide IKβ2 NFKβ (gen pro-
inflamatorio)

Promotor del
gen del IKβ2
Factores de Transcripción
activados por ligandos no
Esteroideos
H. Tiroidea
Ac. Retinoco
H.T Inactivo
(monómero)
Recep
Hor.Tiroidea

Activo
H.T (heterodímero)

Recep
Hor.Tiroidea
Recep
Hor.Tiroidea

Núcleo
Procesamiento del ARN primario o nuclear: Maduración del ARN

5`guanosil transferasa +S- PoliA polimersa

adenosil metionina metil
transferasa
 Las modificaciones 5` 3`del ARN tienen como objetivo

Estabilidad de ARN (impide la acción de ARNasas)

Facilitan el transporte nuclear

Facilitan la traducción

Splicing de intrones

Eliminación de lo intrones empleando los PUNTOS DE AJUSTE

5`: G-ppp-X X X X AG GUAAGU CAG G X X X X A A A A A A A

 Modificaciones post-transcripcionales del ARN

Formación de la caperuza y la
cola PoliA
Pre-ARN o
Splicing de intrones ARN ARN maduro
núclear

Edición del ARN

Splicing de intrones

Eliminación de lo intrones empleando los PUNTOS DE AJUSTE

5`: G-ppp-X X X X AG GUAAGU A CAG G X X X X A A A A A A A

5`: G-ppp-X X X X AG G X X X X A A A A A A A- 3`
 Doble ataque nucleofílico
catalizado por snRNP

Short nuclear Ribonucleoproteins

Splicing alternativo

Permite generar diferentes proteínas a partir

de un único gen

Isoformas de una proteína

Especificidad de tejido, célula y/o

momento

Activado
El splicing
puede ser
modulado Desactivado
 El procesamiento del ARN puede no ser tan directo:
Procesamiento Alternativo (Splicing)
Exon 1 Exon 2 Exon 3 Exon 4

Pre-RNA

RNAm 1 Proteína
1

RNAm 2 Proteína
2

RNAm 3 Proteína
3
 Inserción

Edición del ARN inmaduro Deleción De nucleótidos del ARN

Sustitución

Se modifica la secuencia de nucleótidos del pre-ARN:

Cambio de aa, modificación de sitios de ajuste, modif. de sitio de
poliadenilación, cambio del marco de lectura

Ejemplo de sustituciones

Adenima Inosina GluR2: Cambio de 1 aa. Cambio

de la permeabilidad al Calcio

Citocina Uracilo Apolipoproteína: Aparición de una

secuencia de terminación
prematura
Uracilo Citocina
 La edición del ARN de la subnidad GluR2 (GluR-B) de los
receptores AMPA modula la permeabilidad selectiva al Calcio
Al igual que el splicing, la EDICIÓN del ARN permite que el
proteoma sea más complejo que el genoma.

Especificidad temporo-espacial (El % de ARN editado

difiere de célula a célula)
 Control de la localización del ARN

Transporte directo hacia el sitio específico: Necesita la asociación a

proteínas citosólicas (citoesqueleto)

Transporte por difusión aleatoria: Necesita proteínas que lo estabilicen

y lo protejan de ARNasas. Las proteínas Chaperonas o protectoras
estarán ubicadas en el sitio específico de traducción
 Regulación de la expresión mediante Proteínas que se unen a las
regiones URL

Se ha demostrado que los niveles de hierro modulan la expresión

de ferritina sin modificar la síntesis de su ARNm.

URL: Un-Translated Región

Modulación la traducción y/o la estabilidad del ARN
IRE-BP inactiva IRE-BP activa
(Mucho hierro: (bajo hierro:
Represor inactivo) Represor Activo)

Ferritina Ferritina

En auscencia del complejo La activación de la Aconitasa

Aconitasa-hierro se favorece (dependiente de hierro)
la traducción del ARNm inhibe la traducción del ARNm
IRE: Iron response element
 Estabilidad de ARN
odos los ARNm citoplasmáticos son susceptibles de ser degradados por
diferentes mecanismos

Desadenilación

Modulación por
elementos de respuesta
Mecanismos
de Ribozimas
degradación
del ARN
ARN antisentido

ARN de interferencia
 Desadenilación

Mecanismo: Remoción secuencial de la cola poliA y de la Caperuza 5`

75

Cuando se
alcanza el
umbral de 30
A, el ARNm se
30
hace
susceptible a
ARNasas
 La estabilidad del ARNm puede ser modificada por señales
extracelulares, a través de elementos de respuesta

IRE-BP inactiva IRE-BP activa

(poco hierro: (mucho hierro:
Protector inactivo) Protector activo)
Receptor de
Transferrina

En auscencia del complejo La activación de la Aconitasa

Aconitasa-hierro se favorece la (dependiente de hierro) protege el
degradación del ARNm, lo que ARNm de la degradación, lo que
disminuye su expresión favorece su expresión

NOTA: El complejo Aconitasa-hierro representa el ejemplo típico de

mecanismo post-transcripcional control de la expresión génica en
respuesta a estímulos externos (concentración de hierro)
Es interesante recordar que los niveles de Hierro modulan la expresión de
la Ferritina y del receptor de Transferrina por mecanismos diferentes
+ Recp. Transferrina (por disminución de la degradacion del
ARNm)
Hierro

- Ferritina (por inh. de traducción del ARNm)

 Ribozimas
Molécula de ARN cuya secuencia y estructura le
confiere actividad catalítica o autocatalítica.
Ejm.: Permite degradar otras moléculas de ARN
 ANR antisentido

ARN monocateriano que se une por complementareidad al

ARNm diana e impide su traducción por la maquinaria de
síntesis proteica
 ARN de interferencia (ARNi)

Mecanismo de silenciamiento génico que

reconoce cadenas de ARN bicateriano.

Mecanismo de defensa contra cadenas de ARN exógenas o

dañinas (ARN viral y/o retrotransposones).

A diferencia del mecanismo del ARN antisentido, en el mecanismo

de silenciamiento por ARNi participan enzimas específicas: DICER y
el complejo RISC-Argonauta
 ARN largo de doble cadena
(dsRNA)

DICER

21-23 pb ARN corto de doble cadena

(siRNA) o micro (miRNA)

RISC+
Argonauta
(degrada la
hebra sentido)

ARN antisentido corto de

cadena simple

Unión por
complementareidad
al ARNm diana

ARNm diana cortado en

pequeños segmentos
 Premio Nobel de 2006
por el descubrimiento
del silenciamiento
génico mediado por
ARN de doble cadena.

Andrew Fire Craig Mello

 ARN de ARN
interferencia antisentido
Modificaciones post-Traduccionales

Ruptura proteolítica
Glicosilación
Fosforilaión
Acilación
Oxido-Reducción
Splicing de proteínas (inteínas)
Degradación